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    姜黃揮發(fā)油對禽致病性大腸桿菌的藥敏試驗

    2018-11-12 12:44:44潘百明何彩梅梁昌祥韋學豐周慧玲
    中國獸醫(yī)雜志 2018年7期
    關鍵詞:高敏賀州姜黃

    潘百明 , 何彩梅 , 梁昌祥 , 韋學豐 , 周慧玲

    (賀州學院食品與生物工程學院 , 廣西賀州542899)

    禽大腸桿菌病是由禽致病性大腸桿菌引起的一種傳染病,該病存在于世界各地的家禽中,引起心包炎、肝周炎、氣囊炎、腹膜炎、輸卵管炎、滑膜炎、大腸桿菌性肉芽腫和臍炎等病變,嚴重時會導致發(fā)病家禽出現敗血癥和死亡;禽致病性大腸桿菌存在多種血清型,對多種抗生素、磺胺類和呋喃類藥物都敏感,但極易產生耐藥性。本文在10個集約化養(yǎng)雞場分離出10個禽致病性大腸桿菌菌株,選用6種較為敏感(近期曾做過試驗)的抗生素做對照,用姜黃揮發(fā)油做藥敏試驗,尋找中藥防治禽大腸桿菌病的方法。

    姜黃別名毛姜黃、郁金,為姜科多年生草本植物;姜黃最主要的兩個活性成分為姜黃素及姜黃揮發(fā)油,是一種可以藥食兩用的植物香料[1],據國內外的相關研究報告,姜黃揮發(fā)油對致病性菌均有一定的抑菌活性[2],對大腸桿菌等具有抗菌活性,對金黃色葡萄球菌等作用較為明顯[3]。本試驗采用超聲波輔助提取法提取姜黃揮發(fā)油,對病禽分離出來的致病性大腸桿菌進行藥敏試驗,為有效防治禽大腸桿菌病提供參考。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1 姜黃片 購自賀州學院東區(qū)后門旁的瑞康藥店,產地為廣西,由安徽人民中藥飲片有限公司生產。

    1.1.2 試驗菌 由賀州學院微生物學實驗室分別從10個不同鄉(xiāng)鎮(zhèn)集約化養(yǎng)雞場病雞分離,根據病理變化、鏡檢、細菌培養(yǎng)特性和生理生化試驗,鑒定為致病性大腸桿菌。

    1.1.3 藥敏試紙 杭州天和微生物試劑有限公司的藥敏紙片。

    1.1.4 主要儀器 超聲波儀(JY98-3D):寧波新藝生物科技股份有限公司;立式壓力蒸汽滅菌鍋(YXQ-LS-100SⅡ):上海博訊實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠;循環(huán)水式多用真空泵(SHZ—DⅢ):河南省予華儀器有限公司;電子分析天平(FA2004):上海舜宇恒平科學儀器有限公司;電熱培養(yǎng)箱恒溫(DHP-9082):上海齊欣科學儀器有限公司;雙人雙面凈化工作臺(SW-CJ-2F):蘇州凈化設備有限公司。

    1.2 方法

    1.2.1 姜黃揮發(fā)油的提取 參照宋曰欽[4]等的提取方法提取姜黃揮發(fā)油,將姜黃片于粉碎機粉碎后,分別稱取3份30 g的姜黃粉末過30目的標準篩后置于洗凈干燥的三角瓶中,按1∶10的比例分別量取300 mL的石油醚于瓶里,分別放在超聲波清洗器里,設置溫度為20 ℃~30 ℃,功率為100 w,時間為30 min;經過超聲波處理后,抽濾,將濾液放在圓底燒瓶中,使用旋轉蒸發(fā)儀來濃縮濾液,溫度控制在60 ℃,直至冷凝管無液體滴落,產品在蒸餾瓶里,收集瓶里回收石油醚;將蒸餾瓶倒置在洗凈干燥后的小燒杯里,里面的油會緩慢流下來,靜置30 min,將3次所收集的揮發(fā)油混合放一起得到橙黃色的油狀的液體,避光保存?zhèn)溆?。經測定姜黃揮發(fā)油的含量為7%。

