抗C1q抗體及補(bǔ)體C3、C4在神經(jīng)精神性狼瘡診斷中的應(yīng)用價值

吳 雪 羅采南 石亞妹 孟新艷 武麗君

(新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，烏魯木齊830001)

系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE) 是一種累及全身多個系統(tǒng)的自身免疫性疾病。目前，SLE的發(fā)病機(jī)制還不清楚，但是越來越多的研究發(fā)現(xiàn) SLE 患者中存在細(xì)胞死亡過多、過度凋亡及清除障礙等特點，大量凋亡小體的產(chǎn)生及對凋亡細(xì)胞清除障礙導(dǎo)致自身抗原暴露，產(chǎn)生大量自身抗體從而導(dǎo)致疾病的發(fā)生。C1q 是固有免疫補(bǔ)體經(jīng)典途徑的始動因子C1的組成成份，它與抗原抗體復(fù)合物結(jié)合，激活并啟動補(bǔ)體經(jīng)典途徑，在清除循環(huán)免疫復(fù)合物及凋亡細(xì)胞碎片中扮演著重要角色[1]。相關(guān)研究表明早期補(bǔ)體基因的缺失與系統(tǒng)性紅斑狼瘡的發(fā)生有關(guān)，C1q純合子基因缺乏患者88%發(fā)展為SLE，30%發(fā)展為系膜毛細(xì)血管性腎小球腎炎[2-4]。SLE患者體內(nèi)存在諸多抗體，抗C1q抗體已被證明與狼瘡性腎病相關(guān)，但這些補(bǔ)體成份在系統(tǒng)性紅斑狼瘡其他系統(tǒng)中特別是神經(jīng)系統(tǒng)疾病中的致病作用并不清楚。近年國外的研究發(fā)現(xiàn)血清中C3、C4及抗C1q抗體升高與神經(jīng)精神性狼瘡(Neuropsychiatric systemic lupus erythematosus，NPSLE)相關(guān)，但國內(nèi)相關(guān)報道甚少[5-8]。

本文主要目的是分析抗C1q抗體及補(bǔ)體C3、C4與神經(jīng)精神性狼瘡的關(guān)系，探討抗C1q抗體及補(bǔ)體C3、C4在狼瘡性腦病中的應(yīng)用價值。

1 資料與方法

1.1資料

1.1.1研究對象 本實驗收集2009年至2017年就診于新疆維吾爾自治區(qū)人民醫(yī)院風(fēng)濕免疫科并確診的SLE患者88例，其中NPSLE患者22例，單純SLE患者66例。SLE的診斷符合美國風(fēng)濕病學(xué)會1997年修訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，狼瘡腦病患者診斷符合1999年美國風(fēng)濕協(xié)會制定的狼瘡性腦病分類標(biāo)準(zhǔn)[9]。分析患者血清C1q抗體與狼瘡腦病患者臨床表現(xiàn)、其他血清學(xué)指標(biāo)與狼瘡性腦病之間的關(guān)系，全部患者治療前抽取外周靜脈血分離血清儲存待檢抗C1q抗體，同期檢測各項免疫學(xué)指標(biāo)并記錄臨床癥狀。

1.2檢測方法 所有患者均抽取外周靜脈血經(jīng)4℃、1 000 g離心10 min后取血清，保存于-80℃待測。采用ELISA法測定抗C1q抗體，儀器為英國Thermo Labsystems-353酶標(biāo)儀，試劑由亞輝龍生物科技公司生產(chǎn)。采用免疫散射比濁法測定C3、C4，儀器為貝克曼5831全自動生化分析儀及配套試劑，操作均按說明書執(zhí)行。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 所有數(shù)據(jù)處理均采用SPSS20軟件包，數(shù)量符合正態(tài)分布，所有計量資料兩組間比較用t檢驗，不符合正態(tài)分布計量資料采用Mann-WhitneyU秩和檢驗。計數(shù)資料統(tǒng)計采用χ2檢驗。危險因素分析采用Logistic回歸檢驗。P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1兩組一般資料對比 本研究共納入88名患者，患者平均年齡為(37.6±12.4)歲，89.8%為女性，10.2%為男性，平均病程為(6.3±5.2)年。病例組22人，對照組66人，病例組平均年齡(29.8±10.4)歲，對照組平均年齡(40.2±12.0)歲，差異具有明顯統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)?；颊吲R床表現(xiàn)及各項指標(biāo)見表1。

2.2NPSLE與非NPSLE流行病學(xué)資料及抗體表達(dá)水平的比較 NPSLE組與非NPSLE組對比，年齡、性別、病程、抗核抗體、抗SSA抗體、抗核糖體P蛋白抗體、抗C1q抗體、補(bǔ)體C4對比，組間差異存在顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

