生物活性肽調(diào)節(jié)腸黏膜免疫功能和結(jié)構(gòu)的meta分析

印虹　吳雅桐

【摘 要】目的：通過meta分析的方法探究國內(nèi)外生物活性肽對(duì)腸黏膜免疫調(diào)節(jié)作用的相關(guān)文獻(xiàn)，綜合分析生物活性肽調(diào)節(jié)腸黏膜免疫作用機(jī)制以及對(duì)機(jī)體腸黏膜結(jié)構(gòu)的綜合影響，從而能為生物活性肽對(duì)機(jī)體腸黏膜免疫健康的促進(jìn)作用提供有力根據(jù)。方法：應(yīng)用計(jì)算機(jī)在揚(yáng)州大學(xué)圖書館檢索數(shù)據(jù)庫包括萬方數(shù)據(jù)庫、SCI、CNKI數(shù)據(jù)庫、Web of Science、EBSCO等，收集國內(nèi)外關(guān)于生物活性肽對(duì)腸黏膜免疫作用的研究，根據(jù)生物活性肽對(duì)SIgA的濃度變化以及對(duì)腸絨毛長度和隱窩深度影響的指標(biāo)數(shù)據(jù)，將篩選出符合的文獻(xiàn)進(jìn)行數(shù)據(jù)的合并處理，并利用StataSE12.0進(jìn)行meta分析。結(jié)果：經(jīng)過文獻(xiàn)檢索與篩選，共找到相關(guān)文獻(xiàn)21篇，其中有10篇有效文獻(xiàn)符合meta分析要求，得到總的樣本量為196，meta分析結(jié)果表明：在腸黏膜免疫功能和結(jié)構(gòu)的研究中，對(duì)于SIgA濃度變化指標(biāo)，[SMD=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P<0.05]；對(duì)于腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）指標(biāo)，[SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05]，說明實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：生物活性肽對(duì)腸道SIgA有一定促分泌作用，同時(shí)能夠增加腸絨毛長度改善腸黏膜結(jié)構(gòu)。因而在促進(jìn)腸黏膜免疫、改善腸道黏膜結(jié)構(gòu)、減少腸道有害菌群數(shù)量和增強(qiáng)腸道生物屏障方面，生物活性肽具有一定的積極作用。

【關(guān)鍵詞】meta分析；生物活性肽；黏膜免疫；腸黏膜結(jié)構(gòu)

中圖分類號(hào)： R151 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A 文章編號(hào)： 2095-2457（2018）14-0113-003

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2018.14.050

Meta analysis of bioactive peptides regulating intestinal mucosal immune function and structure

YIN Hong WU Ya-tong

（Department of cooking and nutrition， School of tourism and cuisine， Yangzhou University， Yangzhou， Jiangsu， 225000， China）

【Abstract】Objective： To investigate the immunoregulatory effects of bioactive peptides on intestinal mucosa at home and abroad by meta-analysis， and to analyze the mechanism of bioactive peptides to regulate intestinal mucosal immune function and the combined effect of intestinal mucosal structure Effectively for the bioactive peptides on the body's intestinal mucosal immune health promotion to provide a strong basis. And ultimately through the application of bioactive peptides to improve intestinal flora， intestinal mucosal immune to enhance the purpose of promoting the health of the body. Methods： The database of Yangzhou University Library， including Wanfang database， SCI， CNKI database， Web of Science and EBSCO， was used to search the database of bioactive peptides. The bioactive peptides were used to study the effect of bioactive peptides on SIgA Concentration changes and the impact of intestinal length and crypt depth of the index data， will be screened to meet the literature for data processing， and the use of StataSE12.0 meta analysis. Results： 21 literatures were searched and screened. Among them， 10 valid literatures met meta-analysis requirements， and the total sample size was 196. The meta-analysis showed that in the study of intestinal mucosal immune function and structure， For SMG=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P<0.05]； for intestinal villus length/crypt depth （V/C）， [SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05）， indicating that the difference between the experimental group and the control group was statistically significant. Conclusion： Bioactive peptides have a certain secretory effect on intestinal SIgA， and can increase the length of intestinal villus to improve intestinal mucosal structure. Therefore， bioactive peptides have a positive effect in promoting intestinal mucosal immunity， improving intestinal mucosal structure， reducing the number of harmful intestinal flora and enhancing intestinal barrier.

