高容量硼酸親和磁性納米粒子的制備及其在鄰羥基生物分子富集中的應(yīng)用

張君才 陳佑寧 衛(wèi)引茂

1(咸陽師范學(xué)院化學(xué)與化工學(xué)院，咸陽712000)2(陜西省現(xiàn)代分離科學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，西北大學(xué)化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，西安710127)

1 引 言

核苷、糖蛋白等鄰羥基類物質(zhì)在生物體內(nèi)有重要的生理功能。研究表明，細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的糖蛋白參與細(xì)胞內(nèi)的多種應(yīng)激響應(yīng)過程，在疾病的發(fā)生與治療中起重要作用[1]。然而，由于糖蛋白在體內(nèi)的豐度較低且存在復(fù)雜的基體干擾，鑒定難度較大，因此，對糖蛋白進(jìn)行鑒定，必須首先將樣品進(jìn)行分離和富集。目前，已發(fā)展了凝集素親和法[2]、硼酸親和法[3,4]、肼化學(xué)反應(yīng)法[5]、親水作用法[6]、β-消除Michael 加成反應(yīng)法[7]等多種糖蛋白的富集方法。基于磁性硼酸親和吸附劑的磁性分散固相萃取具有分離簡單、萃取時(shí)間短的優(yōu)勢，已成為富集糖蛋白/肽的常用方法。Lin[8]和Zhang[9]等分別制備了苯硼酸修飾的磁性吸附劑，并將其用于蛋清中糖蛋白的富集。對于磁性硼酸親和吸附劑的制備，目前常用的方法是通過共價(jià)鍵將含硼酸的小分子固定于材料表面[8～11]，如Zhu等[11]采用分子印跡技術(shù)制備的磁性硼酸親和吸附劑在中性條件下富集了糖蛋白。然而，由于基體表面的吸附層是一種單分子吸附層，所以制備的吸附劑普遍存在吸附容量和吸附效率低的缺點(diǎn)。

研究表明，在粒子表面構(gòu)建三維聚合物吸附層，能提高吸附劑的吸附容量[12～15]。陳林吉等[16]合成了磁性氮摻雜石墨烯納米材料， 用于萃取環(huán)境水樣中的有機(jī)氯污染物。表面引發(fā)原子轉(zhuǎn)移自由基聚合(SI-ATRP)因其具有活性可控的優(yōu)點(diǎn)，已成為在材料表面構(gòu)建三維聚合物吸附層的新方法。通常，SI-ATRP包括固體引發(fā)劑的制備和單體原位聚合兩步操作反應(yīng)[17]。對于固體引發(fā)劑，目前常采用小分子引發(fā)劑對基體表面進(jìn)行修飾的方法進(jìn)行制備，該方法雖然簡單，但是基體表面引發(fā)劑密度低，導(dǎo)致ATRP反應(yīng)后生成的聚合物刷密度小，限制了吸附容量的進(jìn)一步提高[12,17]。為提高引發(fā)劑的表面接枝密度，本研究采用聚乙烯亞胺(PEI)修飾磁性納米粒子，再加入引發(fā)劑，以增加表面引發(fā)劑的密度，通過SI-ATRP將硼酸單體聚合在材料表面，制備了一種新型聚合物刷型硼親和磁性吸附劑。將此吸附劑用于核苷和糖蛋白的吸附，驗(yàn)證其吸附性能，并將其應(yīng)用于生物樣品分離與富集。

2 實(shí)驗(yàn)部分

2.1 儀器與試劑

LC-20A高效液相色譜儀(日本Shimadzu公司)，使用InertSustain C18(250 mm×4.6 mm I.D., 5 μm)色譜柱。

FeCl3、檸檬酸鈉、無水乙酸鈉、鹽酸多巴胺(DA)、聚乙烯亞胺(PEI，分子量600)和CuBr(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。CuBr使用前用10%冰乙酸浸泡過夜，砂芯漏斗過濾，用水反復(fù)洗滌至中性，再用甲醇和丙酮洗滌，50℃真空干燥。正硅酸乙酯、2,2'-聯(lián)吡啶和2-溴異丁酰溴(上海晶純生化科技有限公司); 3-氨基苯硼酸(APBA，北京百靈威科技有限公司); 乙二醇(天津天力試劑公司); 蛋白Marker(賽默飛世爾科技有限公司); 卵清蛋白(OVA，美國Sigma-Aldrich公司); 溶菌酶(Lys)和牛血清白蛋白(BSA)(西安沃爾森科技有限公司)。

