大口黑鱸對(duì)磷的最適需求量以及高水溶性 磷酸一二鈣的相對(duì)生物學(xué)利用率研究

時(shí) 博 郁歡歡 鄭銀樺 吳秀峰 陳 沛 梁旭方 薛 敏,3*

(1.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院飼料研究所，國(guó)家水產(chǎn)飼料安全評(píng)價(jià)基地，北京100081；2.華中農(nóng)業(yè)大學(xué)水產(chǎn)學(xué)院， 武漢430070；3.農(nóng)業(yè)部飼料生物技術(shù)重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室，北京100081)

大口黑鱸(Micropterussalmoides)，又名加州鱸，隸屬鱸形目(Perciforme)，太陽(yáng)魚(yú)科(Ceutrarchidac)，黑鱸屬(Micropterus)。大口黑鱸為肉食性溫水魚(yú)類(lèi)，由于其具有生長(zhǎng)迅速、抗病力強(qiáng)、適溫性廣、肉質(zhì)鮮美等特點(diǎn)，現(xiàn)已推廣全國(guó)各地，成為我國(guó)淡水養(yǎng)殖業(yè)中的一類(lèi)重要品種[1]。

磷作為一種必需的礦物元素，在動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)中發(fā)揮著重要作用。磷是骨骼和鱗片的重要組成成分，也是ATP和磷酸肌酸的組成成分，參與體內(nèi)能量代謝；磷以磷脂的方式促進(jìn)脂類(lèi)物質(zhì)和脂溶性維生素的吸收，同時(shí)以磷酸根的形式參與糖、脂類(lèi)和蛋白質(zhì)等的代謝；血液中的磷酸鹽同時(shí)還是動(dòng)物體內(nèi)重要的緩沖物質(zhì)，參與維持體內(nèi)酸堿平衡[2]。磷雖然在動(dòng)物體內(nèi)扮演著重要的角色，但是也是造成水體富營(yíng)養(yǎng)化的主要元素之一。目前，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中，不同形式的磷酸鹽效價(jià)差異較大，過(guò)量或者未被有效利用的磷元素被排入到水環(huán)境中，直接引起水體的富營(yíng)養(yǎng)化，導(dǎo)致藻類(lèi)的大量繁殖和水體缺氧，殺死水生生物，使水體不適合人類(lèi)使用[3-4]。因此，研究魚(yú)類(lèi)對(duì)磷的最適需求量或?qū)ふ腋咝У牧姿猁}，不僅可以滿足魚(yú)類(lèi)生長(zhǎng)和生理健康的需求，同時(shí)可以在一定程度上減少磷對(duì)水體的污染。本試驗(yàn)通過(guò)在低磷基礎(chǔ)飼料中分別梯度添加磷酸二氫鈣(monocalcium phosphate，MCP)和高水溶性磷酸一二鈣(monodicalcium phosphate，MDCP)2種磷酸鹽，以生長(zhǎng)性能、氮和磷的消化率與沉積率、全魚(yú)和椎骨磷含量與全魚(yú)粗灰分含量為依據(jù)，研究大口黑鱸對(duì)飼料中磷的最適需求量以及高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率，為大口黑鱸飼料的配制提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)魚(yú)

試驗(yàn)用水產(chǎn)靶動(dòng)物為大口黑鱸，于2016年5月購(gòu)自佛山市三水白金水產(chǎn)種苗有限公司。試驗(yàn)正式開(kāi)始前，試驗(yàn)魚(yú)在養(yǎng)殖系統(tǒng)中暫養(yǎng)4周，暫養(yǎng)期間投喂暫養(yǎng)飼料。

