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    抗病毒顆粒藥理作用研究

    2018-10-15 10:27:00武晉孝侯麗麗劉春龍晏永新
    中國(guó)獸醫(yī)雜志 2018年6期
    關(guān)鍵詞:流感病毒鏈球菌抗病毒

    武晉孝,侯麗麗,劉春龍,張 麗,晏永新

    (1.山西省飼料獸藥監(jiān)察所,山西太原030027 ; 2.江西出入境檢驗(yàn)檢疫局綜合技術(shù)中心,江西南昌330002 ; 3.江西新世紀(jì)民星動(dòng)物保健品有限公司,江西南昌330096)

    隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)發(fā)展和人民生活水平的提高,人們對(duì)食品安全問(wèn)題越來(lái)越重視。因此,開(kāi)發(fā)安全有效的中獸藥顯得非常有必要。中獸藥在我國(guó)有幾千年的應(yīng)用歷史,具有價(jià)格低廉、不易產(chǎn)生耐藥性,藥物殘留少等特點(diǎn),將中獸藥特別是復(fù)方制劑應(yīng)用于畜禽的疾病防治已經(jīng)成為一種趨勢(shì)[1-2]。抗病毒顆粒處方出自張仲景的《傷寒論》,由板藍(lán)根、連翹等9味中藥組成,具有清熱祛濕,涼血解毒之功效,用于感冒風(fēng)熱,溫病發(fā)熱,肺衛(wèi)熱盛證,癥見(jiàn)發(fā)熱頭痛,咳嗽,咽干,咽喉腫痛??共《绢w粒作為中藥制劑,主要用于防止畜禽感染性疾病。本試驗(yàn)研究了抗病毒顆粒的抗菌、抗病毒、解熱及抗炎作用,為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 KM小鼠,SPF級(jí),60只,雄性,體重16~18 g;SD大鼠,SPF級(jí),65只,雄性,體重160~180 g,湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司,許可證號(hào):SCXK(湘)2013-0004。

    1.2 菌株和病毒株 金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和溶血性鏈球菌均來(lái)源于江西省臨床檢檢中心試劑站;甲型流感病毒FMI株,由中國(guó)藥品生物檢定所提供,經(jīng)小鼠增強(qiáng)毒力后,于雞胚尿囊腔傳代2次,并測(cè)定其半數(shù)致死量LD50=4.2。

    1.3 藥品、試劑與儀器 抗病毒顆粒,亳州市乾元?jiǎng)游锼帢I(yè)有限責(zé)任公司提供,批號(hào):20150304;利巴韋林顆粒,四川百利藥業(yè)有限公司,批號(hào):140367;復(fù)方乙酰水楊酸片,遠(yuǎn)大醫(yī)藥(中國(guó))有限公司,批號(hào):140409;吲哚美辛腸溶片,山西云鵬制藥有限公司,批號(hào):A140402;牛肉膏,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司,批號(hào):20140202;蛋白胨,北京奧博星生物技術(shù)有限責(zé)任公司,批號(hào):20141208;瓊脂(Agar Powder),Sigma公司,Cat# A8190;無(wú)菌脫纖維羊血,上海永輝羊業(yè)有限公司,批號(hào):20150214;二甲苯,天津市福晨化學(xué)試劑廠,批號(hào):201312;高活性干酵母,13 g/袋,安琪酵母股份有限公司,批號(hào):20140818。DT-1TB型電子體溫計(jì)(上海華辰醫(yī)用儀表有限公司);電子天平(北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司);MIR-162型多功能培養(yǎng)箱(日本SANYO公司);MCO-17AIC型CO2培養(yǎng)箱(日本SANYO公司)。

    1.4 抗病毒顆粒體外抑菌試驗(yàn)[3-5]取滅菌試管10支,分別制備藥物的10個(gè)梯度濃度(2倍稀釋法)分別為:100、50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625、0.781,0.391、0.195 mg生藥/mL,將金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌和溶血性鏈球菌接種于對(duì)應(yīng)平皿中,培養(yǎng)24 h 取出,觀察不同細(xì)菌在不同濃度的藥物平皿上生長(zhǎng)情況,確定最低抑菌濃度(MIC)。

    1.5 抗病毒顆粒對(duì)甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保護(hù)作用[3-5]取KM小鼠60只,隨機(jī)分為6組,每組10只,分別為:空白組、模型組、陽(yáng)性藥利巴韋林組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組。動(dòng)物乙醚麻醉后,除空白組外,其他各組分別滴鼻接種已滴定的病毒液50 μL/只,空白組滴鼻等容量的生理鹽水。在接種2 h后,各組動(dòng)物灌胃給予相應(yīng)藥物,給藥容量20 mL/kg·bw,共給藥5 d,每日觀察動(dòng)物存活情況,共觀察14 d,記錄動(dòng)物的死亡數(shù)量和死亡率。