2.3補(bǔ)體C3、C4及抗C1q抗體與NPSLE患者臨床表現(xiàn)相關(guān)性分析 NPSLE患者臨床表現(xiàn)見表2，狼瘡腦病患者臨床表現(xiàn)癲癇(6/22，27.3%)、認(rèn)知功能障礙(3/22，13.7%)、腦血管意外(12/22，54.5%)、狼瘡性頭痛(9/22，40.9%)、視神經(jīng)受累(3/22，13.6%)、記憶力減退(2/22，9.1%)、感覺障礙(1/22，4.5%)?？笴1q抗體、C3及C4與NPSLE臨床表現(xiàn)的結(jié)果顯示：C4降低與NPSLE患者腦血管意外有關(guān)，組間對比差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。而C3、C4及抗C1q抗體與癲癲癇、狼瘡性頭痛、視神經(jīng)受累、記憶力減退、感覺障礙組間對比差異無顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

2.4受試者工作特征曲線(ROC) 采用ROC曲線分析NPSLE與非NPSLE患者抗C1q抗體之間差異，ROC曲線下面成為0.66(P<0.05)， 當(dāng)以21 U/ml為臨界值時,其敏感性與特異性分別為63.6%、66.7%，提示其對NPSLE診斷具有一定價值，見圖1。

表1患者流行病學(xué)數(shù)據(jù)

Tab.1Epidemiologicaldataofpatients

DataNPSLE SLEPAge29.8±10.440.2±12.00.000Female/Male16/663/30.002SLE disease duration3.6±4.17.1±5.40.002SLEDAI21.5±86 5.1±4.00.000Autoantibodies and complementdsDNA113.5±123102.9±119.20.728ACL14.3±28.28.7±20.80.397B2-GPI 23±4715.5±35.9 0.495Nucleoson(ELISA) 89.4±77.747.0±61.60.011Anti-U1RNP 13(59.1%)29(43.9%)0.218Anti-SM4(18.2%)10(15.2%)0.086Anti-SSA/Ro52 7(31.8%)42(63.6%)0.009Anti-SSB/La 2(9.1%)10(15.2%)0.473Anti-HISTONES 5(22.7%)5(7.6%)0.052Anti-P PROT12(54.5%)13(19.7%) 0.002C318(81.8%)42(63.6%)0.113C419(86.4%)42(63.6%)0.045Anti-C1q54.7±58.422.5±29.00.001

表2神經(jīng)精神性系統(tǒng)性紅斑狼瘡腦病患者臨床表現(xiàn)

Tab.2Clinicalmanifestationsofneuropsychiatricsystemiclupuserythematosus

Central nervoussystem NPSLE syndromesNumber of casesSeizure disorder6Cognitive disorder 3Cerebrovascular disease12Headache9Optic neuropathy3Hypomnesis2Feeling obstacle 1

圖1 抗C1q抗體ROC曲線Fig.1 ROC curve of anti-C1q antibody

表3單因素及多因素分析狼瘡腦病發(fā)生的危險因素

Tab.3SinglefactorandmultifactoranalysisofriskfactorsofNPSLE

VariablesUnivariate analysisOR(95%CI)PMultivariate regression analysisOR(95%CI)PdsDNA 0.999(0.995,1.003)0.719ACL0.991(0.972,1.010)0.332β2-GPI 0.996(0.984,1.007)0.996Nucleoson0.991(0.985,0.998)0.0140.994(0.985,1.002) 0.130Anti-U1RNP 1.843(0.692,4.906)0.221Anti-SM 2.613(0.850,8.021)0.153 Anti-SSA0.267(0.095,0.745)0.012 3.197(0.987,10.354) 0.053Anti-SSB0.560(0.113,2.779)0.478Anti-P PROT4.892(0.528,9.031)0.003C30.389(0.118,1.283)0.121C40.276(0.740,1.031)0.0560.673(0.153,2.971)0.602Anti-C1q0.982(0.970,0.994)0.0040.990(0.977,1.003)0.137

2.5神經(jīng)精神腦病發(fā)生的危險因素分析 表3顯示了中樞神經(jīng)系統(tǒng)與各種臨床和實驗室表的潛在相關(guān)性，采用單因素回歸分析發(fā)現(xiàn)病例組與對照組相比，抗核小體抗體(OR=0.991,95%CI0.985-0.998,P=0.014)、Anti-SSA(OR=0.267,95%CI0.095-0.745,P=0.012)、Anti-P PROT(OR=4.892,95%CI0.528-9.031,P=0.003)、Anti-C1q抗體(OR=0.982,95%CI0.970-0.994,P=0.004)差異有統(tǒng)計學(xué)意義。但通過多因素分析后并未發(fā)現(xiàn)狼瘡腦病發(fā)生因素與C1q抗體升高及補(bǔ)體C3、C4降低相關(guān)。