1.2 試驗(yàn)飼料

MCP為分析純級(jí)別，無(wú)色薄片狀，鈣含量為15.1%，磷含量為22.6%，20 ℃下水中溶解度為1.99 g，購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。高水溶性MDCP采用直接法生產(chǎn)，濃磷酸與碳酸鈣發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，同時(shí)生成磷酸氫鈣和MCP的結(jié)晶體混合物，受試物高水溶性MDCP鈣含量為14.7%，磷含量為21.4%，20 ℃下水中溶解度為0.37 g，由云天化股份有限公司提供。MCP和高水溶性MDCP水溶性磷含量(占總磷的百分比)分別為92.0%和84.5%，根據(jù)HG/T 3776—2005規(guī)定的飼料級(jí)MDCP水溶性磷含量≥40%，本試驗(yàn)所用的高水溶性MDCP水溶性磷含量遠(yuǎn)高于上述標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

在大口黑鱸低磷基礎(chǔ)飼料(P0)配方中不添加外源磷，經(jīng)檢測(cè)其本底磷含量為6.6 g/kg。在低磷基礎(chǔ)飼料配方基礎(chǔ)上，分別添加8.86、11.08、13.29、15.51 g/kg MCP，以及9.34、11.67、14.01、16.34 g/kg高水溶性MDCP，使得2種磷源所提供的磷均分別為2.0、2.5、3.0、3.5 g/kg。低磷基礎(chǔ)飼料命名為P0，添加MCP的4種試驗(yàn)飼料依次命名為P2、P2.5、P3、P3.5，添加高水溶性MDCP的4種試驗(yàn)飼料依次命名為DP2、DP2.5、DP3、DP3.5。另外，在飼料中添加0.1%的三氧化二釔(Y2O3)作為測(cè)定養(yǎng)分消化率的指示劑。物料經(jīng)超微粉碎，均勻混合后，使用雙螺桿擠壓膨化機(jī)(洋工機(jī)械TSE65)擠壓膨化，制成顆粒飼料，自然晾干后于-20 ℃儲(chǔ)存?zhèn)溆?。試?yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)飼料組成及營(yíng)養(yǎng)水平

續(xù)表1項(xiàng)目 Items飼料 DietsP0P2P2.5P3P3.5DP2DP2.5DP3DP3.5預(yù)混料 Premix1)1.631.631.631.631.631.631.631.631.63面粉 Wheat flour15.0015.0015.0015.0015.0015.0015.0015.0015.00微晶纖維素 Microcrystalline cellulose9.378.488.268.047.828.448.207.977.74酵母提取物 Yeast extract1.001.001.001.001.001.001.001.001.00磷酸二氫鈣 MCP0.891.111.331.55高水溶性磷酸一二鈣 High soluble MDCP0.931.171.401.63合計(jì) Total100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00100.00營(yíng)養(yǎng)水平(干物質(zhì)基礎(chǔ)) Nutrient levels (DM basis)粗蛋白質(zhì) Crude protein46.747.147.347.347.346.847.346.847.2粗脂肪 Crude lipid12.111.412.512.211.611.412.112.112.4粗灰分 Crude ash6.847.797.798.088.247.747.517.987.95總能 Gross energy/(MJ/kg)20.119.920.120.020.520.020.120.120.1總磷 Total phosphorus0.660.910.940.981.040.900.940.991.05

1)預(yù)混料為每千克飼料提供Vitamin premix provided the following per kg of diets:VA 20 mg，VB110 mg，VB215 mg，VB615 mg，VB128 mg，VE 400 mg，VK320 mg，VD310 mg，煙酸胺 niacinaminde 100 mg，維生素C磷酸酯鈣 VC phosphate calcium (35%)1 000 mg，肌醇 inositol 200 mg，泛酸鈣 calcium pantothenate 40 mg，生物素 biotin 2 mg，葉酸 folic acid 10 mg，玉米蛋白粉 corn gluten meal 150 mg，CuSO4·5H2O 10 mg，F(xiàn)eSO4·H2O 300 mg，ZnSO4·H2O 200 mg，MnSO4·H2O 100 mg，KIO380 mg，Na2SeO310 mg，CoCl2·6H2O 5 mg，NaCl 100 mg，沸石粉 zeolite 695 mg。