2.2 聚多巴胺包覆Fe3O4磁性納米粒子(Fe3O4@PDA)的制備

參照文獻(xiàn)[18]的方法。采用水熱合成法制備F3O4納米粒子; 將F3O4超聲分散于Tris-HCl緩沖液，加入DA，室溫下攪拌24 h。磁性粒子用水和乙醇洗滌，干燥后得到Fe3O4@PDA。

2.3 3-丙烯酰胺基苯硼酸(AAPBA)

參照文獻(xiàn)[13]的方法制備。在冰浴下，將間氨基苯硼酸加入到 2 mol/L NaOH溶液，攪拌溶解，再滴加丙烯酰氯，室溫下反應(yīng)2 h。溶液調(diào)節(jié)至pH 1.0，析出白色固體。過濾，濾液用乙酸乙酯萃取，蒸發(fā)溶劑。合并所得固體，用水重結(jié)晶，得到棕黃色針狀晶體，即AAPBA硼酸單體。

2.4 聚乙烯亞胺修飾磁性粒子(Fe3O4@PDA@PEI)的制備

將50 mL 4 mg/mL PEI溶液加入到1.0 g Fe3O4@PDA粒子中，超聲分散5 min，機(jī)械攪拌5 h。將粒子分別用水、甲醇洗滌3次，得Fe3O4@PDA@PEI粒子，備用。

2.5 固體引發(fā)劑的制備

將Fe3O4@PDA@PEI粒子和30 mL四氫呋喃加入到100 mL三頸瓶中，超聲分散5 min，再加入0.6 mL三乙胺和0.5 mL 2-溴異丁酰溴，攪拌3 h。粒子分別用四氫呋喃和甲醇洗滌，得固體引發(fā)劑，備用。

2.6 硼酸聚合物刷型吸附劑(Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA)的制備

將上述固體引發(fā)劑分散于20 mL DMF中，加入0.8 g AAPBA和0.2 g 2,2'-聯(lián)吡啶。混合物經(jīng)過冷凍-抽真空-解凍循環(huán)3次，在N2保護(hù)下迅速加入0.1 g CuBr，在95℃反應(yīng)12 h。用甲醇洗滌后，將粒子浸泡在10% EDTA 溶液中，攪拌2 h，用水和甲醇洗滌，真空干燥，得Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA(制備路線見圖1)。

2.7 吸附選擇性

用競爭吸附法考察吸附劑Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子對小分子和生物大分子的選擇性。對于小分子物質(zhì)，用50 mmol/L NH3-NH4Cl(pH 9.0)緩沖液配制5.0 μg/mL的腎上腺素、5-羥色胺、對苯二酚、苯胺、沙丁胺醇和鄰苯二酚混合溶液。將5.0 mL混合液和10.0 mg吸附劑加入到離心管中，超聲分散，振蕩1 h后，磁性分離，棄去上清液。粒子用NH3-NH4Cl緩沖液(pH 9.0)淋洗兩次，然后再加入到1.0 mL 乙酸-甲醇(5∶95，V/V)中，振蕩30 min，分離洗脫液。洗脫液用HPLC-UV分析檢測。

對于生物大分子，實(shí)驗(yàn)方法如下：用20 mmol/L 磷酸鹽緩沖液(pH 7.0，含0.2 mol/L NaCl)分別配制1.0 mg/mL的BSA、Lys和OVA混合溶液。將20.0 mg粒子加入到4.0 mL蛋白溶液中，超聲分散，恒溫振蕩30 min。磁性分離，棄上清液。粒子用緩沖液淋洗兩次，加入1.0 mL 1%乙酸溶液，振蕩30 min，磁性分離。洗脫液用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)分析。

2.8 吸附容量

用靜態(tài)吸附法考察吸附劑Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子對小分子和生物大分子的吸附容量。

