氣質(zhì)聯(lián)用測定白酒中嗅味物質(zhì)的樣品前處理技術(shù)

姜 利，張光耀，王志強(qiáng)，劉國英，2，王 錄，2，芮君君

（1.安徽古井貢酒股份有限公司，安徽亳州236800；2.安徽省固態(tài)發(fā)酵工程技術(shù)研究中心，安徽亳州236820）

白酒異味是相對于白酒香味而言，具體是指香氣的不協(xié)調(diào)。白酒中有“糠嗅味”“澀味”“酸味”等常見的異味[1-3]，糠嗅味是我國白酒尤其是清香型白酒釀造過程中常見的異嗅味物質(zhì)[4]。土臭素和2-甲基異冰片為引起白酒糠嗅味的主要物質(zhì)，人對土臭素和2-甲基異冰片的閾值分別為5～10 ng/L和1～10 ng/L[5]。對于痕量物質(zhì)的定量，通常需富集濃縮后再用儀器進(jìn)行分析，常見的前處理方法主要有液-液萃取法(LLD)、吹掃捕集法(PT)、固相萃取法(SPE)、固相微萃取法(SPME)。液液萃取法、吹掃捕集法成本較高，本研究選擇了固相萃取法與固相微萃取法兩種前處理方式對采用氣相色譜-質(zhì)譜儀測定白酒中土臭素和2-甲基異冰片的影響進(jìn)行比較，優(yōu)化了操作條件，確定了最優(yōu)化前處理方法和條件，并用于測定白酒中土臭素與2-甲基異冰片。

1 材料與方法

1.1 材料、試劑及儀器

材料：白酒為古井貢酒。

儀器：三重四級桿氣質(zhì)聯(lián)用儀（配EI源）、手動(dòng)固相微萃取裝置、自動(dòng)固相萃取裝置。

試劑及耗材：無水乙醇、甲醇、二氯甲烷，均為色譜純；土臭素標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 mg/L，美國Supelco公司；2-甲基異冰片標(biāo)準(zhǔn)溶液，100 mg/L，美國Supelco公司；L-薄荷醇標(biāo)準(zhǔn)溶液[6]，100 mg/L，美國Supelco公司；土臭素和2-甲基異冰片混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，兩組分濃度均為100 mg/L，用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋而成；氯化鈉，優(yōu)級純；試驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 前處理方法

固相萃取選擇C18[7]和LC-C18固相萃取柱為實(shí)驗(yàn)材料，以甲醇和二氯甲烷為洗脫液[8]；固相微萃取分別采用了PA、PDMS/DVB和DVB/CAR on PDMS探頭，加入8 mL樣品于頂空瓶中，加入一定量內(nèi)標(biāo)，50℃加熱攪拌吸附30 min，解析溫度250℃，解析時(shí)間5 min。

色譜柱：CP-WAX石英毛細(xì)管柱（60m×0.25mm×0.25μm）或相當(dāng)柱；進(jìn)樣口溫度：250℃；程序升溫：初始柱溫60℃，保持2 min，以6℃/min升至220℃，保持20 min。載氣：氦氣（純度≥99.999%），流速1.0 mL/min；進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量：1 μL；色譜與質(zhì)譜接口溫度為220℃；電離能量：70 ev；溶劑延遲：15 min。

2 結(jié)果與分析

2.1 固相萃取

2.1.1 填料

分別以C18和LC-C18固相萃取柱對加標(biāo)酒樣進(jìn)行固相萃取除雜、富集，分別以甲醇、二氯甲烷作為洗脫液，洗脫后測定土臭素與2-甲基異冰片的濃度，結(jié)果表明，LC-C18固相萃取柱經(jīng)甲醇和二氯甲烷洗脫后均未檢出，C18固相萃取柱經(jīng)甲醇和二氯甲烷洗脫均檢出土臭素與2-甲基異冰片。

2.1.2 洗脫液

將土臭素和2-甲基異冰片混合標(biāo)樣加入白酒中，使其加標(biāo)濃度為2 μg/L。采用C18固相萃取柱進(jìn)行萃取富集，然后分別以甲醇、二氯甲烷作為洗脫液進(jìn)行洗脫，測定土臭素和2-甲基異冰片的含量，其回收率見表1。

由表1可知，甲醇作為洗脫液時(shí)2-甲基異冰片與土臭素的平均回收率分別為86.5%、97.7%，當(dāng)二氯甲烷作為洗脫液時(shí)2-甲基異冰片與土臭素的平均回收率分別為121.5%、134.6%。由此可見，甲醇的洗脫效果優(yōu)于二氯甲烷。

