3種水產(chǎn)藥物對鱸鯉和白甲魚的急性毒性試驗(yàn)

張建明，姜 華，田 甜，姜 偉，胡亞平

( 中國長江三峽集團(tuán)公司 中華鱘研究所，三峽工程魚類資源保護(hù)湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 湖北 宜昌 443100 )

鱸鯉(Percocyprispingi)，又稱花魚、金甲魚，屬鯉科、鲃亞科、鱸鯉屬，主要分布于宜昌以西的長江上游的干支流、西江流域、南盤江等水系[1]。鱸鯉是產(chǎn)區(qū)的大型經(jīng)濟(jì)魚類，長江上游產(chǎn)量較大，但受到環(huán)境污染、過度捕撈等人為因素的影響，近年來鱸鯉數(shù)量急劇下降，現(xiàn)已被評為長江一級急切保護(hù)動物[2]和四川省珍稀保護(hù)魚類[3]。白甲魚(Onychostomasima)，又稱毛白甲、突吻魚，屬鯉科、鲃亞科、白甲魚屬，是長江重要的經(jīng)濟(jì)魚類之一，自然分布于長江水系的干流、支流[4]。近年來，由于江河生態(tài)環(huán)境破壞、過度捕撈等因素的影響，白甲魚資源急劇下降[5]，已成為長江流域重點(diǎn)保護(hù)物種之一。

目前，鱸鯉、白甲魚的研究主要集中在馴養(yǎng)繁育、胚胎發(fā)育、苗種培育、生理特性等方面[6-9]，尚未見有關(guān)鱸鯉幼魚和白甲魚幼魚藥物急性毒性試驗(yàn)的報道。筆者通過對鱸鯉和白甲魚幼魚開展水產(chǎn)藥物急性毒性試驗(yàn)研究，旨在為鱸鯉和白甲魚幼魚培育階段用藥提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)魚來自中國長江三峽集團(tuán)公司中華鱘研究所烏東德增殖放流站人工培育的鱸鯉和白甲魚幼魚，規(guī)格整齊、行動敏捷、無病無傷。鱸鯉體長(14.07±1.29) cm，體質(zhì)量(36.71±4.91) g；白甲魚體長(10.40±1.14) cm，體質(zhì)量(21.55±4.68) g。試驗(yàn)前在圓形暫養(yǎng)池(直徑3.0 m，水深0.7 m)中暫養(yǎng)5 d，試驗(yàn)開始前2 d及試驗(yàn)期間停食。

試驗(yàn)用藥規(guī)格及生產(chǎn)廠家見表1。

表1 試驗(yàn)藥物規(guī)格與成分

1.2 試驗(yàn)條件

試驗(yàn)在容積為20 L的塑料桶內(nèi)進(jìn)行，試驗(yàn)用水為經(jīng)過曝氣和沉淀后的金沙江水，水溫(22±1) ℃，pH 7.9±0.2，溶解氧(6.7±0.5) mg/L。試驗(yàn)期間保持試驗(yàn)場所安靜。

1.3 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)采用靜態(tài)急性毒性試驗(yàn)法[10-12]，試驗(yàn)過程中為保持溶解氧含量，各試驗(yàn)組微充氣。

1.3.1 預(yù)試驗(yàn)

為確定正式試驗(yàn)所需藥物質(zhì)量濃度范圍，在正式試驗(yàn)前根據(jù)魚病防治的藥物常用量[13]，適當(dāng)調(diào)整質(zhì)量濃度比例進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，觀察試驗(yàn)魚活動情況和存活情況，預(yù)試驗(yàn)持續(xù)觀察96 h，每日觀察并記錄死亡魚數(shù)量。

1.3.2 正式試驗(yàn)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)得出的結(jié)果，在試驗(yàn)魚24 h全致死質(zhì)量濃度和96 h無死亡質(zhì)量濃度間按等對數(shù)間距設(shè)置5個質(zhì)量濃度組(表2～表3)，每個質(zhì)量濃度組設(shè)2個平行，另設(shè)1個空白對照組，每個試驗(yàn)組放幼魚10尾。