1.3 分組及飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)進(jìn)行到第2周時(shí)，開(kāi)始每天在大口黑鱸的排糞高峰期(通過(guò)前1周的養(yǎng)殖過(guò)程，觀察排糞高峰所在時(shí)間段)進(jìn)行糞便收集，用虹吸法收集包膜完整成形糞便用于飼料中磷和氮消化率的測(cè)定，糞便樣品保存在-20 ℃條件下凍干待測(cè)。

8周生長(zhǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，禁食24 h，然后分別對(duì)各桶魚(yú)稱(chēng)重并統(tǒng)計(jì)攝食量、存活數(shù)，用于計(jì)算生長(zhǎng)指標(biāo)。每桶隨機(jī)取4尾魚(yú)，測(cè)量體長(zhǎng)、體重、內(nèi)臟重、肝臟重，用于計(jì)算形體指標(biāo)。每桶隨機(jī)取6尾魚(yú)，三氯叔丁醇麻醉后尾靜脈取血，采用氟化鈉草酸鉀抗凝劑，在 4 ℃、4 000 r/min的條件下離心10 min，取上層血漿保存于-80 ℃冰箱中待測(cè)。

1.4 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1 生長(zhǎng)指標(biāo)和形體指標(biāo)

各指標(biāo)計(jì)算公式如下：

攝食率(feeding rate，F(xiàn)R，%)=100×

總攝食量/{[(魚(yú)末重+魚(yú)初重+死魚(yú)總重)/2]試驗(yàn)天數(shù)}；

存活率(survival rate，SR,%)=100×終末魚(yú)數(shù)量/初始魚(yú)數(shù)量；

增重率(weight gain rate，WGR,%)=100×體增重/初始體重；

特定生長(zhǎng)率(specific growth rate，SGR,%/d)=100×(ln初始均重-ln終末均重)/試驗(yàn)天數(shù)；飼料系數(shù)(feed conversion ratio，F(xiàn)CR)=攝食量/(終末魚(yú)重+死亡魚(yú)重-初始魚(yú)重)；

肥滿度(condition factor，CF，g/cm3)=平均體重/平均體長(zhǎng)3；

肝體比(hepatosomatic index，HSI，%)=100×肝臟重/體重；

臟體比(viscerasomatic index,VSI,%)=100×內(nèi)臟重/體重。

1.4.2 營(yíng)養(yǎng)成分分析

2種磷酸鹽在水中溶解度的檢測(cè)方法均為析晶法，水溶性磷含量采用磷鉬酸喹啉重量法(GB 22549—2017、GB 22548—2017)測(cè)定。飼料中水分、粗灰分、粗蛋白質(zhì)、粗脂肪含量和總能分別采用105 ℃常壓干燥法(GB/T 6435—2006)、550 ℃灼燒法(GB/T 6438—2007)、凱氏定氮法(GB/T 6432—1994)、全脂肪測(cè)定法和氧彈儀燃燒法(GB/T 6432—1994)測(cè)定。糞便樣品及飼料中磷含量采用電感耦合等離子體原子發(fā)射光譜(ICP-AES)法檢測(cè)。全魚(yú)和椎骨磷含量采用鉬黃分光光度計(jì)法(GB/T 6437—2002)檢測(cè)。全魚(yú)粗灰分含量測(cè)定方法同飼料中粗灰分含量測(cè)定方法。

1.4.3 磷和氮消化率

磷和氮消化率的計(jì)算公式如下：

ADCd=100-[1-(Nf/Nd)×(Md/Mf)]。

式中：ADCd表示某營(yíng)養(yǎng)成分(磷或氮)消化率(%)；Md表示飼料中標(biāo)記物(Y2O3)的百分含量(%)；Mf表示糞便中標(biāo)記物(Y2O3)的百分含量(%)；Nd表示飼料中該營(yíng)養(yǎng)成分的百分含量(%)；Nf表示糞便中該營(yíng)養(yǎng)成分的百分含量(%)。

