正交設(shè)計(jì)優(yōu)選白芍的樟幫法炮制白芍工藝研究

羅晶 雷志強(qiáng) 王雅琪

摘 要 為探討樟幫法生白芍的最佳浸潤(rùn)條件與切制工藝，以芍藥苷含量、芍藥內(nèi)酯苷含量、水溶性浸出物含量為指標(biāo)，選擇浸潤(rùn)溫度、浸潤(rùn)時(shí)間、悶潤(rùn)時(shí)間和切片厚度4個(gè)因素，采用L9（34）正交設(shè)計(jì)，綜合評(píng)分法優(yōu)選白芍的炮制工藝。結(jié)果表明，樟幫生白芍的最佳浸潤(rùn)與切制工藝為加60 ℃的水，浸潤(rùn)1 h，悶潤(rùn)72 h，飲片切制厚度0.5 mm。

關(guān)鍵詞 白芍 ；正交設(shè)計(jì) ；樟幫法 ；炮制工藝

中圖分類號(hào) S511 ；R282 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2018.07.017

Abstract In order to investigate the best infiltration and slicing technology of Radix Paeoniae Alba processed by the Zhangbang method， a L9（34） orthogonal design was arranged with the content of paeoniflorin， albiflorin， water-soluble extractives in radix as indicators， and the infiltrating temperature， infiltrating time， moistening time and slice thickness as the factors to evaluate the processing technologies for Radix Paeoniae Alba. The results showed that the best infiltration and slicing technology was to infiltrate Radix Paeoniae Alba for 1 hr in the 60℃ water， moisten it for 72 hours， and slice it with a thickness of 0.5 mm.

Key words Radix Paeoniae Alba ； orthogonal design ； Zhangbang method ； processing technology

白芍為毛莨科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根[1]，味苦、酸，性微寒。主要含有芍藥苷（paeoniflorin）、芍藥內(nèi)酯苷（albiflorin）、羥基芍藥苷（hydroxy-paeoniflorin）、苯甲酰芍藥苷（benzoyl-paeoniflorin）和苯甲酰羥基芍藥苷（benzoylhy-droxypaeoniflorin）等單萜苷類和苯甲酸、沒食子酸、兒茶素、鞣質(zhì)等多種化學(xué)成分[2-6]。《中國(guó)藥典》2015年版收載，白芍為芍藥根經(jīng)去皮水煮后的加工炮制品[7-9]。白芍多用其炮制品入藥，而浸潤(rùn)和切制是白芍炮制的必備過程。

江西的中藥飲片炮制歷史悠久，在長(zhǎng)期發(fā)展過程中，形成了獨(dú)具區(qū)域特色的以“樟樹幫”為代表的江西中藥炮制技術(shù)[10-15]。然而，樟幫炮制飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍然處于空白狀態(tài)，判斷標(biāo)準(zhǔn)依然依賴于老藥工的經(jīng)驗(yàn)，尚無“炮制規(guī)范”可循，缺乏系統(tǒng)的研究。樟幫法收載的白芍以浸、泡、潤(rùn)、切為其特點(diǎn)，生品薄片的悶潤(rùn)程度尤其重要，其直接影響后面的切制工藝，實(shí)際操作起來往往因水浸時(shí)間長(zhǎng)短不等造成藥材有效物質(zhì)基礎(chǔ)的流失差別不一，按照藥材質(zhì)量生產(chǎn)工藝規(guī)范化管理，很有必要對(duì)其數(shù)量化[16]。本文就樟幫法中的浸潤(rùn)與切制工藝對(duì)白芍飲片質(zhì)量的影響進(jìn)行探討，以期建立一套規(guī)范的白芍炮制工藝。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

高效液相色譜儀Agilent1200，HH-2數(shù)字顯示恒溫水浴鍋（常州國(guó)華儀器有限公司），金利牌超聲波清洗器，TG328 B分析天平（浙江象山縣石浦海天電子儀器廠）。

