鼻咽癌局部微環(huán)境中腫瘤浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞亞群分布及密度與臨床病理特征相關(guān)性分析

汪文利

鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)是國(guó)內(nèi)比較常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，其發(fā)病部位一般在鼻咽腔側(cè)壁或者頂部位置。NPC發(fā)病機(jī)制比較復(fù)雜，研究表明除去環(huán)境和遺傳等因素，NPC的發(fā)病與愛(ài)波斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr Virus,EBV)感染密切相關(guān)[1-2]。NPC是一種有著較強(qiáng)侵襲和轉(zhuǎn)移能力的惡性腫瘤，同時(shí)其發(fā)病初期較為隱蔽，導(dǎo)致大部分患者在NPC晚期時(shí)才確診。近年來(lái)隨著生物學(xué)的不斷發(fā)展，大量的研究證實(shí)腫瘤局部微環(huán)境在腫瘤病情的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中有著重要的作用。腫瘤微環(huán)境是指腫瘤病變細(xì)胞與正常組織中間的位置，其復(fù)雜的構(gòu)成和腫瘤細(xì)胞間的相互作用，是目前國(guó)內(nèi)外的研究熱點(diǎn)[3-4]。而腫瘤性疾病和慢性炎癥已經(jīng)被大量研究所證實(shí)兩者存在密切的聯(lián)系，本次研究通過(guò)分析NPC局部微環(huán)境中腫瘤浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞亞群分布及密度與臨床病理特征的相關(guān)性，來(lái)為NPC的臨床診療提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年3月至2017年3月間，于本院住院并接受治療的NPC患者共186例，其中男性121例，女性65例，平均年齡(44.3±8.7)歲。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合NPC診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者[5]；自愿加入本次研究的患者。 排除標(biāo)準(zhǔn)：有過(guò)放化療史的患者；合并伴有其他腫瘤疾病的患者；不愿加入本次研究的患者。

1.2 研究方法

將準(zhǔn)備好的石蠟標(biāo)本，取3 μm切片，在常規(guī)脫蠟操作后，采用免疫組化法檢測(cè)各炎癥細(xì)胞亞群的分布和浸潤(rùn)情況。所有T淋巴細(xì)胞使用CD3標(biāo)記，B淋巴細(xì)胞采用CD20標(biāo)記，細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞采用CD8標(biāo)記，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞采用FOXP3標(biāo)記，NK細(xì)胞采用CD56標(biāo)記，CD1a和CD83分別標(biāo)記未成熟和成熟樹突狀細(xì)胞，NE標(biāo)記中性粒細(xì)胞，肥大細(xì)胞則采用類胰蛋白酶(Tryptase)進(jìn)行標(biāo)記。為檢測(cè)各個(gè)細(xì)胞亞群的密度，首先選出陽(yáng)性染色明顯的區(qū)域，并選出其中有代表性的5個(gè)不重復(fù)區(qū)域，采用40倍物鏡攝取視野并計(jì)算視野內(nèi)所有陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量，然后根據(jù)5個(gè)觀察結(jié)果取出平均值為細(xì)胞亞群密度。根據(jù)結(jié)果采用Spearman相關(guān)性分析法分析各淋巴細(xì)胞亞群之間的相關(guān)性，進(jìn)一步分析其浸潤(rùn)密度與NPC各個(gè)臨床病理特征的相關(guān)性，包括病理分型、區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況臨床分期以及局部腫瘤侵犯分級(jí)。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

2 結(jié)果

2.1 NPC患者炎癥細(xì)胞亞群的分布情況

分析免疫組化法檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在NPC組織中，CD3和CD8多呈圓形，在腫瘤灶巢和間質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)了大量浸潤(rùn)；CD20則大多為圓形和梭形，多分布于NPC腫瘤間質(zhì)；CD56并沒(méi)有大量浸潤(rùn)，其一般分布間質(zhì)內(nèi)，也以圓形和梭形為主；FOXP3細(xì)胞核以圓形為主，并且在間質(zhì)和癌巢內(nèi)出現(xiàn)了大量的浸潤(rùn)；CD1a主要存在于癌巢內(nèi)，沒(méi)有規(guī)則的形態(tài)，CD83則多存在于間質(zhì)內(nèi)，同樣沒(méi)有規(guī)則的形態(tài)；NE和Tryptase主要存在于腫瘤間質(zhì)，以圓形和梭形為主。

2.2 炎癥細(xì)胞亞群浸潤(rùn)密度分析

本次研究中，所有患者都檢測(cè)到了CD3、CD8、FOXP3、CD20、NE和Tryptase細(xì)胞浸潤(rùn)，CD3是NPC微環(huán)境主要浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞，而CD8、FOXP3、CD20和NE在NPC微環(huán)境組織中浸潤(rùn)明顯，CD1a、CD83、CD56和Tryptase浸潤(rùn)則比較少。見(jiàn)表1。