配制好試驗(yàn)藥物后，隨機(jī)放入試驗(yàn)魚，同一試驗(yàn)的試驗(yàn)用魚在10 min內(nèi)完成分組，由低質(zhì)量濃度組到高質(zhì)量濃度組依次進(jìn)行，試驗(yàn)過程中不更換藥液。試驗(yàn)開始后，分別于24、48、72、96 h時記錄和統(tǒng)計(jì)魚的存活情況，當(dāng)試驗(yàn)魚停止呼吸、對外界刺激無反應(yīng)時可判定為死亡。

表2 鱸鯉幼魚試驗(yàn)藥物的質(zhì)量濃度梯度 mg/L

表3 白甲魚幼魚試驗(yàn)藥物的質(zhì)量濃度梯度 mg/L

1.4 數(shù)據(jù)處理與分析

采用寇氏法估算半致死質(zhì)量濃度(LC50)、安全質(zhì)量濃度(SC)[14-15]：

LogLC50=Xm-d(p-0.5)

SC=48 hLC50×0.3/(24 hLC50/48 hLC50)2

式中，Xm為最大質(zhì)量濃度的對數(shù)，d為相鄰質(zhì)量濃度組比值的對數(shù)，p為死亡率。

2 結(jié) 果

2.1 聚維酮碘對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設(shè)定的聚維酮碘藥物質(zhì)量濃度梯度放入各試驗(yàn)組后，試驗(yàn)初期各試驗(yàn)組中鱸鯉呼吸正常，對外界刺激反應(yīng)迅速，然而各試驗(yàn)組白甲魚卻表現(xiàn)出了不同程度狂躁不安、上下竄游的現(xiàn)象，高質(zhì)量濃度試驗(yàn)組甚至狂游撞擊試驗(yàn)桶，個別出現(xiàn)躍出桶外的現(xiàn)象。63.39、79.80、100.00 mg/L試驗(yàn)組中的鱸鯉和77.45、88.00、100.00 mg/L試驗(yàn)組中的白甲魚分別于3 h后和2 h后開始出現(xiàn)異常反應(yīng)，主要癥狀相似，均呈現(xiàn)初期游動緩慢、漂浮于水面、對外界刺激反應(yīng)遲鈍的現(xiàn)象，隨后試驗(yàn)魚出現(xiàn)失衡、側(cè)翻、呼吸緩慢等癥狀，隨著試驗(yàn)時間的增加，各試驗(yàn)組開始陸續(xù)出現(xiàn)死亡，死亡的鱸鯉和白甲魚體表黏液增多，體色發(fā)白。鱸鯉對照組和40.00 mg/L試驗(yàn)組在試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，50.35、63.39 mg/L和79.80 mg/L試驗(yàn)組的鱸鯉24 h死亡率分別為0、5%和55%，48 h死亡率分別為0、15%和70%，72 h死亡率分別為0、20%和75%，96 h死亡率分別為10%、45%和85%。鱸鯉100.00 mg/L試驗(yàn)組24 h死亡率為100%。白甲魚對照組和60.00 mg/L試驗(yàn)組在試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。68.47、77.45 mg/L和88.00 mg/L試驗(yàn)組的白甲魚24 h死亡率分別為0、0和5%，48 h死亡率分別為0、0和35%，72 h死亡率分別為0、5%和50%，96 h死亡率分別為15%、35%和75%。白甲魚100.00 mg/L試驗(yàn)組的24 h死亡率為100%。