3 討論

SLE患者神經(jīng)系統(tǒng)受累是一種普遍而嚴(yán)重的并發(fā)癥，死亡率約為7%～19%[10-12]。目前，SLE引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)受累的病理機(jī)制仍不清楚。補(bǔ)體系統(tǒng)激活與多種風(fēng)濕性疾病相關(guān)，特別是SLE。補(bǔ)體系統(tǒng)異常是導(dǎo)致SLE患者組織損傷的眾多因素之一，有關(guān)研究證明C1q、C1r、C1s、C4和C2的遺傳缺陷與SLE的發(fā)展有關(guān)[13]。SLE患者體內(nèi)存在著多種抗體，其中包含抗C1q抗體?？笴1q抗體存在于2%～8%的健康人群中，但在SLE患者中，高達(dá)30%～48%[14]?？笴1q抗體的存在往往伴隨著經(jīng)典補(bǔ)體途徑的激活及C1q、C4和C2的降低[15]。Thanei等[16]的研究證明，抗C1q抗體可以激活狼瘡患者體內(nèi)補(bǔ)體的經(jīng)典激活途徑和凝集素途徑。而兩種途徑均可合成補(bǔ)體C3，進(jìn)而生成C5轉(zhuǎn)換酶引起C5-C9的級聯(lián)激活最終形成膜攻擊復(fù)合物，造成機(jī)體損傷[17]。Jacob等[18]建立的小鼠模型證明，以C3開始的旁路激活途徑是SLE患者腦內(nèi)補(bǔ)體激活的重要機(jī)制，選擇性地抑制C3a受體，可以減輕SLE小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元的變性，旁路激活途徑中的C3a受體可能作為治療狼瘡腦病的靶點。此外，Mahajan等[19]的研究證明C5a可以誘導(dǎo)狼瘡小鼠腦血管內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡，C5a/C5aR1信號通路是狼瘡腦血管內(nèi)皮病變的決定因素，C5a/C5aR1信號通路可能是中樞神經(jīng)系統(tǒng)狼瘡治療靶點。相關(guān)研究證實，C1q及C3在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、衰老及神經(jīng)系統(tǒng)病變中發(fā)揮著重要作用[20-22]。所以近年來補(bǔ)體在自身免疫系統(tǒng)疾病中的作用得到了越來越多的重視，補(bǔ)體治療可能成為治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡的新方法。本文主要研究抗C1q抗體及補(bǔ)體C3、C4與中樞性狼瘡性腦病發(fā)生的關(guān)系。

本研究發(fā)現(xiàn)，病例組與對照組相比，發(fā)病年齡、性別相比組間差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中50%患者在SLE發(fā)病初期或確診兩年內(nèi)發(fā)生神經(jīng)精神性狼瘡，這與以往相關(guān)研究一致[23，24]。NPSLE患者C4、抗C1q抗體、抗核小體抗體及抗核糖體P蛋白抗體水平與非NPSLE患者相比，組間差異具有顯著(P<0.05)。且當(dāng)C1q水平為21 U/ml時，其診斷NPSLE的敏感性與特異性分別為63.6%、66.7%。其診斷價值明顯優(yōu)于抗核糖體P蛋白抗體，Karassa等[25]進(jìn)行的一項納入14項研究，涉及1 537例患者的Meta分析證明，抗核糖體P蛋白抗體診斷NPSLE的敏感性與特異性分別為28%、80%。所以，抗C1q抗體在診斷NPSLE患者中具有一定診斷價值，且優(yōu)于抗核糖體P蛋白抗體。

本研究還發(fā)現(xiàn)狼瘡腦病患者腦血管意外的發(fā)生與C4降低相關(guān)，這與國外研究一致。補(bǔ)體系統(tǒng)激活被認(rèn)為是導(dǎo)致SLE患者腦缺血疾病發(fā)生的重要機(jī)制。Lood等[26]的研究證明，C1q、C3d和C4d在血小板上的過多沉積與腦血管炎癥和血栓形成有關(guān)。Navratil等[27]提出的C4d附著的血小板是診斷SLE的特異性生物標(biāo)志物，且與狼瘡患者血管事件及血栓形成有關(guān),說明補(bǔ)體C4可能參與NPSLE患者腦血管意外事件的發(fā)生。

研究還發(fā)現(xiàn)病例組與對照組相比，抗C1q抗體、補(bǔ)體C4相比組間差異具有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。單因素分析顯示：抗核小體抗體、抗SSA抗體、抗核糖體P蛋白抗體、抗C1q抗體與NPSLE的發(fā)生相關(guān)，但多因素Logistic分析并未證明其與NPSLE發(fā)生的相關(guān)性。這可能是因為本研究納入中樞性狼瘡腦病患者均屬于活動期，而補(bǔ)體C3、C4及抗C1q抗體的滴度與狼瘡患者活動度明顯相關(guān)，從而造成病例組患者血清抗C1q抗體、C4及C3與非NPSLE存在差異，另外本研究為橫斷面研究，部分患者在治療過程中出現(xiàn)神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，所以還需要進(jìn)一步縱向研究探討補(bǔ)體系統(tǒng)與狼瘡腦病發(fā)生的關(guān)系。

綜上所述，抗C1q抗體在狼瘡腦病診斷中具有一定診斷價值，補(bǔ)體C4可能參與狼瘡腦病腦血管意外的發(fā)生。