    1.6 抗病毒顆粒對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱模型的影響[3-5]大鼠適應(yīng)環(huán)境后,于試驗(yàn)前1天用電子體溫計(jì)對(duì)各試驗(yàn)動(dòng)物正常體溫進(jìn)行測(cè)量,測(cè)量肛溫時(shí),宜先將其直腸內(nèi)糞便擠出,再將蘸有少量液體石蠟的電子體溫計(jì)從肛門輕輕插入,進(jìn)行體溫測(cè)量,選擇56只體溫正常及范圍波動(dòng)小的動(dòng)物供試驗(yàn)使用。將56只SD大鼠隨機(jī)分為6組,即空白組、模型組、陽(yáng)性藥復(fù)方乙酰水楊酸組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組,除空白組6只外,其他每組10只,并按10 mL/kg·bw的容積灌胃相應(yīng)藥物,連續(xù)3 d。于第3天試驗(yàn)前禁食10 h,末次給藥前測(cè)量各組動(dòng)物體溫作為造模前的體溫,于給藥后1 h,每只大鼠背部皮下注射20%干酵母懸液10 mL/kg·bw復(fù)制大鼠發(fā)熱模型,分別測(cè)量造模后第3、5、7 小時(shí)動(dòng)物體溫。以每只動(dòng)物造模后體溫值減去造模前體溫值,計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)體溫變化值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

    1.7 抗病毒顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響[3-5]取KM小鼠50只隨機(jī)分5組,即對(duì)照組,陽(yáng)性藥吲哚美辛組、抗病毒顆粒高、中、低劑量組,每組10只,除對(duì)照組外,其他各給藥組按劑量灌胃給藥,給藥容量為20 mL/kg·bw,對(duì)照組給予等容量蒸餾水,每天給藥1次,連續(xù)給藥3 d,末次給藥后1 h,將50 μL二甲苯涂于小鼠左耳前后兩面造成耳腫脹模型,右耳不作處理,造模后1 h將小鼠頸椎脫臼處死,沿耳廓基線剪下兩耳,用8 mm打孔器分別在同一部位打下圓耳片,用電子天平精確稱重,以左耳重減右耳重為小鼠的耳腫脹度,并求出抑制率。

    抑制率(%)=(模型組耳腫脹平均值-給藥組耳腫脹平均值)/模型組耳腫脹平均值×100%

    1.8 統(tǒng)計(jì)方法 采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)方差齊性檢驗(yàn)后,用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間差異比較用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)和卡方檢驗(yàn)。

    2 試驗(yàn)結(jié)果

    2.1 抗病毒顆粒體外抑菌試驗(yàn) 抗病毒顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌和肺炎鏈球菌的最低抑菌濃度(MIC)均為3.125 mg/mL,對(duì)溶血性鏈球菌的最低抑菌濃度(MIC)為6.25 mg/mL,以上結(jié)果表明,本品對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌均有一定的抑制作用,結(jié)果見(jiàn)表1。

    表1 抗病毒顆粒體外抑菌(平皿法)結(jié)果

    2.2 抗病毒顆粒對(duì)甲型流感病毒FMI株引起小鼠死亡的保護(hù)作用 與空白組比較,接種病毒組動(dòng)物表現(xiàn)聳毛、活動(dòng)減少等現(xiàn)象。模型對(duì)照組動(dòng)物死亡率最高,其次為抗病毒顆粒低劑量和中劑量組,然后為抗病毒顆粒高劑量組,死亡率最低的為利巴韋林組,與模型組比較,各組均能顯著降低小鼠的死亡率(P<0.01或P<0.05),結(jié)果見(jiàn)表2。

    表2 抗病毒顆粒對(duì)接種流感病毒小鼠死亡保護(hù)的影響

    注:與模型組比較,*:P<0.05,**:P<0.01

    2.3 抗病毒顆粒對(duì)干酵母所致大鼠發(fā)熱模型的影響 模型組在造模后的3個(gè)時(shí)間點(diǎn),動(dòng)物體溫均明顯上升,與空白組比較有顯著性差異,而空白組各時(shí)間點(diǎn)體溫?zé)o明顯變化;陽(yáng)性藥復(fù)方乙酰水楊酸在造模后各時(shí)間點(diǎn)體溫明顯降低;高劑量組動(dòng)物在造模后第7 小時(shí)體溫明顯降低,與模型組比較有顯著性差異,以上結(jié)果表明,抗病毒顆粒具有一定的解熱作用,結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 抗病毒顆粒對(duì)干酵母致發(fā)熱大鼠模型體溫的影響 (Mean±SD)