2.2 敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設(shè)定的敵百蟲藥物質(zhì)量濃度梯度放入各試驗(yàn)組后，試驗(yàn)初期，各試驗(yàn)組中鱸鯉和白甲魚均未出現(xiàn)異常反應(yīng)。5 h后，3.85、6.00 mg/L試驗(yàn)組中的鱸鯉和2.00、2.83、4.00 mg/L試驗(yàn)組中的白甲魚均開始出現(xiàn)相似的異常行為，即反應(yīng)遲鈍、游動遲緩，進(jìn)而魚體出現(xiàn)側(cè)翻，間歇性呼吸，隨后各試驗(yàn)組出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，死亡的鱸鯉和白甲魚體表附有大量黏液，體色變淺發(fā)白。對照組和1.00 mg/L試驗(yàn)組在整個試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。1.57、2.45 mg/L和3.85 mg/L試驗(yàn)組的鱸鯉24 h死亡率分別為0、5%和30%，48 h死亡率分別為0、5%和55%，72 h死亡率分別為5%、10%和80%，96 h死亡率分別為10%、20%和85%。鱸鯉6.00 mg/L試驗(yàn)組24 h死亡率為100%。白甲魚對照組和1.00 mg/L試驗(yàn)組在整個試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。1.41、2.00 mg/L和2.83 mg/L試驗(yàn)組的白甲魚24 h死亡率分別為0、0和15%，48 h死亡率分別為0、55%和85%，72 h死亡率分別為15%、90%和100%，96 h死亡率分別為35%、100%和100%。白甲魚4.00 mg/L試驗(yàn)組24 h死亡率為100%。

2.3 氯胺T對鱸鯉和白甲魚幼魚的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果

將鱸鯉和白甲魚幼魚按照設(shè)定的氯胺T藥物質(zhì)量濃度梯度放入各試驗(yàn)組后，試驗(yàn)初期各試驗(yàn)組鱸鯉均表現(xiàn)出了不同程度狂躁不安、上下竄游的現(xiàn)象，高質(zhì)量濃度試驗(yàn)組甚至出現(xiàn)狂游，個別試驗(yàn)魚出現(xiàn)跳出桶外的現(xiàn)象。而各試驗(yàn)組白甲魚無明顯的異常行為。12.27、19.23、30.00 mg/L試驗(yàn)組中的鱸鯉和15.81、19.88、25.00 mg/L試驗(yàn)組中的白甲魚分別于2 h和7 h后，開始表現(xiàn)出反應(yīng)遲緩、游動無力、漂浮水面等異常行為，進(jìn)而身體失去平衡、側(cè)翻、呼吸緩慢，隨著試驗(yàn)時間的增加，各試驗(yàn)組陸續(xù)出現(xiàn)死亡，死亡的鱸鯉和白甲魚體表黏液增多，體色變淺發(fā)白。對照組和5.00 mg/L組的鱸鯉幼魚在試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。7.83、12.27 mg/L和19.23 mg/L試驗(yàn)組的鱸鯉24 h死亡率分別為5%、20%和55%，48 h死亡率分別為10%、35%和75%，72 h死亡率分別為10%、55%和80%，96 h死亡率分別25%、60%和95%。30.00 mg/L試驗(yàn)組的鱸鯉24 h死亡率為100%。對照組和10.00 mg/L組的白甲魚在試驗(yàn)過程中未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象。12.57、15.81 mg/L和19.88 mg/L試驗(yàn)組的白甲魚24 h死亡率分別為0、10%和35%，48 h死亡率分別為0、50%和75%，72 h死亡率分別為15%、70%和90%，96 h死亡率分別為20%、95%和100%。25.00 mg/L試驗(yàn)組的白甲魚24 h死亡率為100%。