對于小分子，將5.0 mg 吸附劑分散于2.0 mL 1.0 mg/mL鄰苯二酚和2.0 mg/mL腺苷的標(biāo)準(zhǔn)溶液 (pH 8.5) 中，恒溫振蕩30 min，收集上清液，用HPLC-UV測定鄰苯二酚和腺苷的濃度，用公式(1)計(jì)算吸附容量(Q)。

(1)

其中，Q為吸附容量(mg/g)，C0和Ce分別是物質(zhì)的原始和平衡濃度(mg/mL)，V0是溶液體積(mL)，m是Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子質(zhì)量(mg)。

對于生物大分子，用0.2 mol/L NaCl+20 mmol/L磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)分別配制一系列濃度不同的BSA、Lys和OVA溶液。將20.0 mg Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子加入到4.0 mL蛋白溶液，超聲分散，恒溫振蕩30 min。收集上清液，用Bradford法[19]測定蛋白濃度，蛋白吸附量用公式(1)計(jì)算。

2.9 尿液中核苷的富集與測定

收集健康志愿者尿液，10000 r/min離心15 min。用氨水調(diào)節(jié)上清液至pH 8.5。在0.9 mL尿液樣品中，加入0.1 mL 核苷標(biāo)準(zhǔn)液和5.0 mg Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA磁性粒子，超聲5 min，再恒溫振蕩30 min。分離出粒子，用緩沖液(pH 8.5)淋洗3次后，再用100 μL 5%乙酸解吸，用HPLC-UV測定解吸液。以峰面積對核苷的加標(biāo)濃度作圖，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.10 雞蛋清中糖蛋白的提取

用含有0.2 mol/L NaCl的磷酸鹽緩沖液(pH 7.0)將雞蛋清稀釋5倍，以降低粘度，10000 r/min離心5 min，除去不溶物，得到上清液(母液)。將2.0 mL 母液加入到裝有20.0 mg Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA磁性粒子的離心管中，超聲分散5 min，恒溫振蕩30 min。分離出磁性粒子，將粒子用緩沖液洗滌兩次，再用1.0 mL 5% 乙酸溶液解析。母液、上清液與解析液用SDS-PAGE分析。

3 結(jié)果與討論

3.1 Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA的制備與表征

在SI-ATRP中，固體表面的引發(fā)劑分子一般應(yīng)為α-位有吸電子誘導(dǎo)效應(yīng)的鹵化物。傳統(tǒng)方法是將小分子鹵化物通過共價(jià)鍵以單分子層的形式固定于基體表面[12,16]。這種方法引入的引發(fā)劑密度一般較低，降低了ATRP反應(yīng)后聚合物分子刷的密度。為提高聚合物刷的接枝密度， 本研究首先在Fe3O4表面包覆聚多巴胺，然后將支化的PEI修飾到材料表面，再連接上引發(fā)劑2-溴異丁酰溴。與傳統(tǒng)方法相比，該方法提高了引發(fā)劑的密度。然后，用SI-ATRP反應(yīng)將AAPBA單體原位聚合于粒子表面形成三維吸附層。在吸附過程中，物質(zhì)可進(jìn)入聚合物刷內(nèi)，與側(cè)鏈上的硼酸進(jìn)行縮合反應(yīng)而被吸附。前期研究表明，AAPBA聚合物鏈的長度隨聚合時(shí)間的延長而增長，當(dāng)聚合反應(yīng)超過8 h，吸附量達(dá)到平衡[13]，故選取聚合時(shí)間為8 h。

圖1 Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子的制備路線Fig.1 Illustration of preparation route of Fe3O4@PDA@PEI@AAPBAPEI: polyethylenimine; PDA, polydopamine; bpy, 2,2'-dipyridyl; AAPBA, poly(3-acrylamidophenylboronic acid).