    1.2.2 姜黃揮發(fā)油的配制 將以上的揮發(fā)油用1%吐溫-80水溶液溶解并配制姜黃揮發(fā)油溶液的濃度為200 mg/mL、100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL、12.5 mg/mL、6.25 mg/mL的溶液。

    1.2.3 藥敏試驗

    1.2.3.1 姜黃揮發(fā)油抑菌濃度的選擇 取自病雞分離出來的大腸桿菌菌株,在無菌操作下于營養(yǎng)瓊脂平板以劃線方式將細菌均勻涂布到整個平板上;將牛津杯輕輕地放在平板上,將姜黃揮發(fā)油溶液慢慢倒入牛津杯,不可溢出,每個平板上放3個牛津杯,將各個濃度梯度做好標記,放置于恒溫培養(yǎng)箱37 ℃,培養(yǎng)24 h。

    1.2.3.2 姜黃揮發(fā)油對10個菌株的藥敏試驗 選用平時做過藥敏試驗較為敏感的環(huán)丙沙星、慶大霉素、丁胺卡那霉素、氟本尼考、多西環(huán)素、頭孢噻肟等6種抗生素和姜黃揮發(fā)油對10個不同大腸桿菌菌株做藥敏試驗,6種抗生素按藥敏紙片法做藥敏試驗,培養(yǎng)基為普通營養(yǎng)瓊脂;姜黃揮發(fā)油采用牛津杯法做藥敏試驗,選擇(1.2.3.1試驗)最佳濃度為25 mg/mL的姜黃藥物濃度,判斷標準見表1。

    表1 藥敏實驗判定標準

    2 結果與分析

    2.1 姜黃揮發(fā)油抑菌濃度 見表2。

    表2 姜黃揮發(fā)油在不同的濃度下的抑菌情況

    由表2可知,25 mg/mL姜黃揮發(fā)油濃度抑菌效果已達到高敏,大于此濃度的50 mg/mL、100 mg/mL和200 mg/mL 3個濃度均為高敏,因此在使用姜黃揮發(fā)油防治大腸桿菌病時并不是濃度越高越好,本試驗只設定200 mg/mL、100 mg/mL、50 mg/mL、25 mg/mL、12.5 mg/mL、6.25 mg/mL 6個姜黃揮發(fā)油濃度,試驗結果25 mg/mL濃度為最低抑菌(高敏)濃度,超過該濃度反而造成藥物浪費;小于該濃度的對大腸桿菌病達不到治療效果。

    2.2 姜黃揮發(fā)油(25 mg/ /mL)對10株大腸桿菌的藥敏結果 見表3。

    表3 姜黃揮發(fā)油及6種抗生素對10株大腸桿菌的藥敏結果

    從表3可以看到,10株大腸桿菌對姜黃揮發(fā)油均敏感,其中9株達到高敏;而6種抗生素有3種存在不同程度的耐藥性,這3種抗生素口服用藥比較方便,市場比較普遍,這可能在場內常用導致;較敏感的3種抗生素中,敏感性也存在差異,其中頭孢噻肟有產生耐藥的趨勢,如果長期使用會產生耐藥性。

    3 討論

    本試驗結果表明,姜黃揮發(fā)油對致病性禽大腸桿菌具有高度的敏感性,可以用于預防和治療禽大腸桿菌??;姜黃揮發(fā)油濃度為25 mg/mL,抑菌圈最大,抑菌作用較好,具有抑殺禽大腸桿菌的作用;可長期用作大腸桿菌病的治療藥物和預防保健藥物;由于大腸桿菌存在多種血清型,極易產生耐藥性,開發(fā)姜黃藥劑對于預防和治療禽大腸桿菌病有很重要的意義;集約化養(yǎng)雞場可以嘗試姜黃與抗生素配合使用,減少耐藥性的產生,也可以用姜黃粉碎拌入飼料進行預防,減少和預防禽大腸桿菌病的發(fā)生。

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