【Key words】Meta-analysis； Bioactive peptides； Mucosal immunity； Intestinal mucosal

0 引言

生物活性肽是一類對(duì)機(jī)體有許多重要生理功能的物質(zhì)[1]。大量研究表明， 生物活性肽在促進(jìn)動(dòng)物的胃腸道發(fā)育和成熟、促進(jìn)蛋白質(zhì)合成與肌肉生長、增強(qiáng)機(jī)體免疫力等方面均發(fā)揮顯著的作用[2]。活性肽具有多種人體代謝和生理調(diào)節(jié)功能，易于消化吸收，有增進(jìn)免疫、調(diào)節(jié)激素、抗菌、抗病毒、降血壓、降血脂等作用，食用安全性極高，是當(dāng)前國際食品界最熱門的研究課題和極具發(fā)展前景的功能因子。

活性肽的分類可按原料、保健功能和來源來劃分[3]。如按原料劃分：乳肽、大豆肽、玉米肽等；按照保健功能：免疫活性肽、神經(jīng)活性肽、降血壓肽和抗菌多肽等；按來源：內(nèi)源性生物活性肽和外源性生物活性肽[4]。

腸道黏膜免疫是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要部分。腸黏膜表面的抗原引發(fā)腸道中的黏膜反應(yīng)，腸道黏膜中的淋巴結(jié)將捕獲的抗原轉(zhuǎn)移到巨噬細(xì)胞，然后其對(duì)抗原進(jìn)行加工，并轉(zhuǎn)移給輔助性T細(xì)胞，然后激活B淋巴細(xì)胞，B淋巴細(xì)胞分化增強(qiáng)，產(chǎn)生大量分泌型IgA（SIgA），腸道黏膜免疫反應(yīng)主要依靠分泌至黏膜表面及腸腔中的免疫球蛋白（以SIgA為主）和腸道黏膜內(nèi)以淋巴細(xì)胞為主體的免疫活性細(xì)胞，共同完成腸道的局部免疫功能[5]。腸黏膜表面布滿由上皮和固有層向腸腔內(nèi)突出形成的細(xì)小突起，稱為腸絨毛。腸黏膜絨毛高度是指從絨毛的頂部到絨毛—隱窩結(jié)合處的距離；隱窩深度定義為鄰近的腸絨毛之間內(nèi)陷的深度。營養(yǎng)物質(zhì)的吸收和消化作用依靠腸道上的環(huán)行皺襞、腸絨毛以及絨毛表面的柱狀上皮細(xì)胞等結(jié)構(gòu)來完成。一般情況下，腸黏膜絨毛長度的增加和隱窩深度的降低有助于腸道營養(yǎng)物質(zhì)的吸收[6]。

Meta分析是對(duì)具備特定條件的、同課題的諸多研究結(jié)果進(jìn)行綜合的一類統(tǒng)計(jì)方法。在世界范圍內(nèi)，盡管各學(xué)者在研究設(shè)計(jì)、對(duì)象選擇、樣本含量、指標(biāo)選擇、統(tǒng)計(jì)方法等方面不完全相同，導(dǎo)致研究得到的結(jié)果也不完全一致，但是meta分析可以對(duì)同一研究目的或項(xiàng)目的幾個(gè)或幾十甚至上百的獨(dú)立研究的結(jié)果進(jìn)行系統(tǒng)的、定量的綜合性分析[7]。Meta分析在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛，應(yīng)用最多的是對(duì)干預(yù)性的隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)的評(píng)價(jià)，在觀察性研究和交叉對(duì)照研究中也得到推薦[8]。

綜上，關(guān)于生物活性肽對(duì)于腸黏膜免疫的研究有了一些結(jié)果，但是這些結(jié)果不一致，如實(shí)驗(yàn)對(duì)象差異大、樣本量小、研究指標(biāo)分散等等，因此適合開展meta分析整合信息。