用透射電鏡(TEM)和X射線光電子能譜(XPS)對Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA進(jìn)行了表征。與Fe3O4粒子相比，包覆聚多巴胺后，F(xiàn)e3O4@PDA粒子呈現(xiàn)明顯的核-殼式結(jié)構(gòu)，殼層約為20 nm(圖2B中的箭頭所指紅色線條所框區(qū)域)，說明粒子包覆上了聚多巴胺。經(jīng)過ATRP反應(yīng)后，粒子表面的殼層厚度增加到42 nm左右(圖2C中箭頭所指的紅色線條所框區(qū)域)，說明硼酸聚合物包覆在磁性微球的表面。與Fe3O4相比， Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA的XPS圖中出現(xiàn)了B元素的峰，測得B元素含量為5.2%。上述結(jié)果表明，已成功制備Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA。

圖2 納米粒子的TEM圖.(A)Fe3O4; (B) Fe3O4@PDA; (C) Fe3O4@PDA@PEI@AAPBAFig.2 Transmission electron microscopy (TEM) image of(A)Fe3O4, (B) Fe3O4@PDA, and (C)Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA

3.2 吸附特異性

圖3 混合物富集前(a)和富集后(b)的色譜圖色譜柱：InertSustain C18; 流動相：10 mmol/L NH4Cl 緩沖液-乙腈(85∶15); 流速：1.0 mL/min; 檢測波長：254 nm. 色譜峰：1. 腎上腺素; 2. 5-羥色胺; 3. 對苯二酚; 4. 苯胺; 5. 沙丁胺醇; 6. 鄰苯二酚Fig.3 Chromatograms of (a) untreated solution and (b) eluent by Fe3O4@PDA@PEI@APPBAColumn: InertSustain C18; Mobile phase: 10 mmol/L NH4Cl-ACN (85∶5); Flow rate: 1.0 mL/min; DetectionV wavelength: 254 nm; Peaks: 1. epinephrine; 2. 5-hydroxytryptamine; 3. hydroquinone; 4. phenylamine; 5. salbutamol; 6. catechol.

在分散固相萃取中，吸附劑的吸附容量以及選擇性對目標(biāo)物的富集效率和分析靈敏度有具有重要作用。文獻(xiàn)研究表明，硼酸親和吸附劑對順式鄰羥基物質(zhì)的吸附有特異性，但是，多數(shù)特異性驗(yàn)證采用的是小分子修飾的吸附劑[8,9,20]。因此，有必要驗(yàn)證三維聚合物吸附層的吸附選擇性。首先，采用吸附劑富集6種小分子混合物(腎上腺素、5-羥色胺、對苯二酚、苯胺、沙丁胺醇和鄰苯二酚)。從圖3可見，只有腎上腺素、沙丁胺醇和鄰苯二酚等順式鄰羥基物質(zhì)被富集，而5-羥色胺、對苯二酚和苯胺3種干擾物質(zhì)被除去。此外，使用磁性固相萃取對牛血清白蛋白(BSA)、 溶菌酶(Lys)和卵清白蛋白(OVA)的混合液進(jìn)行萃取。SDS-PAGE電泳結(jié)果表明，經(jīng)過萃取后，解析液中僅存在OVA，說明吸附劑僅對糖蛋白有特異性吸附作用。上述結(jié)果表明，三維硼酸聚合物吸附層對鄰羥基小分子和生物大分子均具有良好的吸附特異性。

3.3 Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA的吸附容量

在已有研究中，常用鄰苯二酚和腺苷測定硼酸吸附劑的吸附容量[20～24]。為便于與文獻(xiàn)值比較，本研究選擇這兩個(gè)化合物表征 Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA的吸附容量。吸附劑對鄰苯二酚和腺苷的最大吸附量分別為(151 ± 32) μmol/g和(123 ± 18) μmol/g。與文獻(xiàn)報(bào)道方法相比(表1)，本方法的吸附容量不僅遠(yuǎn)高于直接鍵和小分子硼酸配體的方法[20～22]，同時(shí)還高于聚合物修飾法[15,23,24]。這是因?yàn)镻EI有效地提高了引發(fā)劑位點(diǎn)的密度。 此外，以O(shè)VA為模型蛋白，由吸附等溫線測得吸附劑的最大吸附量為656.7 mg/g (≈1.5 μmol/g)，說明此吸附劑對糖蛋白也有較高的吸附容量。