1.1.2 試劑

乙腈為色譜純，甲醇、95%乙醇、磷酸均為分析純，水為二次蒸餾水；藥品：芍藥苷（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110736-200629），芍藥內(nèi)酯苷（DELTA天然有機(jī)化合物信息中心，批號(hào)20070591）；樣品購(gòu)自樟幫中藥飲片廠，安徽亳州產(chǎn)，由江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室褚小蘭教授鑒定為毛茛科植物芍藥（Paeonia lactiflora Pall.）的干燥根。白芍飲片切制委托江西中醫(yī)院中藥制劑科炮制室按實(shí)驗(yàn)要求加工而成。

1.2 方法

1.2.1 浸潤(rùn)與切制

依據(jù)《中國(guó)藥典》2005年版（一部）附錄ⅡD關(guān)于藥材炮制通則的有關(guān)規(guī)定，將藥材凈制后，加飲用水浸潤(rùn)一定時(shí)間使其柔軟，少泡多潤(rùn)，以防有效成分流失。按藥材的大小、粗細(xì)、軟硬程度等不同分別處理。以溶劑浸潤(rùn)溫度、浸泡時(shí)間、悶潤(rùn)時(shí)間和飲片切制厚度為因素，按照L9（34）正交設(shè)計(jì)表設(shè)計(jì)試驗(yàn)，優(yōu)選軟化切制工藝（表1）。

1.2.2 浸出物含量測(cè)定

按中國(guó)藥典浸出物含量測(cè)定方法熱浸法測(cè)定浸出物含量[2]。

1.2.3 供試品溶液制備

各樣品經(jīng)粉碎后過4號(hào)篩，分別精密稱取各炮制品3份，每份0.2 g于50 mL量瓶，75%乙醇為溶劑，超聲提取30 min，放冷，加75%乙醇至刻度，搖勻，過濾。取供試品樣品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，記錄芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷峰面積，計(jì)算含量。

1.2.4 芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷含量測(cè)定

（1）色譜條件：Diamonsil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈（B）、0.05%磷酸水溶液（A），梯度洗脫條件：分析時(shí)間0～20 min，A 15%～18%，B 85%～82%；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)230 nm；柱溫：室溫（25℃）；進(jìn)樣量20 μL。

（2）線性范圍考察。精密吸取不同濃度的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣20 μL，按上述色譜條件測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積吸收值為縱坐標(biāo)（Y），以含量為橫坐標(biāo)（X）繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

（3）精密度試驗(yàn)和重復(fù)性試驗(yàn)。分別精密吸取2個(gè)對(duì)照品溶液20 μL入高效液相色譜儀，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算RSD值。重復(fù)上述方法，精密稱取同一樣品6份，每份0.1 g，按供試品溶液制備方法進(jìn)行提取處理后，按上述色譜條件進(jìn)行分析測(cè)定。

（4）穩(wěn)定性試驗(yàn)與回收率試驗(yàn)。精密稱取樣品，按供試品溶液制備，分別放置2、4、8、16、24、48 h后，按上述色譜條件測(cè)定，確定芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在48 h內(nèi)的穩(wěn)定性。并且采用加樣回收法對(duì)樣品進(jìn)行回收率試驗(yàn)，準(zhǔn)確加入芍藥內(nèi)酯苷對(duì)照品溶液（60.21 μg/mL）、芍藥苷對(duì)照品溶液（75.02 μg/mL），按選定色譜條件測(cè)定。

1.2.5 驗(yàn)證試驗(yàn)

取藥材3份，按優(yōu)選工藝進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)定芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷的含量及浸出物含量，求綜合評(píng)分值。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理

運(yùn)用Excel 2003和DPS 7.05軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷含量測(cè)定

對(duì)芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷線性范圍考察結(jié)果表明，芍藥苷在10.93～350 μg/mL線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=19.534X-39.528，相關(guān)系數(shù)r=0.999 9；而芍藥內(nèi)酯苷在6.25～200 μg/mL線性關(guān)系良好，回歸方程為Y=17.383X-25.16，相關(guān)系數(shù)r=0.999 4。芍藥內(nèi)酯苷和芍藥苷RSD分別為1.8%和2.0%（圖1），重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：芍藥內(nèi)酯苷平均含量為1.34%，RSD為2.12%；芍藥苷平均含量為1.99%，RSD為1.19%（圖2）。穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，芍藥苷和芍藥內(nèi)酯苷在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差RSD分別為1.74%和2.09%。同時(shí)，芍藥內(nèi)酯苷平均加樣回收率為99.90%，RSD為1.70%，芍藥苷平均加樣回收率為98.01%，RSD為1.49%。

