不同初加工方式對(duì)裸花紫珠主要化學(xué)成分含量影響

譚湘杰 于福來 黃梅 楊全 唐曉敏 李偉 龐玉新

摘 要 為研究不同初加工方式對(duì)裸花紫珠主要化學(xué)成分含量的影響，采用蒸氣殺青5 min后不同溫度干燥，以及不經(jīng)殺青不同溫度直接干燥處理新鮮裸花紫珠成熟葉，之后采用HPLC高效液相色譜法和UV紫外分光光度法對(duì)不同處理的樣品進(jìn)行含量測(cè)定。結(jié)果表明：不同初加工方式間裸花紫珠主要化學(xué)成分含量具有顯著性差異（p<0.05），其中，蒸氣殺青5 min后干燥的裸花紫珠化學(xué)成分含量顯著高于直接干燥（p<0.05），并以殺青后55℃烘干處理的化學(xué)成分含量最高。因此，本研究得出，加工干燥過程中蒸汽殺青前處理可減少裸花紫珠主要化學(xué)成分含量的損失，適宜在其生產(chǎn)加工中推廣。

關(guān)鍵詞 裸花紫珠 ；初加工 ；化學(xué)成分

中圖分類號(hào) S377 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2018.07.008

Abstract The fresh mature leaves of Callicarpa nudiflora were dried under different temperatures after steam treatment for 5 minutes or without steam treatment to analyze the contents of their main chemical constituents. Different processed samples were determined by using HPLC and UV spectroscopy. The results showed that there were significant differences in the contents of major chemical constituents of C. nudiflora （p<0.05） between the steam treatment and the non-steam treatment. The C. nudiflora dried after steam treatment for 5 minutes had higher content of chemical composition than that dried directly without steam treatment （p<0.05）. The drying treatment at 55℃ contained the highest chemical constituents. Therefore， it was concluded that pre-treatment for deactivation of enzymes can reduce the loss of chemical constituents of C. nudiflora leaves during drying， and was suitable for promotion in the production and processing.

Keywords Callicarpa nudiflora ； primary processing ； chemical composition

裸花紫珠（Callicarpa nudiflora Hook. et Arn.）為馬鞭草科紫珠屬植物，為海南地道藥材，通常以葉片入藥，具有抗炎止血的藥理活性[1]。栽培資源主要分布于白沙縣、五指山市等地區(qū)[2]，主要含有黃酮、皂苷和酚酸類成分[3-7]。以往的研究表明，不同初加工方式對(duì)中藥材的主要化學(xué)成分影響十分顯著，其中蒸氣殺青為葉類中藥材常用的干燥前處理手段，且能夠明顯保留某些中藥材有效成分。如綠茶經(jīng)殺青后，蛋白質(zhì)含量下降，而游離氨基酸總量增加，并產(chǎn)生茶葉特有的香氣[8]；董娟娥等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，殺青處理與不殺青樣品比較，大青葉中靛藍(lán)、靛玉紅的含量呈增加趨勢(shì)，其中，靛玉紅以殺青陰干處理含量最高，靛藍(lán)以殺青70℃干燥處理含量最高，結(jié)果均說明，殺青能夠有效保留相關(guān)中藥材中的有效成分。

生產(chǎn)上裸花紫珠藥材通常以曬干為主，而關(guān)于其初加工方式的研究鮮有報(bào)道。因此，本研究通過比較殺青與不殺青處理后不同干燥溫度下裸花紫珠化學(xué)成分含量變化，分析不同初加工方式對(duì)裸花紫珠化學(xué)成分含量的影響，以期為裸花紫珠藥材規(guī)范化加工生產(chǎn)提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

所用樣品均于2017年10～12月采自于農(nóng)業(yè)部儋州熱帶藥用植物種質(zhì)資源圃，所有材料均為生長(zhǎng)于同一區(qū)域3年生的健康裸花紫珠成熟葉片。對(duì)照：咖啡酸（生產(chǎn)批號(hào)Y17D6C7672）、連翹酯苷B（生產(chǎn)批號(hào)20140120）、木犀草苷（生產(chǎn)批號(hào)Y23S7H21785）、毛蕊花糖苷（生產(chǎn)批號(hào)PMO321SA14）、異毛蕊花糖苷（生產(chǎn)批號(hào)HA0820KA29）、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷（生產(chǎn)批號(hào)P20N6F6297，以下簡(jiǎn)稱芹菜素糖苷）、木犀草素（生產(chǎn)批號(hào)YO1D6S6815）、蘆?。ㄉa(chǎn)批號(hào)P29D4F6327）、沒食子酸（生產(chǎn)批號(hào)Y15D6R6713）、齊墩果酸（生產(chǎn)批號(hào)20170423）均采購于上海源葉生物制藥公司，純度均在98%以上。