磷和氮沉積率的計(jì)算公式如下：

磷沉積率(%)=100×(Wt×Wtph-W0×W0ph)/(Wf×Wfph)； 氮沉積率(%)=100×(Wt×Wtp-W0×W0p)/(Wf×Wfp)。

式中：W0表示初重(g)；Wt表示末重(g)；Wtph表示終末全魚(yú)磷含量(%)；W0ph表示初始全魚(yú)磷含量(%)；Wtp表示終末全魚(yú)氮含量(%)；W0p表示初始全魚(yú)氮含量(%)；Wf表示飼料投喂量(%)；Wfph表示飼料磷含量(%)；Wfp表示飼料氮含量(%)。

1.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤(mean±SE)表示，數(shù)據(jù)分析使用軟件SPSS 20.0進(jìn)行單因素方差分析(one-way ANOVA)和雙因素方差分析(two-way ANOVA)，通過(guò)Duncan氏多重比較法檢驗(yàn)差異顯著性，顯著水平為P<0.05。以回歸系數(shù)分值評(píng)估，分別采用折線模型和二元回歸模型分析大口黑鱸飼料中磷的最適需求量，并采用可消化磷(可消化磷=總磷×磷消化綠)計(jì)算磷的最適需求量。

設(shè)定MCP的生物利用率為100%，采用斜率比法計(jì)算高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率。以MCP為標(biāo)準(zhǔn)物，設(shè)其回歸方程的斜率為bs，高水溶性MDCP為受試物，回歸方程的斜率為bt，則高水溶性MDCP的相對(duì)生物學(xué)利用率計(jì)算公式如下：

水溶性MDCP的相對(duì)生物學(xué)利用率(%)=100× 受試物回歸方程的斜率(bt)/ 標(biāo)準(zhǔn)物回歸方程的斜率(bs)。

2 結(jié)果與分析

2.1 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能的影響

試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，各組大口黑鱸的存活率均在99%以上。不同磷源和磷添加水平對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能的影響見(jiàn)表2。單因素方差分析結(jié)果顯示，飼料中添加不同水平的MCP和高水溶性MDCP均顯著提高大口黑鱸的增重率和特定生長(zhǎng)率(P<0.05)，顯著降低飼料系數(shù)和肥滿度(P<0.05)。隨著MCP添加水平的升高，大口黑鱸的增重率有先上升后穩(wěn)定的趨勢(shì)，以P0組最低，顯著低于其他各組(P<0.05)；隨高水溶性MDCP添加水平的升高，大口黑鱸的增重率一直處于上升的趨勢(shì)，以P0組最低，顯著低于其他各組(P<0.05)。雙因素方差分析結(jié)果顯示，磷源對(duì)大口黑鱸各生長(zhǎng)指標(biāo)均無(wú)顯著影響(P>0.05)，且磷源與磷添加水平在各生長(zhǎng)指標(biāo)上不存在顯著的交互作用(P>0.05)。由于大口黑鱸增重率隨高水溶性MDCP添加水平的升高持續(xù)上升，尚未到達(dá)平臺(tái)期。因此，本試驗(yàn)選取MCP組增重率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行折線模型分析，得到大口黑鱸增重率最高時(shí)飼料可消化磷含量為0.51%(圖1)。