2.2 優(yōu)選白芍飲片浸潤(rùn)與切制工藝條件

白芍飲片浸潤(rùn)與切制工藝條件的優(yōu)選結(jié)果按照上述實(shí)驗(yàn)方法，分別以芍藥苷含量、芍藥內(nèi)酯苷含量、水溶性浸出物含量為指標(biāo)（其綜合評(píng)分比例分別為4∶5∶1），進(jìn)行正交試驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2，結(jié)果分析見表3。

直觀分析結(jié)果，影響因素的大小順序?yàn)椋篋>A>B>C。由方差分析可以看出，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，因素飲片切制厚度（D）對(duì)白芍的軟化切制有顯著影響，結(jié)合直觀分析和方差分析及生產(chǎn)實(shí)際，最佳工藝為D1A3B1C3，即白芍飲片軟化切制的最佳方案為：加60℃的水，浸潤(rùn)時(shí)間1 h，悶潤(rùn)時(shí)間72 h，飲片切制厚度為0.5 mm 。

按優(yōu)選工藝進(jìn)行重復(fù)驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)定芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷的含量及浸出物含量，結(jié)果分別為83.00、82.98、83.03，RSD小于2%。該驗(yàn)證試驗(yàn)表明，正交試驗(yàn)優(yōu)選的工藝較佳，實(shí)驗(yàn)結(jié)果理想。

2.3 樟幫法生白芍工藝的確定

樟幫法生白芍分白芍薄片和普通白芍飲片，白芍薄片由于其自身薄的特點(diǎn)使其易碎不易保存只能作為生品入藥，而普通白芍飲片則不僅可作為生品，還可以進(jìn)一步炮制（如酒炒等），由于試驗(yàn)條件和實(shí)際操作的限制，故樟幫法生白芍薄片最佳工藝為：取原藥材，揀去雜質(zhì)、大小分檔加60℃的水，浸潤(rùn)時(shí)間1 h，悶潤(rùn)時(shí)間72 h，飲片切制厚度為0.5 mm；樟幫法生白芍普通飲片最佳工藝為：取原藥材，揀去雜質(zhì)、大小分檔加60℃的水，浸潤(rùn)時(shí)間1 h，悶潤(rùn)時(shí)間72 h，飲片切制厚度為2 mm。

3 結(jié)論

白芍藥材質(zhì)地堅(jiān)硬，需較長(zhǎng)時(shí)間的浸潤(rùn)才能潤(rùn)透，但水量不宜過多，以免傷水。白芍切制時(shí)應(yīng)大小分檔，《中國(guó)藥典》2005年版（一部）規(guī)定，白芍應(yīng)切為薄片，因此考察的切片厚度定為0.5～4 mm。

不同規(guī)格的白芍飲片中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷含量變化明顯，可見細(xì)化飲片切制厚度，規(guī)范軟化工藝是直接控制有效物質(zhì)流失關(guān)鍵。因此建立合理的浸潤(rùn)切制工藝參數(shù)，有助于減少藥材有效物質(zhì)基礎(chǔ)的流失。從而保證臨床用藥可獲得穩(wěn)定的療效。

樟幫法以白芍（薄片）切至“白芍飛上天”的程度為最佳，也使其成為具有特色的“樟樹幫”炮制工藝的商品飲片。然而，樟幫炮制飲片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)仍然處于空白狀態(tài)，尚無“炮制規(guī)范”可循，判斷標(biāo)準(zhǔn)依然依賴于老藥工的經(jīng)驗(yàn)。本試驗(yàn)選擇不同指標(biāo)結(jié)合綜合評(píng)價(jià)優(yōu)化炮制工藝條件，為白芍中藥軟化切制工藝優(yōu)選提供了較為科學(xué)全面的思路，也符合中醫(yī)藥治療疾病多成分綜合作用的特點(diǎn)。

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