1 材料和方法

1.1 文獻(xiàn)檢索

以“生物活性肽”，“腸黏膜免疫”，“腸黏膜結(jié)構(gòu)”為關(guān)鍵詞，在揚(yáng)州大學(xué)圖書館網(wǎng)站檢索檢索數(shù)據(jù)庫包括萬方數(shù)據(jù)庫、SCI、CNKI數(shù)據(jù)庫、Web of Science、EBSCO等，查找國內(nèi)外關(guān)于生物活性肽對(duì)腸黏膜免疫作用研究的文獻(xiàn)。資料的種類包括學(xué)位論文，會(huì)議報(bào)告，實(shí)驗(yàn)報(bào)告，期刊文章，電子文獻(xiàn)等。

1.2 文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)

對(duì)于生物活性肽調(diào)節(jié)腸黏膜免疫結(jié)構(gòu)和功能的作用，（1）確定以SIgA濃度變化和腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）為研究指標(biāo)的文獻(xiàn)，各樣本測定方法必須準(zhǔn)確，有樣本含量，均數(shù)，標(biāo)準(zhǔn)差等數(shù)據(jù)，且均采用統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法對(duì)采集的樣本進(jìn)行整理分析。（2）文獻(xiàn)發(fā)表時(shí)間在2000-2016年之間（3）實(shí)驗(yàn)對(duì)象為小鼠、斷奶仔豬或仔雞（4）采用隨機(jī)對(duì)照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組設(shè)置合理。

1.3 文獻(xiàn)排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）采用其他研究指標(biāo)；（2）個(gè)體案例的報(bào)道、經(jīng)驗(yàn)總結(jié)、對(duì)理論的探討、綜述和摘要等研究類型文獻(xiàn)；（3）重復(fù)發(fā)表或結(jié)果模糊不清的文獻(xiàn)；（4）單純的以描述為主的實(shí)驗(yàn)研究。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

利用StataSE12.0軟件進(jìn)行meta分析，由于此研究指標(biāo)為定量變量，所以在meta分析中選擇Continuous類型（此類型適用于連續(xù)型定量結(jié)局變量的meta分析，錄入數(shù)據(jù)時(shí)需要輸入實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的例數(shù)，均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差）分析。統(tǒng)計(jì)分析設(shè)定置信區(qū)間為95%，統(tǒng)計(jì)方法選擇標(biāo)準(zhǔn)化均數(shù)差。異質(zhì)性檢驗(yàn)若P值≤0.05，則說明研究結(jié)果不同質(zhì)，采用隨機(jī)效應(yīng)模型計(jì)算合并過的綜合效應(yīng)；若P>0.05，則說明各研究結(jié)果不具有異質(zhì)性所以采用固定效應(yīng)模型計(jì)算合并過的綜合效應(yīng)。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

通過萬方數(shù)據(jù)庫、SCI、CNKI數(shù)據(jù)庫、Web of Science、EBSCO等初步檢索得到相關(guān)文獻(xiàn)36篇，再進(jìn)行初步篩選得到21篇，最終根據(jù)文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)篩選出有效可用文獻(xiàn)10篇。納入的10項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究的設(shè)計(jì)、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處理方法、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種類和生物活性肽用量有一定差異，但所得實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可以使用。

2.2 meta分析過程

利用stata軟件進(jìn)行meta分析首先要對(duì)各研究作同質(zhì)性檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)異質(zhì)性是用來描述一系列研究中效應(yīng)量的變異程度，也表明除可預(yù)見的偶然機(jī)會(huì)之外的研究間存在的差異性。常用I2檢驗(yàn)來檢測異質(zhì)性，？可將異質(zhì)性分為四個(gè)程度：0：（當(dāng)I2為負(fù)值時(shí)，我們將其設(shè)為0）表明沒有異質(zhì)性；0-40%：輕度異質(zhì)性；40%-60%：中度異質(zhì)性；70%-90%：較大的異質(zhì)性；75%-100%：很大的異質(zhì)性. 異質(zhì)性較低，選擇固定效應(yīng)模型，異質(zhì)性較大時(shí)，選擇隨機(jī)效應(yīng)模型。

