miR-143、miR-145在胰腺癌患者血清中的表達情況及與患者臨床參數(shù)的相關(guān)性分析

郭飛波 韓利蓉 余 卉 陳玫君 宋 瑛

(湖北省天門市第一人民醫(yī)院檢驗科，天門431700)

胰腺癌(Pancreatic cancer,PC)為消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，侵襲性高、進展快速，患者預后效果差，死亡率高，2012年流行病學研究新發(fā)現(xiàn)胰腺癌病例8.6萬，而死亡病例高達7.7萬[1]。近年來，我國胰腺癌的發(fā)病率和死亡率也呈現(xiàn)逐年上升趨勢，外科手術(shù)雖然可以有效根除，但只適用于胰腺癌早期患者。microRNA(miRNA)是一類由內(nèi)源基因編碼，長度約為19～25個核苷酸的非編碼單鏈RNA分子，在維持人機體健康中發(fā)揮著重要作用[2]。研究發(fā)現(xiàn)，在胃癌、直腸癌、食管癌、膀胱癌和胰腺癌患者中，miR-143、miR-145在血清中的表達異常，其在腫瘤的發(fā)生和發(fā)展中發(fā)揮著重要作用[3]。因此，其調(diào)控異常被臨床廣泛認為是腫瘤發(fā)生的早期信號。本研究通過檢測胰腺癌患者血清中的miR-143、miR-145表達，并與健康對照組進行比較，探討胰腺癌患者miR-143、miR-145表達與健康對照組的差異，并分析胰腺癌患者血清中miR-143、miR-145表達與其臨床參數(shù)的相關(guān)性，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2016年8月～2017年12月收治的98例胰腺癌患者作為胰腺癌組，患者均通過術(shù)后病理檢查或胰腺穿刺活檢確診為胰腺癌，另選同期來我院健康體檢者50例作為健康對照組。胰腺癌組中，男80例，女18例，年齡32～75歲，平均年齡(57.57±6.25)歲，癌抗原125(CA125) 20.46～42.74 U/ml，平均(29.55±4.15)U/ml；癌抗原199(CA199)6.23～832.45 U/ml，平均(259.58±36.26)U/ml；癌抗原153(CA153)9.42～24.25 U/ml，平均(13.74±3.18)U/ml；T分期：T1期8例，T2期23例，T3期31例，T4期36例；N分期：N0期40例，N1期58例；M分期：M0期45例，M1期53例；腫瘤直徑1.7～6.5 cm，平均(3.03±0.52)cm；腫瘤部位：胰體頭部48例，胰體尾部50例。健康對照組中，男40例，男10例，年齡30～78歲，平均年齡(58.13±7.12)歲，兩組受試者性別、年齡一般資料比較差異無顯著統(tǒng)計學意義(P>0.05)。本研究受試者均知情同意，研究獲得醫(yī)院倫理委員會審批。

1.2治療 所有患者均接受立體定位放療，在CT掃描基礎(chǔ)上規(guī)劃放療的區(qū)域，針對原發(fā)腫瘤病灶及轉(zhuǎn)移病灶，外擴約1.0 cm，最大限度地將放射劑量集中到病變區(qū)(靶區(qū))內(nèi)進行放療，6 Gy/次，5次/周，總劑量不超過72 G。

1.3方法 采集所有入組對象的晨起空腹靜脈血4 ml，采血后立即送檢，在3 000 r/min離心處理后，用無RNA酶的2 ml EP管采集上清液，并將標本置于-80℃冰箱保存，胰腺癌組治療后再收集空腹靜脈血。根據(jù)miRcute miRNA 增強型提取分離試劑盒[天根生化科技(北京)有限公司生產(chǎn)]要求和步驟提取總miRNA，轉(zhuǎn)錄為cDNA后，采用熒光定量PCR反應(yīng)體系檢測受試者血清中miR-143和miR-145表達，試劑為miRcute增強型miRNA熒光定量檢測試劑盒，由天根生化科技(北京)有限公司提供。

2 結(jié)果

2.1胰腺癌組患者血清miR-143和miR-145指標與其他腫瘤標志物水平相關(guān)性 將miR-143和miR-145指標作為因變量，將腫瘤指標miR-143、miR-145、CA125、CA153和CA199作為自變量，進行Pearson相關(guān)性分析，發(fā)現(xiàn)胰腺癌組患者血清miR-143、miR-145與腫瘤標志物CA125、CA153和CA199無相關(guān)性(P>0.05)，但miR-143和miR-145有顯著相關(guān)性(P<0.05)。見表1。

2.2胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表達與臨床參數(shù)關(guān)系 胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表達與性別、年齡、T分期、N分析、M分期、腫瘤部位和腫瘤直徑比較無顯著差異(P>0.05)。見表2。