2.2 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸氮和磷消化率與沉積率的影響

不同磷源和磷添加水平對(duì)大口黑鱸氮和磷消化率與沉積率的影響見(jiàn)表3。單因素方差分析結(jié)果顯示，飼料中添加不同水平的MCP和高水溶性MDCP均顯著提高了大口黑鱸的磷消化率和沉積率。隨MCP添加水平的升高，磷消化率有上升的趨勢(shì)，以P0組最低，顯著低于其他各組(P<0.05)；磷沉積率有先上升后降低的趨勢(shì)，以P0組最低、P2.5組最高，這2組與其他組均有顯著差異(P<0.05)。隨高水溶性MDCP添加水平的升高，磷消化率有上升的趨勢(shì)，以P0組最低、DP3.5組最高，這2組與其他組均有顯著差異(P<0.05)；磷沉積率有先上升后降低的趨勢(shì)，以P0組最低、DP3組最高，這2組與其他組均有顯著差異(P<0.05)。隨MCP和高水溶性MDCP添加水平的升高，氮消化率與沉積率均無(wú)規(guī)律性變化。雙因素方差分析結(jié)果顯示，磷源對(duì)大口黑鱸的氮和磷消化率與沉積率均無(wú)顯著影響(P>0.05)，且磷源與磷添加水平在氮和磷消化率與沉積率上不存在顯著的交互作用(P>0.05)。選取MCP組磷沉積率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行二元回歸模型分析，得到大口黑鱸磷沉積率最高時(shí)的飼料可消化磷含量為0.51%(圖2)。選取高水溶性MDCP組磷沉積率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行折線模型分析，得到大口黑鱸磷沉積率最高時(shí)的飼料可消化磷含量為0.52%(圖3)。

同行數(shù)據(jù)肩標(biāo)不同字母表示差異顯著(P<0.05)。MCP：磷酸二氫鈣；MDCP：磷酸一二鈣。下表同。

Values in the same row with different letter superscripts mean significant difference (P<0.05). MCP: monocalcium phosphate; MDCP: monodicalcium phosphate. The same as below.

2.3 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸全魚(yú)和椎骨磷含量以及全魚(yú)粗灰分含量的影響

不同磷源和磷添加水平對(duì)大口黑鱸全魚(yú)和椎骨磷含量以及與全魚(yú)粗灰分含量的影響見(jiàn)表4。單因素方差分析結(jié)果顯示，飼料中添加不同水平的MCP和高水溶性MDCP均顯著提高大口黑鱸的椎骨磷含量和全魚(yú)粗灰分含量(P<0.05)。隨著MCP添加水平的升高，全魚(yú)粗灰分含量有先增加后穩(wěn)定的趨勢(shì)，以P0組最低，顯著低于其他各組(P<0.05)。隨著高水溶性MDCP添加水平的升高，全魚(yú)粗灰分含量有增加的趨勢(shì)，以P0組最低，顯著低于其他各組(P<0.05)。雙因素方差分析結(jié)果顯示，磷源對(duì)全魚(yú)和椎骨磷含量以及全魚(yú)粗灰分含量均無(wú)顯著影響(P>0.05)，且磷源與磷添加水平在全魚(yú)和椎骨磷含量以及全魚(yú)粗灰分含量上不存在顯著的交互作用(P>0.05)。

2.4 高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率

分別以增重率和磷沉積率為指標(biāo)，高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率見(jiàn)表5。由表中數(shù)據(jù)可知，以增重率和磷沉積率為指標(biāo)，高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率分別為100%和118%。

圖1 飼料可消化磷含量與大口黑鱸 WGR之間關(guān)系的折線模型分析Fig.1 Broken-line analysis of the relationship between dietary digestible phosphorus content and WGR of largemouth bass表3 不同磷源和磷添加水平對(duì)大口黑鱸氮和磷的消化率與沉積率的影響Table 3 Effects of different phosphorus sources and phosphorus supplemental levels on ADCp, ADCn, PRR and NRR of largemouth bass %

3 討 論

3.1 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能的影響

本研究結(jié)果顯示，在攝食率沒(méi)有顯著差異的情況下，隨著MCP添加水平的升高，大口黑鱸的增重率有增加的趨勢(shì)。這說(shuō)明，在一定范圍內(nèi)，磷添加水平的升高對(duì)大口黑鱸生長(zhǎng)性能有促進(jìn)作用，這與在卡特拉魚(yú)(Catlacatla)[5]、胭脂魚(yú)(Myxocyprinusasiaticus)[6]、黑鯛(Blackseabream)[7]、黑線鱘魚(yú)(Acipensersinensis)[8]、鱒魚(yú)(Squaliobarbusourriculus)[9]、歐洲白魚(yú)(Alburnusalburnus)[10]上的研究結(jié)果一致，表明在一定范圍內(nèi)磷的添加可以促進(jìn)魚(yú)體的生長(zhǎng)，提高魚(yú)體的增重率。