2.2 固相微萃取

2.2.1 參數(shù)優(yōu)化

媒體技術(shù)運(yùn)用得巧妙，對唱歌教學(xué)也有特別的效果，音樂教科書中有很多齊唱、輪唱、合唱形式的歌曲，如《歌聲與微笑》《同一首歌》《保衛(wèi)黃河》等，在教學(xué)時(shí)，僅憑教師的范唱是不能表現(xiàn)出齊唱、輪唱以及合唱的和聲效果的。教師通過從媒體資源中導(dǎo)出歌曲錄音或現(xiàn)場演唱視頻，讓學(xué)生對演唱效果有完整的認(rèn)知，仔細(xì)觀察合唱演員的演唱姿勢、演唱技巧、發(fā)聲方法，然后再通過分組教學(xué)進(jìn)行系統(tǒng)訓(xùn)練，可以準(zhǔn)確把握音樂作品。

將白酒酒精度調(diào)至10%vol，依次對萃取頭類型、萃取時(shí)間、加鹽、不加鹽等條件進(jìn)行優(yōu)化。

（1）萃取頭類型

分別采用三相萃取頭、PA萃取頭、PDMS萃取頭以及兩相萃取頭按照1.2.1試驗(yàn)方法進(jìn)行前處理，比較吸附目標(biāo)物的峰面積，見圖1。

圖1 萃取頭峰面積比較

根據(jù)圖1比較目標(biāo)物的峰面積，三相萃取頭對2-甲基異冰片、土臭素和薄荷醇的吸附效果均為最佳，確定最佳萃取頭為三相萃取頭。

（2）萃取時(shí)間優(yōu)化

采用三相萃取頭按照1.2試驗(yàn)方法分別萃取30 min、40 min、50 min、60 min進(jìn)行前處理，比較吸附目標(biāo)物的峰面積，具體結(jié)果見圖2。

圖2 萃取時(shí)間峰面積比較

根據(jù)圖2比較目標(biāo)物的峰面積，三相萃取頭在60 min時(shí)對2-甲基異冰片、土臭素和薄荷醇的吸附效果顯著性增大，結(jié)合試驗(yàn)時(shí)間成本，選擇最佳萃取時(shí)間為60 min。

（3）加鹽、不加鹽優(yōu)化（表2）

表2 加鹽和不加鹽峰面積比較

采用在20 mL頂空瓶中，加入8 mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加鹽和不加鹽，加入一定量內(nèi)標(biāo)，插入三相萃取頭，50℃吸附60 min，GC解析5 min。

根據(jù)表2比較目標(biāo)物的峰面積，采用三相萃取頭在加鹽的情況下萃取60 min時(shí)對2-甲基異冰片、土臭素和薄荷醇的吸附效果均為最佳，確定加鹽效果好。

通過以上優(yōu)化試驗(yàn)，確定了白酒中2-甲基異冰片與土臭素前處理方式，采用三相萃取頭在20 mL頂空瓶中，加入8 mL待測樣品，加鹽，加入內(nèi)標(biāo)，50℃吸附60 min，GC解析5 min。

2.2.2 回收率實(shí)驗(yàn)

采用樣品加標(biāo)的方法進(jìn)行回收率試驗(yàn)，制備不同濃度的模擬酒樣進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)。采用6次平行試驗(yàn)取平均回收率的方式。采用已優(yōu)化的前處理?xiàng)l件進(jìn)行樣品的處理工作，具體數(shù)據(jù)見表3。

表3 加標(biāo)回收率試驗(yàn)

固相微萃分析白酒中土臭素與2-甲基異冰片回收率為90.9%～114.4%，滿足分析要求。

3 結(jié)論

系統(tǒng)研究比較了固相萃取和固相微萃取兩種前處理方式，應(yīng)用于白酒中土臭素與2-甲基異冰片的定量分析。固相萃取前處理方式確定了采用C18固相萃取柱經(jīng)甲醇洗脫的方法，土臭素與2-甲基異冰片回收率達(dá)到86.5%、97.7%，固相微萃取前處理方式確定了采用三相萃取頭加鹽，50℃吸附60 min的方法，土臭素與2-甲基異冰片回收率為90.9%～114.4%。兩種前處理方式均可用于白酒中土臭素與2-甲基異冰片的定量，但因固相微萃取無污染、成本較低的優(yōu)點(diǎn)，可作為最優(yōu)前處理方法，適用于對白酒中土臭素與2-甲基異冰片進(jìn)行監(jiān)控檢測。