2.3胰腺癌患者年齡、性別、miR-143、miR-145與胰腺癌發(fā)病的Logistics回歸分析 將胰腺癌患者年齡、性別、miR-143、miR-145與胰腺癌發(fā)病的Logistics回歸分析，發(fā)現(xiàn)年齡、性別、miR-145與胰腺癌發(fā)病無密切關(guān)系(P>0.05)，血清miR-143為胰腺癌的保護因素(P<0.05)。見表3。

2.4胰腺癌組治療前后和健康對照組血清miR-143和miR-145表達水平對比 化療后，無1例患者死亡。與健康對照組比，胰腺癌組血清miR-143和miR-145表達水平顯著降低(P<0.05)；與治療前比，治療后胰腺癌組血清miR-143和miR-145表達水平顯著提高(P<0.05)，但與健康對照組比仍然較低(P<0.05)。見表4。

表1胰腺癌組患者血清miR-143和miR-145指標與其他腫瘤標志物水平相關(guān)性分析

Tab.1CorrelationbetweenserummiR-143andmiR-145markersandothertumormarkerinpatientswithpancreaticcancer

ProjectCA125CA153CA199miR-143miR-145miR-143r=0.104r=0.095r=-0.130r=1r=0.875P=0.563P=0.632P=0.485P=0P=0.000miR-145r=0.092r=0.104r=-0.213r=0.875r=1P=0.614P=0.527P=287P=0.000P=0

表2胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表達與臨床參數(shù)關(guān)系

Tab.2RelationshipbetweenserummiR-143andmiR-145expressionandclinicalparametersinpatientswithpancreaticcancer

Clinical pathologicalparametersCasesmiR-143tPmiR-145tPTotal980.321±0.052--0.473±0.057--SexMale800.320±0.0630.5080.6180.476±0.0631.0110.326Female180.328±0.0540.460±0.056Age≥60 year760.317± 0.0461.5250.1420.475±0.0650.6040.553<60 year220.336± 0.0660.466±0.046T stagingT1-T2310.325±0.0460.4460.6570.459±0.0561.8470.069T3-T4670.320± 0.0600.479±0.049N stagingN0400.334±0.0571.9420.0570.487±0.0511.9270.059N1580.313±0.0510.463±0.064M stagingM0450.327±0.0521.0520.2980.462±0.0531.7480.086M1530.316±0.0540.482±0.061Tumor sitePancreatic head480.325±0.0580.6150.5410.485±0.0641.9520.057Pancreatic tail500.318±0.0490.461±0.055Tumor diameter≥3.6 cm380.317±0.0450.5620.5760.462±0.0451.5390.129<3.6 cm600.324±0.0600.480±0.062

表3胰腺癌患者年齡、性別、miR-143、miR-145與胰腺癌發(fā)病的logistics回歸分析

Tab.3Regressionanalysisofage,sex,miR-143,miR-145andincidenceofpancreaticcancerinpatientswithpancreaticcancer

ProjectβWald valueP valueOR value95%CIAge0.5321.9580.1561.0430.954-1.132Sex-1.4033.2850.0650.2180.231-0.052miR-143-1.3104.3620.0320.2570.073-0.915miR-1450.4321.1200.2510.6320.221-1.430Constant-2.0372.6010.1070.130-2.037

表4胰腺癌組治療前后和健康對照組血清miR-143和miR-145表達水平對比

Tab.4ComparisonofserummiR-143andmiR-145express-ionlevelsinpatientswithpancreaticcancerbeforeandaftertreatmentandhealthycontrol

GroupsnmiR-143miR-145Healthy control group500.535±0.1520.711±0.202Before treatment inpancreatic cancer group980.321±0.0521)0.473±0.0571)After treatment inpancreatic cancer group980.421±0.1041)2)0.597±0.1541)2)F-77.64152.323P-0.0000.000

Note：Compared with the healthy control group,1)P<0.05；compared with the before treatment in pancreatic cancer group,2)P<0.05.