圖2 飼料可消化磷含量與大口黑鱸磷沉積率 之間關(guān)系的二元回歸模型分析(以MCP為磷源)Fig.2 Binary regression model analysis of the relationship between dietary digestible phosphorus content and PRR of largemouth bass (MCP as phosphorus source)

圖3 飼料可消化磷含量與大口黑鱸 磷沉積率之間關(guān)系的折線模型分析 (以高水溶性MDCP為磷源)Fig.3 Broken-line analysis of the relationship between dietary digestible phosphorus content and PRR of largemouth bass (high soluble MDCP as phosphorus source)表4 不同磷源和磷添加水平對(duì)大口黑鱸骨骼和全魚(yú)磷含量以及全魚(yú)粗灰分含量的影響Table 4 Effects of different phosphorus sources and phosphorus supplemental levels on phosphorus contents of vertebra and whole body, ash content of whole body of largemouth bass

%

表5 高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率

本研究結(jié)果顯示，P0組的特定生長(zhǎng)率顯著低于其他組，而飼料系數(shù)顯著高于其他組。這說(shuō)明磷的缺乏會(huì)導(dǎo)致大口黑鱸生長(zhǎng)受阻，這與在吉富羅非幼魚(yú)(Oreochromisniloticus)[11]、西伯利亞鱘魚(yú)(AcipenserbaeriBrandt)[12]、牙鲆(Paralichthysolivaceus)[13]、大菱鲆(Scophthalmusmaximus)[13]上的研究結(jié)果一致，表明魚(yú)類(lèi)在低磷飼料下會(huì)表現(xiàn)出生長(zhǎng)不良和飼料利用效率降低。這有可能是由于，在低磷情況下，大部分的磷用于維持其他的生理代謝，導(dǎo)致用于生長(zhǎng)的磷不足。也有研究表明幼齡的動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)素的缺乏比晚期發(fā)育階段更敏感，這是因?yàn)樵诳焖偕L(zhǎng)階段可以更有效地利用體內(nèi)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)[13]。

本研究結(jié)果還顯示，P0組的肥滿度顯著高于其他組。有研究表明，磷協(xié)同鈣可以促進(jìn)骨骼的發(fā)育，同時(shí)鈣、磷的吸收存在相互促進(jìn)作用[14]。同時(shí)，還有研究表明，磷對(duì)脂肪也具有一定的影響，磷的增加導(dǎo)致魚(yú)體脂肪含量的降低[8]?？赡苁怯捎谝陨?種因素的共同作用導(dǎo)致添加磷后魚(yú)體肥滿度降低。

3.2 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸氮和磷消化率與沉積率的影響

營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化率是用來(lái)衡量動(dòng)物對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分消化和吸收效率的指標(biāo)，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的沉積率是用來(lái)衡量營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)在動(dòng)物體內(nèi)沉積效率的指標(biāo)。本研究發(fā)現(xiàn)，飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸的氮消化率均沒(méi)有產(chǎn)生顯著影響，且各組氮消化率均在96%左右。但是，飼料中添加不同水平的MCP和高水溶性MDCP后，大口黑鱸氮沉積率均有不同程度的升高，且P2.5組氮沉積率顯著高于P0組。這表明，在一定范圍內(nèi)磷添加水平的升高可以提高魚(yú)體蛋白質(zhì)含量。Roy等[8]發(fā)現(xiàn)磷的缺乏不僅會(huì)引起脂肪的沉積，同時(shí)還會(huì)引起魚(yú)體蛋白質(zhì)含量的降低。Cheng等[15]發(fā)現(xiàn)肌肉中蛋白質(zhì)的含量會(huì)因磷的缺乏而下降。Roy等推測(cè)其原因可能是由于磷的缺乏抑制了脂肪酸的β氧化，而長(zhǎng)鏈脂肪酸進(jìn)入線粒體進(jìn)行氧化前，需要經(jīng)過(guò)酶活化生成脂酰輔酶A，這一過(guò)程中每激活1分子的脂肪酸需要消耗2個(gè)ATP，而磷的缺乏可以抑制這一過(guò)程，從而導(dǎo)致機(jī)體利用脂肪供能作用降低，選擇了蛋白質(zhì)作為能量的來(lái)源[8]。磷的消化率代表了魚(yú)體對(duì)磷的消化吸收程度，能比增重率更加直接地反映出磷的可利用性[16]。本研究結(jié)果顯示，P0組的磷消化率和沉積率顯著低于其他各組。這與在建鯉(Cyprinuscarpiovar. Jian)[17]上的研究結(jié)果類(lèi)似，表明低磷條件下會(huì)阻礙魚(yú)體對(duì)磷的消化與體內(nèi)磷的沉積。

