蒙藥制劑棘豆止咳散中甘草的薄層色譜鑒別研究

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1.內(nèi)蒙古蒙醫(yī)藥工程技術(shù)研究院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；2.內(nèi)蒙古民族大學(xué)蒙醫(yī)藥學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000；3.內(nèi)蒙古自治區(qū)庫倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028000

棘豆止咳散為內(nèi)蒙古通遼市庫倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院的醫(yī)院制劑，是由甘草、川貝母、多葉棘豆、石膏等4味藥組成。用于調(diào)節(jié)三根平衡，清除希拉熱邪，從而達(dá)到清熱、化痰、潤(rùn)肺、止咳。棘豆止咳散對(duì)于多種咳嗽均具有明顯療效，且價(jià)格低廉，無毒副作用，老人和兒童均可使用[1-3]。目前，從甘草中已經(jīng)分離出了黃酮類成分、三萜類成分以及多糖[4]。藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，甘草藥材和甘草提取物不僅有抗菌、抗病毒、抗炎、抗癌和抗氧化等作用，還能夠調(diào)節(jié)和保護(hù)人體各系統(tǒng)[5]。尤其在呼吸系統(tǒng)方面，具有止咳、化痰、定喘以及抗呼吸道感染等作用，甘草中的黃酮類成分以及甘草酸、甘草次酸在呼吸系統(tǒng)方面作用顯著[6-12]。目前，該制劑薄層鑒別方面尚無研究。因此，本實(shí)驗(yàn)對(duì)制劑中甘草藥材的薄層鑒別方法進(jìn)行了研究。

1 儀器與材料

1.1 儀器 電子分析天平(Mettler Toledo)；ZF-02S型紫外分析儀(北京君意東方電泳設(shè)備有限公司)；青島海洋硅膠G板(青島海洋化工廠)；醋酸乙酯、甲酸、冰醋酸、正丁醇、甲醇、三氯甲烷、丙酮均為分析純。

1.2 材料 棘豆止咳散(內(nèi)蒙古通遼市庫倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院自制)；甘草苷(CAS:551-15-5，上海佰世凱化學(xué)科技有限公司)；甘草對(duì)照藥材(批號(hào)：120904，哈爾濱恒浩科技開發(fā)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜條件的考察

2.1.1 供試品溶液的制備 取處方量的棘豆止咳散1 g，加65%乙醇10 mL，加熱回流提取2 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，備用。

2.1.2 對(duì)照藥材和對(duì)照品溶液的制備 取甘草對(duì)照藥材1 g，加65%乙醇10 mL，加熱回流提取2 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)? mL甲醇溶解，作為對(duì)照藥材溶液，備用。稱取甘草苷對(duì)照品0.5 mg，加1 mL甲醇溶解，作為對(duì)照品溶液，備用。

2.1.3 展開系統(tǒng)的考察 分別吸取對(duì)照品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和供試品溶液各3 μL，點(diǎn)在同一張薄層板上，以展開系統(tǒng)(A)正丁醇-醋酸乙酯-甲醇-甲酸-水(5∶10∶1∶1∶3.5)，展開系統(tǒng)(B)三氯甲烷-丙酮-甲醇-水-甲酸(11∶3.5∶3.7∶0.7∶0.1)，展開系統(tǒng)(C)醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)分別展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖1。綜合比較圖中斑點(diǎn)數(shù)目、分離度等情況，可確定展開系統(tǒng)(C)醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為最佳展開系統(tǒng)。

2.1.4 檢視方法的選擇 分別吸取對(duì)照品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和供試品溶液3 μL，點(diǎn)在同一張薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，通過10%硫酸-乙醇顯色劑，吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰、三氯化鐵顯色劑及365 nm紫外燈下檢視，三種方法進(jìn)行比較，結(jié)果見圖2。綜合比可知(A)10%硫酸-乙醇顯色為最優(yōu)檢視方法。

2.2 方法學(xué)考察

2.2.1 重復(fù)性考察 按2.1.1供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，分別吸取對(duì)照品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和上述供試品溶液6份，各3μL，點(diǎn)在同一張薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖3。結(jié)果表明，供試品溶液制備方法的重復(fù)性良好。

2.2.2 耐用性考察

2.2.2.1 不同廠家薄層板的考察 分別吸取對(duì)照品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和供試品溶液3 μL，點(diǎn)在不同的薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖4。結(jié)果表明，青島海洋硅膠G板的分離效果優(yōu)于自制硅膠G板。

2.2.2.2 不同展距的考察 分別吸取對(duì)照品溶液、甘草藥材溶液和供試品溶液3 μL，點(diǎn)在不同的薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，展距分別為6.5 cm、7.5 cm、8.5 cm，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖5。結(jié)果表明，展距為6.5 cm時(shí)，分離效果不佳；展距為7.5 cm時(shí)已能較好的分離，但展距為8.5時(shí)的效果更好，故選擇展距為8.5 cm。

2.2.2.3 不同點(diǎn)樣量的考察 分別吸取供試品溶液1 μL、3 μL、5 μL，甘草對(duì)照藥材和甘草苷對(duì)照品溶液各3 μL，點(diǎn)在同一薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖6。結(jié)果表明，點(diǎn)樣量為3 μL，斑點(diǎn)清晰，因此供試品的最佳點(diǎn)樣量為3 μL。

2.2.2.4 不同預(yù)飽和時(shí)間的考察 吸取對(duì)照品溶液、甘草對(duì)照藥材溶液和供試品溶液各3 μL，分別點(diǎn)在三塊不同薄層板上，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，預(yù)飽和時(shí)間分別為0 min、15 min和30 min，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在日光下檢視，結(jié)果見圖7。結(jié)果表明，不同預(yù)飽和時(shí)間，對(duì)分離效果影響不大。

2.2.2.5 不同展開溫度的考察 吸取對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液3 μL，分別點(diǎn)在三塊不同薄層板上，在4 ℃、21 ℃、30 ℃的條件下，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖8。結(jié)果表明，21 ℃下展開效果較好，故選擇在21 ℃下進(jìn)行展開。

2.2.2.6 不同展開濕度的考察 吸取對(duì)照品溶液、對(duì)照藥材溶液和供試品溶液3 μL，分別點(diǎn)在二塊不同薄層板上，在相對(duì)濕度15%、75%的條件下，以醋酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水(15∶1∶1∶2)為展開系統(tǒng)進(jìn)行展開，取出，晾干，噴以10%硫酸-乙醇顯色，經(jīng)吹風(fēng)機(jī)加熱至斑點(diǎn)清晰，在可見光下檢視，結(jié)果見圖9。結(jié)果表明，相對(duì)濕度對(duì)分離效果及斑點(diǎn)的清晰程度影響不大。

3 討論

蒙藥棘豆止咳散是內(nèi)蒙古通遼市庫倫旗蒙醫(yī)醫(yī)院的院內(nèi)制劑，對(duì)于多種咳嗽均具有明顯療效，甘草藥材是該制劑重要組成藥味之一。本文研究了棘豆止咳散中甘草藥材的薄層鑒別方法，包括展開系統(tǒng)的考察、檢識(shí)方法的選擇以及耐用性的考察等，所建立的薄層鑒別方法可用于棘豆止咳散的質(zhì)量控制，為進(jìn)一步實(shí)現(xiàn)蒙藥制劑棘豆止咳散質(zhì)量均一、穩(wěn)定奠定了方法基礎(chǔ)。