廣東省中山地區(qū)孕中期產前篩查血清標志物中位數(shù)方程的建立

梁培松，王結珍，王偉佳，陳 康，盧建強

(中山大學附屬中山醫(yī)院檢驗醫(yī)學中心，廣東中山 528403)

染色體異常是人類常見的重大出生缺陷，其中以唐氏綜合征(又名 21-三體綜合征)最為常見，其出生率約占新生兒的1/600～1/800[1]。不僅會給社會、家庭帶來沉重的經濟負擔，還會嚴重影響到我國的出生人口素質?，F(xiàn)今，進行產前篩查和產前診斷是防止染色體異?；純撼錾钣行У氖侄蝃2]。而產前血清標志物的檢測及產前篩查風險評估是最為常用的產前篩查和產前診斷手段，但不同的實驗室條件，不同的人群特征都有可能導致產前篩查血清標志物中位數(shù)的差異，最終導致孕婦血清標志物中位數(shù)倍數(shù)值(multiple of median，MOM)以及產前篩查風險評估結果的改變。各地區(qū)各實驗室應建立自己的血清標志物中位數(shù)方程，以提高篩查效率[3～5]。本研究擬對11 779例孕中期孕婦篩查數(shù)據(jù)進行分析，建立本地區(qū)孕婦孕中期產期篩查血清標志物中位數(shù)方程及體重校正方程，并研究其與各影響因素的相關性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2015～2017年臨床信息及標本采集均來自中山市各醫(yī)院產前檢查孕婦，納入標準：①對本研究患者知情同意；②超聲影像學檢查確定孕齡在105～146天內，單胎，并排除異常胎兒；③排除染色體異常生育史、死胎妊娠史孕婦；④孕婦年齡<35歲；⑤孕婦均追蹤隨訪至確認產下健康嬰兒。共納入11 779例孕中期婦女，孕婦年齡26±3.86歲，體重為53±8.29 kg。

1.2 試劑和儀器 采用德國SIEMENS公司生產的IMMULITE2000全自動化學發(fā)光免疫分析系統(tǒng)進行甲胎蛋白 (alpha-fetoprotein，AFP)、人絨毛膜促性腺激素 (human chorionic gonadotropin，HCG) 和游離雌三醇(unconjugated estriol 3，uE3)的檢測；所需試劑盒為德國SIEMENS公司的配套試劑；本實驗室已經通過了ISO15189認證，所有操作均嚴格按照本實驗室操作規(guī)程要求執(zhí)行。

1.3 方法

1.3.1 標本采集：標本采集前由護士與孕婦核對填寫的產前篩查申請單上的信息，包括姓名、出生日期，末次月經、體重、采樣日期等，孕齡的確定：月經規(guī)律者以末次月經推算，不規(guī)律者以雙頂徑(BPD)測量值為準?？崭共杉袐D非抗凝血3 ml，靜止1 h，3 000 r/min離心分離血清，24 h內完成標本檢測，檢測完畢后-70℃保存3年。

1.3.2 結果分析：本實驗室采用Prisca4軟件進行產前篩查風險評估，21-三體綜合征截斷值為1/270，18-三體綜合征截斷值為1/350，開放性神經管缺陷截斷值為2.5MOM。

1.4 統(tǒng)計學分析 使用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)的統(tǒng)計分析，采用spearman相關分析法分析孕齡、體重及年齡與AFP，HCG和uE3濃度的相關性；采用百分位數(shù)法確定中位數(shù)值；通過加權回歸分析法，擬合不同曲線方程模型(指數(shù)、拋物線、對數(shù)、冪、線性、倒數(shù)曲線模型)，建立最佳曲線模型；本地化數(shù)據(jù)與軟件內置數(shù)據(jù)進行比較采用配對t檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 孕齡、體重及年齡與AFP，HCG，uE3濃度的相關性分析 孕齡與AFP，HCG和uE3中度相關(AFP：r=0.545，P=0.000；HCG：r=-0.515，P=0.000；uE3：r=0.761，P=0.00)；體重與AFP，HCG和uE3低度相關(AFP：r=-0.373，P=0.000；HCG：r=-0.316，P=0.000；uE3：r=-0.206，P=0.00)；年齡與AFP，HCG和uE3相關性極低，基本不相關(AFP：r=-0.050，P=0.000；HCG：r=-0.044，P=0.000；uE3：r=-0.103，P=0.134)。

2.2 建立中山地區(qū)AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)方程 檢測本地孕婦AFP，HCG和uE3濃度值，并通過百分位數(shù)法找出不同孕齡的原始AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)，通過加權回歸分析法擬合曲線模型，分別計算各自的校正決定系數(shù)，從中選擇最佳擬合曲線方程，見表1；并計算出相應的105～146孕天的本地AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)，本地不同孕齡AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)與軟件內置數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計學意義(AFP：T=17.042，P=0.000；HCG：T=2.217，P=0.032；uE3：T=2.444，P=0.019)。