3 討論

胰腺癌在全世界范圍內(nèi)癌癥發(fā)病率中位居第13位，死亡率位居第8位，其發(fā)病率和死亡率在世界范圍內(nèi)均在不斷增加[4]。盡管當前外科手術(shù)、放射、化療等治療方法取得了一些進展，但胰腺癌患者總生存率仍然在5%以下。因此，探尋胰腺癌的發(fā)病機制，對于提高胰腺癌防治水平，延長患者生存期和降低死亡率具有重要的現(xiàn)實意義。近年來有諸多研究顯示，腫瘤細胞miRNA突變、異常表達會導致細胞去分化、腫瘤發(fā)生、侵襲或腫瘤細胞轉(zhuǎn)移[5]。諸多的miRNA基因位于基因組中經(jīng)常發(fā)生變異的區(qū)域，miRNA也與其他蛋白編碼基因一樣，會發(fā)生各種結(jié)構(gòu)變化，其在生物合成的過程中，受到多種蛋白酶的影響，若蛋白酶的結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變化，也會引起miRNA表達水平相應(yīng)改變，并參與腫瘤發(fā)生過程[6]。Calin等[7]在2002年首次報道了miRNAs中的miR-15和miR-16參與了慢性淋巴細胞白血病的發(fā)病過程。近年來，隨著研究的深入，miRNA在腫瘤中也被廣泛報道，其在腫瘤研究領(lǐng)域也取得了越來越多的關(guān)注，其中腫瘤抑制基因miR-143和miR-145在消化系統(tǒng)腫瘤、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胃癌、宮頸癌以及胰腺癌等惡性腫瘤形成途徑中被廣泛研究[8]。

miR-143和miR-145基因均位于染色體5q32，在染色體上位置接近，表達水平呈同步性改變，在多種細胞和組織中共同表達，構(gòu)成miR-143/145簇，在相同的生理和病理過程中發(fā)揮著相似的作用[9]。國外研究顯示，miR-143和miR-145在胰腺癌中表達存在差異，Kras基因的激活后，會下調(diào)多種胰腺癌細胞模型中miR-143/145簇水平，介導Kras轉(zhuǎn)化的必要條件是下調(diào)miR-143和miR-145表達，恢復其表達，則可阻止腫瘤的發(fā)生和發(fā)展[10]。本課題結(jié)果顯示，胰腺癌患者接受立體定位放療后，外周血miR-143和miR-145明顯增高，臨床癥狀有一定改善，可見外周血miR-143和miR-145在阻滯胰腺癌發(fā)生發(fā)展方面具有重要作用。Pramanik等[11]構(gòu)建質(zhì)粒NDA復合載體，將含有miR-143/145的表達載體轉(zhuǎn)運到胰腺癌細胞MiaPaCa-2后，可抑制胰腺癌細胞MiaPaCa-2在皮下移植瘤生長的效應(yīng)，全身給藥后，可讓腫瘤細胞中的miR-143/145表達恢復，從而發(fā)揮抑制機體內(nèi)相應(yīng)細胞基因RREB1和KRAS2，介導腫瘤細胞生長抑制、增殖減少、凋亡增加等作用，該研究結(jié)果為胰腺癌的治療提供了新途徑。

研究顯示，miR-143和miR-145在小腸、胃部、宮頸、前列腺和子宮正常組織中高表達，在胎盤、脾臟、睪丸、腎臟、骨骼肌等正常組織中表達降低[12]。以往研究還發(fā)現(xiàn)，miR-143和miR-145在多種消化系統(tǒng)腫瘤組織中低表達[13]。孫興邦等[14]采用Real-time PCR檢測胃癌組織中的miR-143和miR-145表達量，發(fā)現(xiàn)其均低于癌旁組織中的表達。王志紅等[15]研究發(fā)現(xiàn)胰腺癌癌組織中miR143的表達陽性率為25.71%，低于胰腺癌癌旁組織的68.57%。雖然上述研究均證實了miR-143和miR-145在胰腺癌的發(fā)生和發(fā)展中具有重要作用，但從胰腺癌組織中獲取miR-143和miR-145相對較難，限制了miR-143和miR-145在臨床中的研究。在本研究中，采用熒光定量PCR檢測法檢測胰腺癌血清中的miR-143和miR-145含量，并與健康對照組進行比較，亦發(fā)現(xiàn)了胰腺癌組患者血清miR-143和miR-145表達低于正常健康者。Pearson相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組患者血清miR-143、miR-145與腫瘤標志物CA125、CA153和CA199無相關(guān)性，但miR-143和miR-145有顯著相關(guān)性，可能是miR-143和miR-145在染色體上的位置相近，距離只有2 kb，兩者共同表達引起。進一步分析發(fā)現(xiàn)，胰腺癌組患者血清中的miR-143和miR-145表達與性別、年齡、T分期、N分析、M分期、腫瘤部位和腫瘤直徑比較無顯著差異，血清miR-143為胰腺癌的保護因素，這與既往研究結(jié)果一致。

綜上所述，胰腺癌患者血清中miR-143和miR-145表達水平低于健康者，且兩者呈正相關(guān)關(guān)系，miR-143為胰腺癌發(fā)病的保護因素；胰腺癌患者血清miR-143、miR-145表達水平與胰腺癌患者性別、年齡、TNM分期、腫瘤部位和腫瘤直徑無顯著相關(guān)性。