2.2.1 生物活性肽對(duì)分泌型免疫球蛋白A（SIgA）濃度變化的meta分析

對(duì)納入文獻(xiàn)的數(shù)據(jù)進(jìn)行整合，因?yàn)樗x指標(biāo)分泌型免疫球蛋白A（SIgA）濃度變化為連續(xù)性指標(biāo)，因此需要提取各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的例數(shù)、均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差。

以SIgA為指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組各有82例。首先進(jìn)行異質(zhì)性分析，可知I2=55.5%，有一定異質(zhì)性，因此采用隨機(jī)效應(yīng)模型。SIgA濃度的SMD=2.643，95%CI=（2.003，3.282），P=0.017<0.05，表明效應(yīng)合并值與0的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

圖1森林圖顯示無效線豎線的橫軸尺度為0，每條橫線為實(shí)驗(yàn)研究的95%可信區(qū)間上下限的連線，其線條長短直觀地表示了可信區(qū)間范圍的大小，線條中央的小方塊為SMD值的位置，方塊大小為權(quán)重大小。圖中方塊完全位于垂直線的右側(cè)表明效應(yīng)合并值的百分之95置信區(qū)間未包括0，表明效應(yīng)合并值與0的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以認(rèn)為注射生物活性肽的實(shí)驗(yàn)組SIgA濃度高于對(duì)照組，因此可得出生物活性肽對(duì)SIgA濃度有促增長作用。

2.2.2 生物活性肽對(duì)腸黏膜結(jié)構(gòu)（V/C）的meta分析

以腸黏膜結(jié)構(gòu)（V/C）為研究指標(biāo)，實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組各有114例，顯示I2=68.0%，有一定異質(zhì)性，因此采用隨機(jī)效應(yīng)模型。腸絨毛長度/隱窩深度（V/C）的SMD=2.701，95%CI=（1.891，3.512），P<0.05，表明效應(yīng)合并值與0的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

此時(shí)可進(jìn)行亞組分析，將實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的腸黏膜結(jié)構(gòu)再分成十二指腸組（a組）、空腸組（b組）和回腸組（c組），再進(jìn)行異質(zhì)性檢驗(yàn)，可知a組異質(zhì)性較小。

由圖2整體森林圖和圖3亞組森林圖均顯示：方塊完全位于垂直線的右側(cè)表明效應(yīng)合并值的百分之95置信區(qū)間未包括0，表明效應(yīng)合并值與0的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此可以得出實(shí)驗(yàn)組V/C大于對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組腸黏膜結(jié)構(gòu)比對(duì)照組有所改善。

2.3 檢驗(yàn)發(fā)表偏倚

我們常用漏斗圖檢測偏倚。將單個(gè)研究估計(jì)得來的效果與每項(xiàng)研究的樣本含量兩個(gè)指標(biāo)分別為x和y軸作出的散點(diǎn)圖形被。如果我們收集的研究沒有發(fā)表偏倚，那么理論上按照上面的方法做出的散點(diǎn)圖呈現(xiàn)倒置的漏斗型。因?yàn)樾Ч烙?jì)值的準(zhǔn)確性與研究樣本量呈正相關(guān)，所以小樣本研究的結(jié)果離散程度較大，散開在漏斗圖的底部，隨著樣本含量增加，標(biāo)準(zhǔn)誤減少，研究精度增加，散點(diǎn)趨向密集，大樣本研究效應(yīng)的點(diǎn)估計(jì)密集在一個(gè)較窄的范圍內(nèi)。如果漏斗圖不對(duì)稱或者不完整，說明可能存在發(fā)表偏倚。

本研究的漏斗圖顯示，右側(cè)散點(diǎn)6個(gè)略多于左側(cè)4個(gè)，圖形稍有不對(duì)稱，可能原因?yàn)闃颖竞枯^小，因此入選文獻(xiàn)稍有發(fā)表性偏倚但發(fā)表偏倚不大。

3 討論與思考

3.1 討論

3.1.1 meta分析結(jié)果的評(píng)價(jià)