表1 不同硼酸親和吸附劑的吸附容量比較

Table 1 Comparison of adsorption capacities of various adsorbents

基質(zhì)Solid support制備方法Preparation method分析物Analyte吸附容量Adsorption capacity(μmol/g)文獻(xiàn)Ref.Fe3O4直接鍵合FPBADirect coupling of FPBA鄰苯二酚Catechol66.020鎂-鋯復(fù)合物材料Magnesia-zirconia直接鍵合DPA-BADirect coupling of DPA-BA核苷Nucleoside0.4421聚合物粒子Polymer particles直接鍵合APBADirect coupling of APBA槲皮素Quercetin8.622Fe3O4@SiO2先接枝PEI,再鍵合FPBACoupling PEI, and then FPBA腺苷Adenosine5.125Fe3O4先接枝聚丙烯酰胺,再鍵合FPBACoupling polyacrylamide, and then FPBA腺苷Adenosine1.826坡縷石Attapulgite先接枝AEMA, 再修飾MPBACoupling ploy(AEMA), andthen fabricating MPBA腺苷Adenosine115.427Fe3O4@SiO2包覆poly(APBA)Encapsulation with poly(APBA)鄰苯二酚Catechol214聚合物微球Polymer microspheresSI-RAFT聚合AAPBAGrafting AAPBA via SI-RAFT腺苷Adenosine99.215有機(jī)硅雜化整體柱Monolithic column原位聚合AAPBAIn-situ polymerization of AAPBA鄰苯二酚catechol49.523整體柱Monolithic column原位聚合AAPBAIn-situ polymerization of AAPBA鄰苯二酚Catechol79.924多巴胺包覆Fe3O4先修飾聚乙烯亞胺,再SI-ATRP聚合AAPBACoupling PEI, then graftingAAPBA via SI-ATRP鄰苯二酚Catechol腺苷Adenosine151±3223±18本文This work注:FPBA: 4-甲酰基苯硼酸; APBA:氨基苯硼酸; DPA-BA: 3-N,N-二亞甲基膦酸苯硼酸; PEI:聚乙烯亞胺; PAMAM: 聚酰胺胺; AEMA: 丙烯酰氧乙基三甲基氯化銨; MPBA:4-巰基苯硼酸; AAPBA: 3-丙烯酰胺基苯硼酸。Note: FPBA: 4-formylphenylboronic Acid; APBA: 4-aminophenylboronic acid; DPA-BA: 3-N,N-dimethylenephosphonic acid) benzeneboronic acid; PEI: Polyethyleneimine; AEMA: acryloyloxyethyltrimethyl ammonium chloride; MPBA: 4-mercaptophenylbo-ronic acid; AAPBA: 3-(acrylamido)phenylboronic acid.

3.4 聚合刷型硼酸親和磁性吸附劑在實(shí)際樣品中的應(yīng)用

3.4.1尿液中核苷的富集與測定圖4是用Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA粒子對加標(biāo)尿液進(jìn)行富集前后的色譜圖。由圖4可見，富集前的尿液樣品中含有大量的雜質(zhì)峰 (譜線c)，嚴(yán)重干擾目標(biāo)物的測定; 經(jīng)過富集之后，許多干擾峰消失，同時(shí)4種核苷的色譜峰面積明顯增大(譜線b)。 說明Fe3O4@PDA@PEI@AAPBA微球能選擇性富集核苷，同時(shí)能夠有效消除復(fù)雜生物樣品中的基質(zhì)干擾。

圖4 尿液樣品的色譜圖. (a)核苷標(biāo)準(zhǔn)品; (b) 萃取的加標(biāo)尿液; (c)加標(biāo)0.2 μg/mL核苷的尿液。色譜柱：InertSustain C18; 流動相：25 mmol/L KH2PO4(pH 4.52)-甲醇，20 min內(nèi)甲醇比例從5%線性變化到60%。流速：1 mL/min，檢測波長：260 nm。色譜峰1：胞苷，2：尿苷，3：鳥苷，4：腺苷。Fig.4 Chromatograms of standard solution of nucleosides (a), eluate of the spiked urines after extraction (b) and the urines spiked with 0.2 μg/mL of 4 nucleosides (c). Column: InertSustain C18; mobile phase: 25 mmol/L KH2PO4(pH 4.52)-methanol, methanol volume ratio linearly changes from 5% to 60%. Flow rate, 1 mL/min. Detection wavelength, 260 nm. Peaks: 1. cytidine; 2. uridine; 3. vernine; 4. Adenosine.