1.2 方法

1.2.1 樣品加工

將裸花紫珠鮮葉充分混勻，均分為12份，每份100 g，使用網(wǎng)袋裝好。取其中6份進(jìn)行蒸氣殺青5 min 處理后與剩余6份鮮葉，分別以陰干、37、55、65、75和85℃烘干處理至葉樣恒重，將處理好的葉樣打粉過20目篩，收裝在自封袋中于低溫冰箱中保存。重復(fù)加工鮮葉樣品2次，共計(jì)24份樣品。

1.2.2 供試品制備方法和浸膏得率測(cè)定

供試品制備方法：稱取1 g裸花紫珠粉末置于100 mL離心管中，加入70%甲醇50 mL，在40 kHz、功率為400 W的超聲條件下提取20 min后，吸取上層清液后使用0.22 μm的微孔濾膜過率即得供試品溶液。

浸膏得率測(cè)定方法：稱取裸花紫珠粉末5 g，采用超聲醇提法，提取時(shí)間為42 min、料液比為1∶17、乙醇濃度為62%、提取2次，將所得濾液轉(zhuǎn)置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，在65℃下濃縮7 min后轉(zhuǎn)至于干燥至恒重的蒸發(fā)皿中，在鼓風(fēng)干燥機(jī)中烘干至恒重，記錄蒸發(fā)皿重，減去空皿重，即得浸膏重量，再除以裸花紫珠粉末重量5 g即得浸膏得率。重復(fù)測(cè)定樣品3次。

1.2.3 單體化學(xué)成分含量測(cè)定

7種單體成分含量測(cè)定方法參照譚湘杰等[10]所建立的HPLC法測(cè)定。色譜條件：色譜柱Agilent-TC C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）； 流動(dòng)相為乙腈（A）-0.4%磷酸（B），梯度洗脫：0～30 min，8%～16% A；30～45 min，16%～21% A；45～55 min，21%～24% A；55～65 min，24%～35% A；65～70 min，35%～100% A；流速1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)330 nm；柱溫30℃；進(jìn)樣量10 μL，每份樣品均重復(fù)測(cè)定3次。將所得數(shù)據(jù)帶入已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，求得各單體成分含量。

1.2.4 有效部位含量測(cè)定

有效部位含量測(cè)定方法參考顏小捷等[11]和寧德生等[12]的方法，供試品溶液中不同有效部位采用相關(guān)顯色方法后，使用UV紫外分光光度法對(duì)3種有效部位的吸光度進(jìn)行測(cè)定，每份樣品均重復(fù)測(cè)定3次。將所得數(shù)據(jù)帶入已建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線中，求得各有效部位含量。

1.2.5 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析、Duncan's多重比較和主成分分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同加工方式對(duì)有效部位含量及浸膏得率影響

由表1和圖1可知，裸花紫珠樣品經(jīng)不同方式處理后，有效部位（總黃酮、總酚酸、總皂苷）含量、浸膏得率以蒸氣殺青處理5 min后干燥 （以下稱殺青干燥）高于直接干燥處理（以下稱直接干燥），僅總皂苷含量在陰干、37℃處理下是直接烘干的樣品含量稍高于殺青烘干，但差異不顯著；總黃酮含量以殺青55℃處理的裸花紫珠樣品含量最高，可達(dá)344.420 mg/g，以烘干85℃處理含量最低，為47.596 mg/g；總酚酸含量以殺青陰干處理含量最高，為128.331 mg/g，以85℃烘干處理最低，為12.031 mg/g；總皂苷含量以37℃烘干處理最高，為123.279 mg/g，以85℃烘干最低，為56.709 mg/g。

2.2 不同加工方式對(duì)單體成分含量的影響

從表2和圖3可知，除木犀草苷、木犀草素在37℃直接烘干處理含量最高外，裸花紫珠各單體成分含量均以殺青干燥處理高于直接烘干處理。其中，連翹酯苷B、毛蕊花糖苷和7個(gè)單體成分含量總和以殺青55℃烘干最高（分別為6.716、84.653和103.085 mg/g），咖啡酸和芹菜素糖苷含量以殺青后陰干最高（分別為0.054和0.327 mg/g），異毛蕊花糖苷含量以殺青后高溫烘干較高（10.176 mg/g），而木犀草苷和木犀草素含量最高值出現(xiàn)在直接37℃烘干處理（分別為3.828和0.249 mg/g）。同時(shí)，殺青干燥后的樣品單體成分對(duì)干燥溫度的響應(yīng)較小，而直接干燥的樣品隨著干燥溫度升高其成分損失較大，各成分在65℃以上干燥時(shí)，呈現(xiàn)較明顯的下降趨勢(shì)（其中咖啡酸低于檢測(cè)限），裸花紫珠7種單體成分色譜圖見圖2。