對(duì)于生物活性肽對(duì)腸黏膜免疫功能和結(jié)構(gòu)的調(diào)節(jié)作用，meta分析的結(jié)果均顯示積極的促進(jìn)作用。由分析結(jié)果可知生物活性肽可促進(jìn)腸黏膜分泌型免疫球蛋白A的分泌以及改善腸道黏膜結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)腸道對(duì)營養(yǎng)物質(zhì)的吸收以及增強(qiáng)免疫效應(yīng)。在本次meta分析納入的10篇國內(nèi)外文獻(xiàn)中，由于實(shí)驗(yàn)對(duì)象，實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及生物活性肽的種類選擇略有不同，導(dǎo)致分析數(shù)據(jù)具有一定的異質(zhì)性，但不影響meta分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的判斷。根據(jù)僅有的10組研究數(shù)據(jù)，存在一定的發(fā)表性偏倚。發(fā)表偏倚在一定程度上影響meta分析的結(jié)果，但控制發(fā)表偏倚很難實(shí)現(xiàn)，因此在進(jìn)行meta分析前要將所有的文獻(xiàn)資料收集齊全[10]。另外，大樣本的研究結(jié)果多數(shù)情況下可能接近所有研究（包括發(fā)表和未發(fā)表）的平均水平。因此， 敏感性分析時(shí)， 應(yīng)比較大樣本研究的效應(yīng)合并值與總的效應(yīng)合并值是否一致， 這也有助于判斷是否存在發(fā)表偏倚。由于此次meta分析的樣本量較小，作出的判斷仍需要完善，對(duì)于meta分析的結(jié)果，由于過程中納入的標(biāo)準(zhǔn)不一樣，不同的人可能得到不同的結(jié)論，甚至是相互矛盾的結(jié)論。因此，我們需要更加謹(jǐn)慎地對(duì)待分析結(jié)果。

3.1.2 思考

之所以選擇“生物活性肽”和“腸黏膜免疫”作為關(guān)鍵字進(jìn)行meta分析，是因?yàn)槟壳吧锘钚噪囊呀?jīng)被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、保健品、飼料等生活中的諸多領(lǐng)域，隨著人們對(duì)肽的認(rèn)識(shí)不斷深入，各種活性肽的生產(chǎn)及應(yīng)用前景越來越好，市場潛力也越來越大。生物活性肽的生理活性涉及人體的消化、吸收、營養(yǎng)代謝調(diào)控、生長發(fā)育、免疫、神經(jīng)調(diào)節(jié)等各個(gè)環(huán)節(jié)。目前認(rèn)為生物活性肽在腸黏膜免疫領(lǐng)域的研究剛開始起步，其應(yīng)用前景廣泛并且切身關(guān)系到人們的腸道健康。腸道是人體內(nèi)最大的消化器官，同時(shí)也是最大的免疫器官。人體腸道內(nèi)的黏膜總面積約為300m2，是人體內(nèi)環(huán)境與外環(huán)境間直接交流的巨大的界面。在所有黏膜系統(tǒng)中，腸黏膜系統(tǒng)是非常重要的，其免疫機(jī)制在體液免疫和細(xì)胞免疫的基礎(chǔ)上又具有其特殊性和復(fù)雜性，目前還沒有得到更為清楚的認(rèn)識(shí)[11]。腸黏膜免疫屏障作為保護(hù)動(dòng)物機(jī)體免受外來病原微生物侵?jǐn)_的重要防線，可在抗原的刺激下利用免疫細(xì)胞和免疫相關(guān)物質(zhì)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答，同時(shí)可對(duì)無害抗原下調(diào)免疫反應(yīng)或產(chǎn)生免疫耐受[12]。一旦腸黏膜免疫屏障受損，腸通透性增加、腸菌群失調(diào)，可導(dǎo)致細(xì)菌和（或）內(nèi)毒素易位，并可誘發(fā)和（或）加重全身炎癥反應(yīng)和多器官功能障礙，對(duì)危重疾病的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有重要影響[13]?，F(xiàn)代社會(huì)，人們?cè)絹碓疥P(guān)注自身健康，而由腸黏膜誘發(fā)的健康問題也越來越多，因此如何改善腸黏膜免疫結(jié)構(gòu)和功能已經(jīng)刻不容緩[14]。因此，在生物活性（下轉(zhuǎn)第95頁）（上接第115頁）肽領(lǐng)域結(jié)合腸黏膜免疫研究開發(fā)有助于人體腸道健康的藥物、食品和其它產(chǎn)品是勢在必行的。

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