表1最佳AFP，HCG，uE3濃度中位數(shù)曲線擬合方程

項目曲線模型曲線方程決定系數(shù)AFPHCGuE3指數(shù)曲線拋物線拋物線Y=4.222 9e0.020 8XY=12.613X2-3 659.5X+279 801Y=0.000 25X2-0.026 64X+0.477 870.9830.9760.993

2.3 建立中山地區(qū)AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM體重校正曲線方程 將本地孕婦AFP，HCG和uE3濃度換算成MOM值，并通過百分位數(shù)法找出各體重相應中位數(shù)，通過加權回歸分析法擬合不同曲線模型，決定系數(shù)最大者即為最佳的體重校正曲線方程，具體見表2；通過校正方程計算出本地AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM相應的35 kg～120 kg體重校正中位數(shù)。本地AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM的不同體重校正中位數(shù)與軟件內置數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計學意義(AFP-MOM：T=-3.907，P=0.000；HCG：T=-312.784，P=0.000；uE3：T=9.915，P=0.000)。

表2體重校正最佳擬合曲線模型

2.4 中山地區(qū)人群模型所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值與軟件內置數(shù)據(jù)所得比較 分析2015～2017年于我院進行孕中期產前篩查的結果，中山地區(qū)人群模型所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分別為：1.00，1.00和0.99；軟件內置數(shù)據(jù)所得AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分別為：1.07，0.92和1.04。

3 討論

本研究通過分析年齡、體重和孕齡與血清標志物濃度之間的相關性，發(fā)現(xiàn)年齡與AFP，HCG和uE3相關程度弱，基本不相關；體重與AFP，HCG和uE3呈低度相關；孕齡與AFP，HCG和uE3呈中度相關，較龍耀等[4]人研究的結果不同，可能因人群、檢測方法不同導致。從研究結果表明，在小于35歲的孕婦內部可以忽略年齡對三種血清標志物的影響，而體重和孕齡與三種血清標志物濃度呈現(xiàn)出低到中度的相關性，因此進行標準化后除去體重和孕齡的影響，更易于檢查結果的評估分析。

目前研究發(fā)現(xiàn)，產前篩查血清標志物結果的高低不僅與胎兒染色體異常有關，而且與胎兒特納綜合征不良產科結果[6]、孕婦子癇前期的預測[7]、新生兒高膽紅素血癥的預測[8]等也有一定的相關性。但血清標志物濃度的高低不僅受孕婦體重和孕齡的影響，而且受不同的實驗室條件、不同人群特征和儀器試劑等的影響[9～11]。據(jù)何法霖等[12]人調查分析顯示，2015年全國477家孕中期產前篩查實驗室中竟有350家實驗室未建立修改過產前篩查風險評估軟件參數(shù)，嚴重影響了產前篩查的質量。本研究通過對11 779例孕中期婦女三種血清標志物檢測結果的回顧分析，計算出了本地區(qū)105～146孕天的原始血清標志物中位數(shù)，并建立了本地區(qū)最佳的孕中期血清標志物濃度中位數(shù)方程。本地區(qū)不同孕齡的AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)與軟件內置數(shù)據(jù)比較差異有統(tǒng)計學意義。在血清標志物濃度中位數(shù)數(shù)據(jù)庫建立的基礎上進行體重校正，建立本地區(qū)本實驗室的AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM體重校正方程，本地區(qū)不同體重AFP-MOM，HCG-MOM和uE3-MOM中位數(shù)與軟件內置數(shù)據(jù)比較差異也有統(tǒng)計學意義。

分析表明，軟件內置中位數(shù)存在一定的偏差，應建立本地區(qū)，本實驗室的AFP，HCG和uE3濃度中位數(shù)方程及體重校正方程。

中位數(shù)倍數(shù)值中位數(shù)(median MOM，mMOM)是指一段時間內篩查指標的所有檢測樣本MOM值的中位數(shù)。長期監(jiān)測其數(shù)值的穩(wěn)定性可以作為實驗室一個重要而又有效的全面產前篩查質量控制手段。一個理想的穩(wěn)定的指標應該穩(wěn)定在0.95～1.05范圍內[13]。通過分析2015～2017年所有孕婦MOM值，發(fā)現(xiàn)內置軟件所得的孕婦AFP-mMOM偏離了1.05的高限及0.95的低限，而運用新的數(shù)據(jù)庫所得的AFP-mMOM，HCG-mMOM和uE3-mMOM值分別為1.00，1.00和0.99，結果更接近1.00。分析說明本地區(qū)所得的數(shù)據(jù)更能實現(xiàn)0.95～1.00的長期穩(wěn)定。

綜上所述，建立符合中山地區(qū)的孕中期婦女產前篩查標志物中位數(shù)方程及其體重校正方程是產前篩查實驗室質量控制的保證，勢在必行。