淺析黃芩苷對LPS誘導腸道損傷的保護作用研究

宋亞娟

【摘要】目的：研究分析黃芩苷對內(nèi)毒素-脂多糖（LPS）引起的腸損傷的腸黏膜保護作用及黃芩苷對膿毒血癥小鼠回、結(jié)腸黏膜抗氧化損傷的保護作用。方法：健康雄性BALB/c小鼠50只隨機分為5組：正常對照組、模型組、黃芩苷高、中、低劑量組。分別灌胃雙蒸水、黃芩苷100，50，25mg·kg-1，每日1次，連續(xù)3 d，于第3天灌胃后1h，腹腔注射生理鹽水或LPS（17mg·kg-1），于腹腔注射LPS后20h處死小鼠，取回、結(jié)腸組織。觀察各組小鼠生活、精神狀態(tài)，記錄各組小鼠死亡率，取材后測量結(jié)腸長度；光鏡下根據(jù)Chiu腸黏膜損傷評分方法對腸組織進行分級，以HE染色方法觀察腸組織病理學變化；采用紫外分光光度法檢測腸組織勻漿液總抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（T-SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）；免疫組化染色方法分析各組腸組織PCNA的表達。結(jié)果：小鼠腹腔注射LPS后，出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，黃芩苷給藥組死亡百分率明顯低于模型組。黃芩苷中劑量組小鼠結(jié)腸長度較模型組顯著增加（P<005）。結(jié)論：黃芩苷有保護腸上皮細胞免受氧自由基損傷的能力，其通過改善腸黏膜結(jié)構(gòu)與功能減輕LPS引起的腸道損傷。

【關(guān)鍵詞】膿毒癥；黃芩苷；腸保護

【中圖分類號】R574

【文獻標志碼】B

【文章編號】1005-0019（2018）09-091-01

膿毒癥是指各種致病微生物或其毒素存在于血液或組織中，機體對感染的一種全身炎癥反應綜合征（SIRS），可進一步演變?yōu)楦腥拘孕菘耍嗥鞴俟δ苷系K綜合征（MODS），當前危重病患者死亡的主要原因之一[1]。故本研究通過建立LPS誘導的膿毒血癥模型，從而探討黃芩苷各劑量組對LPS引起的腸損傷的腸黏膜保護作用。

1材料

11動物健康雄性BALB/c小鼠，體重（22±3）g，SPF級，50只。

12藥物與試劑LPS（L-2880：B5），購自Sigma公司；黃芩苷提取物，純度﹥85%，購自南京澤郎醫(yī)藥科技；總抗氧化能力（T-AOC）測定試劑盒、總超氧化物歧化酶（T-SOD）測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-PX）測定試劑盒、考馬斯亮藍測總蛋白含量試劑盒、松木素伊紅染色液，均購自南京建成；PCNA鼠抗、山羊抗鼠二抗、DAB染色液，購自北京中杉金橋。

13儀器BM-V型組織包埋機、生物組織攤片烤片機（湖北醫(yī)用電子儀器）；Leica RM2315型石蠟切片機（德國萊卡）；光學顯微鏡（日本尼康）；752型紫外分光光度計（南京麒麟分析儀器有限公司）。

2方法

21模型建立和分組將雄性BALB/c小鼠隨機分為5組：正常對照組、LPS模型組、黃芩苷高、中、低劑量組。每組分別以雙蒸水（10mL·kg-1）、黃芩苷高、中、低（100，50，25mg·kg-1）灌胃，每日1次，連續(xù)給藥3d，灌胃1h后，對照組腹腔注射生理鹽水（10mL·kg-1）、其他組腹腔注射LPS（17mg·kg-1）。

22取材各組小鼠于腹腔注射LPS后20h處死，取回腸、結(jié)腸各1～2cm，福爾馬林固定，其余腸組織于-80 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

23小鼠死亡百分率腹腔注射LPS后觀察小鼠精神狀態(tài)以及行動能力，記錄其休克后死亡數(shù)量所占每組實驗動物的百分率。

24結(jié)腸長度處死小鼠后，立即剖腹切取距小鼠直腸1cm處到距盲腸1 cm處的全部結(jié)腸，測量長度，并記錄。

25腸組織勻漿液T-AOC，T-SOD，GSH-PX活性的測定取各組小鼠回腸、結(jié)腸組織，用冰生理鹽水制備10%的腸組織勻漿液，按試劑盒要求配置各試劑。取組織勻漿上清液，嚴格按照試劑盒步驟測定，并用考馬斯亮藍試劑盒測定其總蛋白含量。

3結(jié)果

31小鼠死亡率給予LPS前，給藥期間各組小鼠均未見異常行為，精神良好，活動力強。給予LPS 6 h后，各組小鼠出現(xiàn)個別小鼠精神狀態(tài)萎靡，活動力弱，不喜動；12 h后，模型組小鼠1只小鼠死亡，其他小鼠蜷縮身體，活動力幾乎消失；18 h后，模型組相繼2只小鼠死亡，共死亡3只，其死亡率為30%；黃芩苷高、中、低劑量組各有1只死亡，其死亡率均為10%，黃芩苷給藥組小鼠個別小鼠精神狀態(tài)萎靡，均有活動力。

32結(jié)腸長度與對照組（993±070）cm比較，模型組（824±120）cm結(jié)腸長度明顯縮短，并有顯著性差異（P<001）。與模型組比較，黃芩苷中劑量組（953±063）cm結(jié)腸長度較長，并有顯著性差異（P<005）。

4討論

膿毒癥是當前危重病患者死亡的主要原因之一，即感染引發(fā)全身炎癥反應綜合征（SIRS），通常認為是機體過度炎癥反應或炎癥失控所致，伴有急性-器官功能障礙的膿毒癥是ICU病房病人死亡的第一大原因[2-3]。病原菌革蘭陰性菌可引起膿毒血癥，內(nèi)毒素是革蘭陰性（G-）桿菌細胞壁的主要成分，主要為脂多糖（LPS），LPS是革蘭陰性桿菌在生長繁殖或死亡菌體裂解時釋放的，由細胞壁脂多糖和少量蛋白質(zhì)組成，是革蘭陰性桿菌引起的膿毒癥和膿毒性休克的主要致病因子。LPS可通過原發(fā)性細胞毒作用，增加腸黏膜絨毛動-靜脈短路，改變腸黏膜血流供應，激活腸黏膜黃嘌呤氧化酶釋放氧自由基等機制導致腸黏膜屏障損傷，引起腸黏膜通透性增加促使腸道細菌、內(nèi)毒素移位。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)黃芩苷對LPS誘導的腸損傷有保護作用，能有效降低LPS引起的膿毒癥所導致的死亡；黃芩苷能明顯保護氧自由基清除系統(tǒng)，尤其表現(xiàn)在結(jié)腸，這可能是黃芩苷對其腸道的保護作用原因。但是，其作用機制復雜，有待進一步研究探索。

參考文獻

[1]程國強，馮年平，唐琦文，等.黃芩苷對眼科常見病原菌的體外抗菌作用[J].中國醫(yī)院藥學雜志，2001，21（6）：347

[2]李敬遠，李德馨.2003年國際膿毒癥定義討論會公報記要[J].國外醫(yī)學·麻醉學與復蘇分冊，2003，24（5）：25

[3]侯艷寧，朱秀媛，程桂芳.黃芩苷的抗炎機理[J].藥學學報，2000， 35（3）：161