2.4 3種水產(chǎn)藥物對鱸鯉和白甲魚幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

3種水產(chǎn)藥物對鱸鯉幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度見表4。由表4可見，聚維酮碘、敵百蟲和氯胺T對鱸鯉幼魚的24 h半致死質(zhì)量濃度分別為78.02、4.11 mg/L和16.83 mg/L；48 h半致死質(zhì)量濃度分別為73.74、3.68 mg/L和14.09 mg/L；72 h半致死質(zhì)量濃度分別為72.10、3.15 mg/L和12.60 mg/L；96 h半致死質(zhì)量濃度分別為65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L；安全質(zhì)量濃度分別為19.76、0.89 mg/L和2.96 mg/L。3種水產(chǎn)藥物對白甲魚幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度見表5。由表5可見，聚維酮碘、敵百蟲和氯胺T對白甲魚幼魚的24 h半致死質(zhì)量濃度分別為93.21、3.19 mg/L和20.11 mg/L ；48 h半致死質(zhì)量濃度分別為89.70、2.07 mg/L和16.74 mg/L；72 h半致死質(zhì)量濃度分別為87.44、1.66 mg/L和14.93 mg/L；96 h半致死質(zhì)量濃度分別為79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L；安全質(zhì)量濃度分別為24.92、0.26 mg/L和3.48 mg/L。

表4 3種藥物對鱸鯉幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

表5 3種藥物對白甲魚幼魚的半致死質(zhì)量濃度和安全質(zhì)量濃度

3 討 論

3.1 3種水產(chǎn)藥物對鱸鯉和白甲魚幼魚的毒性評價

半致死質(zhì)量濃度常用來衡量藥物對試驗(yàn)魚毒性的大小，半致死質(zhì)量濃度值與藥物的毒性呈負(fù)相關(guān)，即半致死質(zhì)量濃度值越小，藥物的毒性越大[15]。常以96 h半致死質(zhì)量濃度值作為藥物毒性評價的指標(biāo)，根據(jù)有毒物質(zhì)對魚類急性毒性的評價標(biāo)準(zhǔn)，可分為4個等級[16](藥物96 h半致死質(zhì)量濃度<0.1 mg/L，屬劇毒藥物；96 h半致死質(zhì)量濃度為0.1～1，屬高毒藥物；96 h半致死質(zhì)量濃度為1～10，屬中毒藥物；96 h半致死質(zhì)量濃度>10，屬低毒藥物)。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，聚維酮碘、敵百蟲、氯胺T對鱸鯉幼魚的96 h半致死質(zhì)量濃度為65.13、2.89 mg/L和10.79 mg/L，對白甲魚幼魚的96 h半致死質(zhì)量濃度為79.95、1.49 mg/L和13.62 mg/L。參考有毒物質(zhì)的評價標(biāo)準(zhǔn)，敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚是中毒藥物，氯胺T和聚維酮碘對二者是低毒藥物。

3.2 鱸鯉和白甲魚幼魚對3種藥物的耐受性差異

3.3 生產(chǎn)過程中3種藥物的用藥安全及注意事項(xiàng)

聚維酮碘為廣譜消毒劑，主要用于魚卵、水生動物體表消毒。聚維酮碘常規(guī)使用量因疾病種類、水生動物種類、藥浴時間和頻次而差別較大，如草魚出血病預(yù)防用藥30 mg/L浸浴15～20 min，鰻鱺(Anguillajaponica)爛鰓病治療用藥0.8～1.5 mg/L浸浴24 h，連用2次，紅頭病用藥1～2 mg/L浸浴24 h，連續(xù)2～3次[13]。聚維酮碘對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質(zhì)量濃度分別為19.76 mg/L和24.92 mg/L，遠(yuǎn)高于長時間低用藥量，稍低于短時間高用藥量，但40 mg/L試驗(yàn)組鱸鯉和60 mg/L試驗(yàn)組白甲魚在96 h內(nèi)未發(fā)生死亡現(xiàn)象，說明在實(shí)際生產(chǎn)過程中可按常用量使用。