3.3 飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸全魚(yú)和椎骨磷含量以及全魚(yú)粗灰分含量的影響

在研究魚(yú)類(lèi)磷需求量時(shí)，全魚(yú)磷含量通常作為主要的判定標(biāo)準(zhǔn)之一[18-19]。由于魚(yú)類(lèi)大部分磷存在于骨骼中，而且骨骼參與磷的代謝，因此椎骨磷的含量通常也被作為確定飼料中最適磷含量的參考標(biāo)準(zhǔn)之一[8,20]。本研究中，飼料中添加不同水平MCP和高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸全魚(yú)磷含量的影響不顯著。這一結(jié)果表明，在缺磷的情況下，魚(yú)體內(nèi)的磷并沒(méi)有大量流失。這與在金頭鯛(Sparusaurata)[21]和美洲慈鯛(Cichlasomaurophthalmus)[22]上的研究結(jié)果一致，說(shuō)明全魚(yú)磷含量受飼料磷含量的影響較小。這可能是由于，骨基質(zhì)是一種有機(jī)成分，主要由無(wú)機(jī)礦物質(zhì)和膠原組成，在礦化過(guò)程中沉積為鈣的羥基化聚合物[Ca10(PO4)6(OH)2]，其中鈣與磷的比例為5∶3[8]。而此過(guò)程中僅有少部分的磷沉積在骨骼中，大部分的磷以磷酸鈣的形式儲(chǔ)存在體內(nèi)，用于軟骨組織的生長(zhǎng)，當(dāng)體內(nèi)磷缺乏時(shí)，首先會(huì)利用骨骼中的磷，從而導(dǎo)致鈣的大量流失，所以磷的缺乏以鈣的流失為特征，而不是以體內(nèi)磷的流失為特征[15,24]。本研究中，P0組椎骨磷含量顯著低于添加磷酸鹽的各組，這一結(jié)果表明磷的缺乏會(huì)導(dǎo)致沉積在椎骨中的磷減少，這與在黑鯛[23]上的研究結(jié)果一致。但是，添加磷酸鹽的各組間椎骨磷含量差異不顯著。由于本試驗(yàn)在測(cè)定椎骨磷時(shí)未經(jīng)脫脂處理，其中可能會(huì)有因存在少量磷脂所導(dǎo)致的誤差，這可能是添加磷酸鹽的各組間椎骨磷含量差異不顯著的原因之一。

全魚(yú)粗灰分含量也常被作為評(píng)價(jià)魚(yú)體磷含量狀況的指標(biāo)[24]。本研究顯示，飼料磷添加水平顯著影響全魚(yú)粗灰分含量。全魚(yú)粗灰分與飼料磷添加水平之間這種正相關(guān)關(guān)系在先前的研究[25-26]中都有發(fā)現(xiàn)。例如，在西伯利亞幼鱘上的研究發(fā)現(xiàn)，全魚(yú)粗灰分含量受飼料磷添加水平的顯著影響，且隨飼料磷添加水平的升高不斷上升[27]。在黑鯛上的研究發(fā)現(xiàn)，全魚(yú)粗灰分含量隨飼料磷添加水平的升高而上升[28]，同時(shí)在翹嘴紅鲌(Erythroculterilishaeformis)上也有類(lèi)似的發(fā)現(xiàn)[29]。本研究結(jié)果表明，當(dāng)飼料總磷含量小于0.98%時(shí)，全魚(yú)粗灰分含量與飼料磷添加水平間的正相關(guān)關(guān)系顯著，當(dāng)飼料總磷含量大于0.98%時(shí)，全魚(yú)粗灰分含量與飼料磷添加水平間的正相關(guān)關(guān)系減弱。

