ACE基因多態(tài)性人群分布及其在原發(fā)性高血壓中的高表達(dá)研究

劉龍梅 周雙艷 楊澤華 趙克斌

作者單位：030024 山西太原，山西省心血管病醫(yī)院實驗室（劉龍梅、周雙艷）

030003 山西太原，山西醫(yī)科大學(xué)第六醫(yī)院檢驗科（楊澤華）

030001 山西太原，山西醫(yī)科大學(xué)第一醫(yī)院檢驗科（趙克斌）

高血壓是危害人類健康最主要的疾病之一［1］，相關(guān)研究顯示，截至2010年，中國的高血壓患者數(shù)量達(dá)2億［2］，全國約1/4成年人為高血壓患者，每年因血壓升高導(dǎo)致過早死亡的人數(shù)高達(dá)300萬，占我國死亡人數(shù)的51%［3］。血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)換酶（angiotensin Ⅰ converting enzyme，ACE）為內(nèi)皮細(xì)胞的外分泌酶，是構(gòu)成血管內(nèi)皮細(xì)胞的膜性糖蛋白，在緩激肽的分解代謝及血管緊張素Ⅱ（angiotensin Ⅱ，AngⅡ）的產(chǎn)生過程中起重要作用。ACE基因的單核苷酸多態(tài)性（single nucleotide polymorphisms，SNPs）導(dǎo)致不同ACE基因型個體的腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS）對目的器官的作用不同，對高血壓的發(fā)生、發(fā)展和治療的反應(yīng)也有差異。本研究采用Tap-man探針法檢測原發(fā)性高血壓患者及健康體檢者的ACE基因位點，旨在了解ACE的SNPs與原發(fā)性高血壓的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象與分組 選擇2017年11月—2018年5月本院收治的50例原發(fā)性高血壓患者作為原發(fā)性高血壓組，根據(jù)世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）診斷標(biāo)準(zhǔn)，收縮壓≥140 mmHg（1 mmHg＝0.133 kPa），舒張壓≥95 mmHg，空腹血糖（fasting blood glucose，F(xiàn)BG）＜6.1 mmol/L；排除心肌梗死、心肌病、繼發(fā)性高血壓及腎功能障礙。另選擇同期體檢的50例健康體檢者作為健康對照組，根據(jù)WHO診斷標(biāo)準(zhǔn)，收縮壓＜140 mmHg，舒張壓＜90 mmHg且家族中的一級親屬均無原發(fā)性高血壓病史、糖尿病、心腦血管系統(tǒng)疾病。

1.2 儀器與試劑 所用儀器為美國Applied Bio systems 7500聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)儀，德國Eppendorf Centrifuge 5430離心機(jī)；基因組DNA提取試劑盒購自北京天根生化科技有限公司；引物由上海生工生物工程股份有限公司合成。

1.3 研究方法

1.3.1 基因組DNA的提取 按照試劑盒說明書提取乙二胺四乙酸（eathylene diamine tetraacetic acid，EDTA）抗凝全血的DNA，于-20 ℃保存。

1.3.2 寡核苷酸引物序列 聚合酶鏈反應(yīng)（polymerase chain reation，PCR）引物序列［4］如下：引物 1為5'-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3'，引物 2 為5'-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件處理數(shù)據(jù)，計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間頻數(shù)比較采用χ2檢驗。 P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 一般資料 原發(fā)性高血壓組男性23例，女性27例；年齡37～72歲，平均（52.1±5.4）歲；健康對照組男性25例，女性25例；年齡40～69歲，平均（52.1±5.4）歲。兩組的性別、年齡等一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（均P＞0.05）。

2.2 兩組的基因型頻率與等位基因頻率分布 健康對照組的基因型以I I型居多，而原發(fā)性高血壓組以DD型居多。原發(fā)性高血壓組患者的DD基因型頻率、D等位基因頻率均明顯高于健康對照組（χ2＝5.09，χ2＝2.56，均 P＜0.05）。見表 1。

表1 ACE基因型與等位基因頻率分布

3 討論

ACE基因插入/缺失（insertion/deletion，I/D）多態(tài)性由第16位內(nèi)含子序列中一段ALU序列的插入或缺失形成。相關(guān)研究表明，ACE基因多態(tài)性與血清中ACE的濃度密切相關(guān)，進(jìn)一步影響了患者的血壓［4-5］。ACE 基因存在 I/D 多態(tài)性，O'Toole等［6］研究表明，ACE基因在該位點的SNPs與降壓效果有關(guān)，DD基因型表現(xiàn)的降壓效應(yīng)比ID、I I基因型更敏感。唐曉鴻等［7］研究表明，不同ACE基因型的患者治療前后ACE表達(dá)水平不同，DD基因型組ACE水平明顯高于ID和I I基因型組，ID基因型組ACE水平明顯高于I I基因型組。

本研究結(jié)果顯示，健康對照組基因型I I型較多，原發(fā)性高血壓組患者多為DD型，且DD型頻率和D等位基因頻率高于健康對照組，與文獻(xiàn)［6-8］的報道一致。其中D等位基因使血管的ACE水平增加，引起血中AngⅡ活性增加，AngⅡ可使阻力血管和容量血管收縮，滅活緩激肽，升高血壓。本研究結(jié)果也表明，原發(fā)性高血壓患者相對于健康體檢者的D等位基因呈高表達(dá)。另外，周述旺等［9］發(fā)現(xiàn)，繼發(fā)于原發(fā)性高血壓的腦梗死也與DD基因型有關(guān)。

原發(fā)性高血壓為多基因與多環(huán)境因素共同參與的疾病，一般認(rèn)為遺傳因素作用占40%。目前，有關(guān)原發(fā)性高血壓基因的研究不斷深入，因本研究標(biāo)本收集不充足，實驗設(shè)計存在局限性，還需聯(lián)合多因素擴(kuò)大樣本量做進(jìn)一步研究。