表1 NPC組織中炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)密度

2.3 炎癥細(xì)胞亞群相關(guān)性

通過(guò)Spesrman相關(guān)性分析發(fā)現(xiàn)，CD3、CD8、FOXP3和CD20 4種淋巴細(xì)胞亞群兩兩之間都存在顯著的正相關(guān)(P<0.01)；NE和CD3、CD8、FOXP3、tryptase細(xì)胞亞群之間顯著正相關(guān)(P<0.01)；CD56和CD3、CD8、CD20細(xì)胞亞群間顯著正相關(guān)(P<0.01)；其中CD3和CD83、CD8、CD20之間關(guān)系密切(P<0.01)。見(jiàn)表2。

2.4 NPC臨床病癥與炎癥細(xì)胞亞群相關(guān)性

分析各炎癥細(xì)胞亞群和病例特征之間相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，NPC腫瘤分型與CD3、CD20、NE、CD83細(xì)胞存在相關(guān)(P<0.05)；區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及臨床分期與FOXP3、NE和tryptase存在正相關(guān)(P<0.05)；NFC局部腫瘤侵犯分級(jí)與CD56呈負(fù)相關(guān)(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表2 NPC局部微環(huán)境各個(gè)炎癥細(xì)胞亞群相關(guān)性分析

表3 NPC臨床病癥與炎癥細(xì)胞亞群相關(guān)性(個(gè)/高倍視野)

3 討論

目前，NPC的治療以放射療法為主。統(tǒng)計(jì)表明，放射治療在早期NPC患者的臨床治療中，5年生存率達(dá)到了80%以上，取得了較為理想的治療效果，但是在晚期NPC的治療中，5年生存率只有60%左右，而且一旦NPC患者病情出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，就必須采用具有較大副作用的化療療法進(jìn)行治療[6-7]。隨著醫(yī)學(xué)水平的不斷發(fā)展，大量研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤局部會(huì)出現(xiàn)免疫抑制環(huán)境，而免疫抑制環(huán)境會(huì)導(dǎo)致患者免疫系統(tǒng)失去抗腫瘤功能，同時(shí)炎癥在腫瘤病情的發(fā)展中繼續(xù)起到促進(jìn)作用[8-9]。因此，通過(guò)對(duì)NPC腫瘤細(xì)胞局部微環(huán)境中炎癥細(xì)胞亞群的研究和分析，對(duì)于我們認(rèn)識(shí)NPC的發(fā)病機(jī)制和發(fā)病過(guò)程、提高NPC的治療效果有著重要的意義。

腫瘤微環(huán)境作為醫(yī)學(xué)界研究的重點(diǎn)和熱點(diǎn)，被發(fā)現(xiàn)在腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、免疫逃逸以及轉(zhuǎn)移等方面都發(fā)揮著重要的作用，而腫瘤微環(huán)境中的炎癥反應(yīng)是其一大基本特征。有研究表明，炎癥反應(yīng)能夠產(chǎn)生大量促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移的細(xì)胞因子[10]。本次研究發(fā)現(xiàn)CD3+T細(xì)胞是NPC微環(huán)境主要浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞，而CD20+B淋巴細(xì)胞、FOXP3+Treg和中性粒細(xì)胞以及CD8+CTL細(xì)胞僅次于CD3+T細(xì)胞，其他如肥大細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞和CD56+NK細(xì)胞則最少。中性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞和各種淋巴細(xì)胞間均存在著正相關(guān)，這與以往的研究結(jié)果一致。調(diào)節(jié)性T細(xì)胞能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸，而腫瘤微環(huán)境中的免疫抑制因子能夠刺激并提高CD8+CTL中負(fù)性刺激因子的表達(dá)，導(dǎo)致其對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力大打折扣[11]。國(guó)內(nèi)關(guān)于Treg細(xì)胞的研究表明其能在腫瘤患者體內(nèi)具有免疫抑制作用，這與本次研究結(jié)果一致，其與NPC的臨床分期存在正相關(guān)，其免疫抑制作用得到了證實(shí)。本次研究發(fā)現(xiàn)，NK細(xì)胞在NPC組織中少量浸潤(rùn)，其數(shù)量和NPC腫瘤的局部侵犯分級(jí)存在負(fù)相關(guān)，而以往的研究表明NK細(xì)胞具有免疫監(jiān)視等重要作用，其抗腫瘤作用得到了證實(shí)。本次研究中發(fā)現(xiàn)未成熟樹突狀細(xì)胞在NPC組織中明顯更多，而隨著其臨床分期的提高，其浸潤(rùn)開(kāi)始降低，這與國(guó)內(nèi)其他研究結(jié)果一致[12]。而對(duì)肥大細(xì)胞的統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)，其腫瘤浸潤(rùn)會(huì)有助于腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，加速NPC的病情發(fā)展。

綜上所述，鼻咽癌微環(huán)境中腫瘤浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞亞群之間普遍存在著正相關(guān)，其中肥大細(xì)胞和中性粒細(xì)胞在鼻咽癌間質(zhì)中浸潤(rùn)普遍，其浸潤(rùn)密度越高，鼻咽癌病情越嚴(yán)重。鼻咽癌微環(huán)境浸潤(rùn)炎癥細(xì)胞亞群在鼻咽癌的病情發(fā)展過(guò)程中起到促進(jìn)作用，這些特性將會(huì)有利于臨床治療鼻咽癌尋找新的治療靶點(diǎn)。