敵百蟲，可防治魚體外寄生指環(huán)蟲(Dactylogyrus)、三代蟲(Gyrodactylus)等吸蟲，腸內(nèi)寄生的絳蟲、棘頭蟲等蠕蟲，此外還可驅(qū)殺錨頭蚤(Lernaea)、魚虱(Argulus)等甲殼動物、劍水蚤(Cyclops)、龍虱(Dytiscus)幼蟲和蚌殼蟲(Cyzicus)等。敵百蟲常規(guī)藥浴用量為0.2～0.5 mg/L[13]。敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質(zhì)量濃度分別為0.89 mg/L和0.26 mg/L，鱸鯉安全質(zhì)量濃度高于常用量，白甲魚安全質(zhì)量濃度處于常用量中間值，但白甲魚1.0 mg/L試驗(yàn)組96 h內(nèi)未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，表明對鱸鯉和白甲魚寄生蟲性疾病可按常規(guī)用藥量開展防治工作。此外在實(shí)際使用過程中，敵百蟲除與碳酸鈉合用外，不得與其他堿性藥物合用，且操作過程中不宜采用金屬器皿。

氯胺T，可用于治療三代蟲病、小瓜蟲(Ichthyophthirius)病等寄生蟲性疾病，同時是一種較強(qiáng)的殺菌消毒劑，具有殺菌譜廣，消毒作用緩慢而持久，刺激性小的特點(diǎn)，主要用于防治細(xì)菌爛鰓病和真菌病。氯胺T常規(guī)用量為1～10 mg/L、常規(guī)消毒藥浴用量為4～20 mg/L[13]。氯胺T對鱸鯉和白甲魚幼魚的安全質(zhì)量濃度分別為2.96 mg/L和3.48 mg/L，低于消毒用量的最低值，但處于殺蟲用量的中間值。試驗(yàn)結(jié)果顯示，5 mg/L試驗(yàn)組鱸鯉96 h未出現(xiàn)死亡現(xiàn)象，但7.835 mg/L試驗(yàn)組鱸鯉24 h的死亡率為5%，10 mg/L試驗(yàn)組白甲魚96 h未出現(xiàn)死亡，但12.57 mg/L試驗(yàn)組白甲魚72 h死亡率為15%。故在實(shí)際生產(chǎn)過程中為保障魚類的用藥安全，氯胺T對鱸鯉幼魚無論是消毒還是殺蟲，其用量不可高于5 mg/L；氯胺T對白甲魚幼魚可按常規(guī)殺蟲用量進(jìn)行寄生蟲性疾病防治，但消毒用量不應(yīng)高于10 mg/L，且在施藥過程中不可使用金屬容器。

4 結(jié) 論

合理使用藥物是控制水生動物病害蔓延的重要環(huán)節(jié)，藥物用量過低無法達(dá)到藥效而使病情惡化，藥物用量過高對機(jī)體產(chǎn)生毒害作用而出現(xiàn)新的征兆。因此，選擇藥物時要注意其安全性和有效性。本次試驗(yàn)結(jié)果表明，敵百蟲對鱸鯉和白甲魚幼魚是中毒藥物，氯胺T和聚維酮碘對其是低毒藥物。在鱸鯉和白甲魚幼魚培育過程中，要做到科學(xué)診斷，對癥下藥。細(xì)菌性疾病和日常消毒操作建議首選聚維酮碘，推薦使用方法為：(1)0.8～2.0 mg/L浸浴24 h，連用2～3次(二者相同)；(2)15～30 mg/L浸浴15～30 min(二者相同)。備選氯胺T，推薦使用劑量為：鱸鯉，3～5 mg/L浸浴24～72 h；白甲魚，4～10 mg/L浸浴24～72 h。治療蠕蟲和甲殼動物建議使用敵百蟲，推薦使用方法為：0.2～0.5 mg/L浸浴1～2 h，連用2～3次(二者相同)。治療小瓜蟲、三代蟲等建議使用氯胺T，推薦使用方法為：鱸鯉，1～5 mg/L浸浴24 h；白甲魚，1～10 mg/L浸浴24 h。