采用標(biāo)準(zhǔn)加入法，在尿液中加入一系列濃度不同的4種核苷，通過峰面積對加標(biāo)濃度作圖，獲得4種核苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線。尿苷的標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=79268x+13442 (R2=0.989); 鳥苷為y=85431x+30881 (R2=0.996); 胞苷為y=63294x+40864 (R2=0.985); 腺苷為y=69742x+33109 (R2=0.991)。用外推法求得尿液中尿苷、鳥苷、胞苷和腺苷的濃度分別為0.17、0.36、0.65和0.48 μg/mL，該數(shù)值處于健康人體核苷的濃度范圍之內(nèi)[28]。此外，由表2可見，高、中、低加標(biāo)水平尿液經(jīng)過富集后的回收率為83.8%～108.7%，且RSD < 15 %，說明本方法具有良好的準(zhǔn)確度和精密度，可滿足生物樣品定量分析的要求[29]。

表2 4種核苷的富集回收率

Table 2 Recoveries and precisions for determination of 4 kinds of nucleosides

分析物Analytes加標(biāo)水平 Spiking level0.20 μg/mL回收率Recovery (%)RSD(%, n=3)0.60 μg/mL回收率Recovery (%)RSD(%, n=3)1.0 μg/mL回收率Recovery (%)RSD(%, n=3)鳥苷 Guanosine85.48.7104.38.9108.76.2尿苷 Uridine92.54.983.811.3106.38.5胞苷 Cytidine95.210.691.24.885.412.4腺苷 Adenosine87.95.6101.99.292.73.9

圖5 蛋清樣品的電泳圖。條帶1：Marker; 條帶2：未處理的蛋清樣品; 條帶3：上清液; 條帶4：洗脫液。Fig.5 Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) analysis of egg white samples. Lane 1, protein marker; Lane 2, untreated egg white; Lane 3, supernatant; Llane 4, eluate

3.4.2雞蛋清中糖蛋白的富集雞蛋清中主要包含卵轉(zhuǎn)鐵蛋白 (12%,pI 6.1)、卵清蛋白(54%,pI 4.5)、卵粘蛋白(1.5%～3.5%,pI 4.5～5.0)、溶菌酶 (3.5%,pI 10.7)、卵球蛋白 G2(4.0%,pI 5.5)、類卵粘蛋白(11%,pI 4.1) 和卵球蛋白 G3(4.0%,pI 4.8)。 其中，類卵粘蛋白、卵清蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和卵球蛋白屬于糖蛋白，而溶菌酶則屬于非糖蛋白。蛋清樣品經(jīng)過磁性萃取，用SDS-PAGE電泳檢測上清液、洗脫液和蛋清樣品(圖5)。 與蛋清原液相比(條帶2)，上清液電泳圖中糖蛋白顏色相對變淺(條帶3)，而溶菌酶條帶顏色幾乎保持不變，這是由于吸附劑吸附了蛋清中的糖蛋白，使上清液中糖蛋白濃度減少，而對非糖蛋白基本上沒有吸附，從而使溶菌酶留在上清液。從電泳條帶4可見，洗脫液主要含有3種糖蛋白，而沒有溶菌酶。此結(jié)果說明吸附劑在復(fù)雜生物樣品中可特異性地捕獲糖蛋白，同時(shí)能夠去除非糖蛋白。

4 結(jié) 論

采用聚乙烯亞胺修飾磁性納米粒子，再加入引發(fā)劑，通過SI-ATRP法在粒子表面原位聚合硼酸聚合物鏈，制備了一種聚合物刷型硼酸親和磁性吸附劑。由于在納米粒子表面修飾了高密度引發(fā)劑，提高了ATRP反應(yīng)后粒子表面的硼酸聚合物鏈密度，故此吸附劑對小分子和糖蛋白有較高的吸附容量。同時(shí)，此吸附劑對鄰羥基小分子和生物大分子具有吸附特異性。將此吸附劑用于人體尿液和蛋清的分離富集，能夠選擇性吸附鄰羥基生物分子和糖蛋白，排除干擾分子，說明此吸附劑在生物樣品分離富集領(lǐng)域具有良好的應(yīng)用潛能。