    注:與模型組比較,*:P<0.05,**:P<0.01

    2.4 抗病毒顆粒對(duì)二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響 與對(duì)照組比較,抗病毒顆粒各劑量組及陽(yáng)性藥吲哚美辛組,均可明顯減輕小鼠的耳腫脹度,抑制率分別達(dá)38.08%、26.14%、25.23%、42.52%。以上結(jié)果表明,抗病毒顆粒具有較強(qiáng)的抗炎作用,呈現(xiàn)一定的劑量依賴關(guān)系,結(jié)果見(jiàn)表4。

    表4 抗病毒顆粒對(duì)小鼠耳腫脹度的影響 (Mean ± SD)

    注:與對(duì)照組比較,*:P<0.05,**:P<0.01

    3 討論

    抗病毒顆粒處方出自張仲景的《傷寒論》,其中處方中板藍(lán)根為君藥,板藍(lán)根具有清熱解毒、涼血消斑、潤(rùn)肺利咽之功效,研究表明,板藍(lán)根的水提液或板藍(lán)根制劑具有較強(qiáng)的抗流感病毒作用,對(duì)流感病毒、甲型流感病毒、乙型腦炎病毒、腮腺炎病毒、肝炎病毒、人巨細(xì)胞病毒、單純皰疹病毒和腎出血熱病毒均有良好的抑制作用[1,6];連翹具有清熱解毒、疏風(fēng)散熱、消腫散結(jié)等功效,具有抗菌、抗病毒、抗炎等作用,其對(duì)流感病毒、腮腺炎病毒、呼吸道病毒及畜禽感染的主要病毒具有很強(qiáng)的干擾和抑制作用;蘆根清熱生津;石膏外解肌熱,內(nèi)清肺火,地黃滋陰涼血,廣藿香則消暑濕寒熱??共《绢w粒具有清熱祛濕,涼血解毒之功效,具有解熱、抗病毒、抗炎等藥理作用,常用于病毒和細(xì)菌感染引起的流感、手足口病、上呼吸道感染、病毒性感冒及紅眼病等[7]。

    現(xiàn)代藥理研究發(fā)現(xiàn),抗病毒各種制劑均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抗病毒、抗炎、解熱等藥理作用。盧華等[8]研究發(fā)現(xiàn),抗病毒顆粒對(duì)流感病毒性肺炎小鼠有明顯的保護(hù)作用,可對(duì)2,4-二硝基苯酚所致大鼠體溫升高有明顯的抑制作用,能明顯對(duì)抗二甲苯所致的小鼠耳腫脹,對(duì)小鼠皮下棉球肉芽組織的增生有一定的抑制作用。張誠(chéng)光[9]等研究發(fā)現(xiàn),抗病毒顆粒能明顯延長(zhǎng)甲型流感病毒FM1株感染小鼠的平均存活時(shí)間和存活率,對(duì)甲型流感病毒FM1株感染小鼠的肺指數(shù)也有顯著抑制作用,同時(shí)它對(duì)2,4一二硝基苯酚所致大鼠發(fā)熱有顯著抑制作用,它還能使蛋清所致大鼠足腫脹明顯縮小。苗明三[10]采用2,4-二硝基苯酚大鼠發(fā)熱模型和內(nèi)毒素家兔發(fā)熱模型研究發(fā)現(xiàn),抗病毒口服液對(duì)兩種模型都具有較好的解熱作用。劉曉帆等[11]報(bào)道,抗病毒口服液對(duì)3種病毒株在雞胚體外有明顯的抑制作用或殺滅作用,在雞胚內(nèi)對(duì)雞胚尿囊液 HA 效價(jià)有明顯抑制趨勢(shì),但統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無(wú)差異顯著性。

    本試驗(yàn)研究結(jié)果顯示,抗病毒顆粒對(duì)金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌均有一定的抑制作用,其最低抑菌濃度(MIC)分別為:3.125、3.125、6.25 mg/mL生藥;對(duì)甲型流感病毒FM1引起的小鼠死亡有較好的保護(hù)作用;能明顯降低酵母所

    致大鼠發(fā)熱模型動(dòng)物體溫;能明顯抑制二甲苯所致小鼠耳腫脹的程度。本試驗(yàn)研究結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道基本一致,這說(shuō)明抗病毒顆粒具有較好的抑菌、抗病毒、解熱、抗炎作用,可為臨床應(yīng)用提供較好的理論依據(jù)??共《绢w粒作為畜禽用中藥,屬于綠色天然藥物,不僅能預(yù)防治療由于病毒和細(xì)菌感染引起的各類畜禽疾病,還能防止由于抗生素、激素濫用引起的各種藥物殘留問(wèn)題,這為畜禽的疾病防治提供了一種新的模式。

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