3.4 高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)利用率

本試驗(yàn)將高水溶性MDCP應(yīng)用到水產(chǎn)動(dòng)物上，以前人的研究結(jié)果為依據(jù)，選取MCP為標(biāo)準(zhǔn)，研究高水溶性MDCP的相對(duì)生物學(xué)利用率。研究結(jié)果表明，以增重率和磷沉積率為衡量指標(biāo)，高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)效價(jià)分別為100%和118%，本試驗(yàn)所用高水溶性MDCP含有較高水平的水溶性磷(占總磷的84.5%)，遠(yuǎn)高于化工標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的飼料級(jí)MDCP水溶性磷含量(不低于總磷的40%)。磷酸鹽中水溶性磷含量會(huì)影響其利用率，水溶性磷含量越高，其利用率越高[33]。此外，本試驗(yàn)所用高水溶性MDCP結(jié)晶混合物中MCP所占比例較高，MCP利用率高于磷酸氫鈣，是水產(chǎn)飼料中利用率較高的磷酸鹽[30-31]。本試驗(yàn)結(jié)果表明，高水溶性MDCP在生產(chǎn)上可以替代MCP在水產(chǎn)飼料中使用，同時(shí)還具有價(jià)格低于MCP的優(yōu)勢(shì)。此外，添加高水溶性MDCP之后大口黑鱸的增重率一直處于上升的趨勢(shì)，未達(dá)到平臺(tái)期，說(shuō)明飼料中添加高水溶性MDCP對(duì)大口黑鱸可能具有更高的生長(zhǎng)潛能。

本試驗(yàn)分別以MCP和高水溶性MDCP為磷源，得出大口黑鱸對(duì)磷的最適需求量。目前，魚(yú)類(lèi)對(duì)磷需求量的研究基本采用高效價(jià)的磷酸二氫鹽為磷源。例如，以MCP為磷源，史氏鱘幼鱘(Acipenserschrencki)磷的需求量為0.88%～1.00%[34]；西伯利亞幼鱘磷需求量為0.69%[28]；軍曹魚(yú)(Rachycentroncanadum)磷需求量為0.91%～0.95%[16]。以磷酸二氫鉀為磷源，吉富羅非魚(yú)成魚(yú)磷需求量為0.88%～1.23%[35]；花魚(yú)磷需求量為0.91%～1.17%[31]。以磷酸二氫鈉為磷源，花鱸(Lateolabraxmaculatus)幼魚(yú)磷需求量為1.71%[36]。但是，有關(guān)以高水溶性MDCP為磷源，獲取水產(chǎn)動(dòng)物對(duì)磷的需求量的研究尚未見(jiàn)報(bào)道。本研究通過(guò)比較2種磷源的生物學(xué)利用率，同時(shí)以磷沉積率為指標(biāo)獲得較為一致的磷需求量，所以能更加準(zhǔn)確的說(shuō)明大口黑鱸對(duì)飼料中磷的最適需求量。

4 結(jié) 論

以MCP為磷源，飼料可消化磷含量為0.51%時(shí)，增重率和磷沉積率達(dá)到最高。以高水溶性MDCP為磷源，飼料可消化磷含量為0.52%時(shí)，磷沉積率達(dá)到最高。以增重率和磷沉積率為指標(biāo)，高水溶性MDCP相對(duì)于MCP的生物學(xué)效價(jià)分別為100%和118%。