2.3 不同加工方式化學(xué)成分主成分分析

基于3種有效部位、浸膏得率及7種單體成分共11個(gè)指標(biāo)，采用SPSS進(jìn)行主成分分析，選取特征值大于1的成分為主成分，可見有 2個(gè)主成分，并且這2個(gè)主成分的方差累計(jì)貢獻(xiàn)率達(dá) 86.772%，能夠充分解釋原有所有指標(biāo)成分的信息。所以，將選擇這2個(gè)主成分代表所有因子進(jìn)行藥材品質(zhì)的分析，詳見表3。

采用主成分進(jìn)行綜合得分分析并對(duì)不同初加工方式進(jìn)行排序，每種加工方式按照下列公式進(jìn)行計(jì)算Y=9.577/（9.577+1.704）×主成分得分1+1.704/（9.577+1.704）×主成分得分2，化簡(jiǎn)為Y=0.848×主成分得分1+0.152×主成分得分2，主成分分析綜合排序詳見表4。同樣可以發(fā)現(xiàn)，殺青后成分含量高于直接烘干處理，且殺青處理后以55℃烘干較為適宜。

3 討論

蒸氣殺青處理5 min不同溫度干燥（以下稱殺青干燥）對(duì)裸花紫珠化學(xué)成分保留效果優(yōu)于不殺青不同溫度直接干燥處理（以下稱直接干燥）：裸花紫珠樣品經(jīng)不同處理方式處理后，有效部位（總黃酮、總酚酸、總皂苷）含量、浸膏得率、單體成分含量基本上以殺青干燥高于直接干燥。裸花紫珠的傳統(tǒng)加工方式一般是以曬干為主，受天氣影響較大，干燥時(shí)間較長(zhǎng)，藥材質(zhì)量也不穩(wěn)定，而關(guān)于其初加工方式的研究少見報(bào)到。本研究采用多種有效成分作為裸花紫珠的質(zhì)量質(zhì)控指標(biāo)，并采用主成分分析法進(jìn)行驗(yàn)證，對(duì)比考察了殺青干燥與直接干燥處理的裸花紫珠主要有效成分含量變化，研究表明，以殺青干燥55℃最為適宜，干燥時(shí)間短，有效成分含量高，與其他葉類中藥材殺青處理后成分含量呈現(xiàn)相同規(guī)律[8-9]。

不同初加工方式是讓新鮮藥材變?yōu)樯唐匪幉年P(guān)鍵的一步，中藥在初加工過程中會(huì)對(duì)中藥原藥材進(jìn)行水分處理、發(fā)汗、切制及烘干等操作，不同初加工方式會(huì)使中藥固有成分發(fā)生變化或損失。選擇科學(xué)合理的加工方式對(duì)提高中藥材藥效成分或降低有毒成分含量有著顯著的影響[13-14]。據(jù)報(bào)道，鮮葉被采摘后，其葉內(nèi)原果膠酶、轉(zhuǎn)化酶、β-糖苷酶、淀粉酶、蛋白酶活力大大增強(qiáng)，促使淀粉水解成為糖、蛋白質(zhì)水解成為氨基酸、類脂和果膠水解出多種有機(jī)酸[15]；而殺青作為葉類中藥材初加工的常用手段之一，殺青過程中的熱化學(xué)變化，可迅速滅活植物細(xì)胞和能使相關(guān)成分降解的酶[16-17]。隨著現(xiàn)代技術(shù)不斷進(jìn)步，現(xiàn)代殺青手段也越來越多，如微波殺青、熱風(fēng)殺青[18-19]等，能夠?qū)崿F(xiàn)快速有效干燥藥材，減少實(shí)際生產(chǎn)過程中相關(guān)步驟以及初加工時(shí)間。故接下來可考察多種殺青方法對(duì)裸花紫珠的化學(xué)成分含量影響以及探討殺青過程相關(guān)酶的變化，以實(shí)現(xiàn)快速滅活相關(guān)酶保留有效成分的目的。

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