40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的高效液相色譜分析

潘 靜，東 琴，高敬雨，劉潤(rùn)峰

(北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司，北京 102206)

聯(lián)苯肼酯(bifenazate)是聯(lián)苯肼類殺螨劑，純品外觀為白色固體結(jié)晶[1]。該劑系M.A.Dekeyser等于1996年報(bào)道，由Uniroyal公司發(fā)現(xiàn)并由Uniroyal公司和Nissan公司聯(lián)合開發(fā)，于2000年上市。聯(lián)苯肼酯是一種新型選擇性葉面噴霧用殺螨劑。該劑作用機(jī)制為對(duì)螨類的中樞神經(jīng)傳導(dǎo)系統(tǒng)的一種 γ-氨基丁酸(GABA)受體有獨(dú)特作用。該劑對(duì)螨的各個(gè)生活階段有效，具有殺卵活性和對(duì)成螨的擊倒活性(48～72 h)，持效期長(zhǎng)達(dá)14 d左右，推薦使用劑量范圍內(nèi)對(duì)作物安全[1,2]。乙螨唑(etoxazole)化學(xué)名稱：(RS)-5-叔丁基-2-[2-(2,6-二氟苯基)-4,5-二氫-1,3-噁唑-4-基]苯乙醚，是日本八洲化學(xué)公司于1994年開發(fā)的新穎噁唑類觸殺型殺螨劑，可抑制螨正常蛻皮過(guò)程并具有殺卵活性，能有效控制螨的整個(gè)幼齡期(卵和若螨)，此外還對(duì)雌性成螨有不育作用[4]。乙螨唑是具有特殊結(jié)構(gòu)的殺螨劑，對(duì)卵及幼螨有卓效，主要具有觸殺作用，持效期長(zhǎng)[5]。該劑高效、低毒和對(duì)非靶標(biāo)生物安全，符合當(dāng)今綠色殺蟲劑的要求[6]。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

儀器：Agilent 1260高效液相色譜儀；紫外檢測(cè)器；Agilent色譜工作站；色譜柱：150 mm×4.6 mm(i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝ZORBAX SB-C18填充物，粒徑5 μm；超聲波清洗器；過(guò)濾器：過(guò)濾膜孔徑0.45 μm。乙腈：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；聯(lián)苯肼酯標(biāo)準(zhǔn)品≥98.0%；乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)品≥99.0%(兩者均由北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司提供)；40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑(25%聯(lián)苯肼酯+15%乙螨唑，北京明德立達(dá)農(nóng)業(yè)科技有限公司研制)。

1.2 色譜操作條件

流動(dòng)相：乙腈∶水＝80∶20(體積比)；檢測(cè)波長(zhǎng)：220 nm；流速：1.0 mL/min；進(jìn)樣體積：5 μL；柱溫：(25±2) ℃。在上述色譜操作條件下，聯(lián)苯肼酯的保留時(shí)間約為2.6 min；乙螨唑的保留時(shí)間約為7.0 min。典型的液相色譜圖如下見圖1、圖2。

圖1 聯(lián)苯肼酯、乙螨唑標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜圖

圖2 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑的高效液相色譜圖

1.3 溶液配制

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

分別稱取聯(lián)苯肼酯標(biāo)樣15 mg、乙螨唑標(biāo)樣9 mg(精確至0.000 02 g)，置于50 mL容量瓶中，加入適量乙腈溶解，流動(dòng)相定容，搖勻后備用。

1.3.2 試樣溶液的配制

準(zhǔn)確稱取試樣60 mg (精確至0.000 02 g)，置于50 mL容量瓶中，加入適量流動(dòng)相溶解并定容、搖勻后，過(guò)0.45 μm有機(jī)系濾膜，備用。

1.4 測(cè)定

在上述色譜條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，計(jì)算各針相對(duì)響應(yīng)值，直至相鄰2針聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)響應(yīng)值相對(duì)變化小于1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測(cè)定。用外標(biāo)法計(jì)算各自含量。

1.5 計(jì)算

將測(cè)得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中的聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計(jì)算：

式中：A1——標(biāo)樣溶液中，聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)峰面積的平均值；A2——試樣溶液中，聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)峰面積的平均值；m1——聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)標(biāo)樣的質(zhì)量，單位為克(g)；m2——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；P——標(biāo)樣中聯(lián)苯肼酯(乙螨唑)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

1.6 允許差

兩次平行測(cè)定結(jié)果之差，聯(lián)苯肼酯、乙螨唑分別應(yīng)不大于0.5%、0.3%，取其算術(shù)平均值，作為測(cè)定結(jié)果。

2 結(jié)果與討論

2.1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇

通過(guò)UV-1800型紫外可見分光光度計(jì)分別對(duì)聯(lián)苯肼酯和乙螨唑標(biāo)樣溶液進(jìn)行紫外掃描，乙螨唑在200.0～230.0 nm均有紫外吸收；聯(lián)苯肼酯在204.9 nm、230.8 nm和265.0 nm處均有較大紫外吸收，考慮到低波長(zhǎng)處紫外吸收會(huì)有溶劑或助劑的干擾，同時(shí)兼顧聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的峰面積和峰高的差距盡量小，最終選擇220 nm作為聯(lián)苯肼酯、乙螨唑的檢測(cè)波長(zhǎng)。

2.2 流動(dòng)相的選擇

為達(dá)到聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的有效分離，先后對(duì)甲醇和水、甲醇和冰乙酸水溶液、乙腈和水、乙腈和冰乙酸水溶液的不同體積配比進(jìn)行試驗(yàn)，最后發(fā)現(xiàn)用乙腈和水(體積比為 80∶20)做流動(dòng)相，流速為1.0 mL/min時(shí)，分離效果好，出峰時(shí)間短，且峰形尖銳、對(duì)稱。綜上因素，選定乙腈+水(體積比80∶20)作為流動(dòng)相。

2.3 分析方法的線性關(guān)系曲線

分別配制5組不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按上述色譜操作條件進(jìn)樣分析，每個(gè)濃度分析2次，求其峰面積平均值。以聯(lián)苯肼酯質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積平均值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得聯(lián)苯肼酯線性回歸方程y=20.506 0x-12.727 2，其線性關(guān)系系數(shù) R2=0.999 5 (圖 3)；得乙螨唑線性回歸方程 y=13.350 1x+51.310 6，其線性關(guān)系系數(shù)R2=0.999 3，表明線性關(guān)系良好(圖4)。

2.4 分析方法的精密度

按上述色譜操作條件，對(duì)同一個(gè)樣品連續(xù)進(jìn)行5次平行測(cè)定。測(cè)得聯(lián)苯肼酯和乙螨唑的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.14和0.11；變異系數(shù)分別為0.55%和0.72% (表1)。表明此方法的精密度能夠滿足定量分析的要求。

表1 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑精密度測(cè)定

2.5 分析方法的準(zhǔn)確度

為了考察分析方法的準(zhǔn)確度，測(cè)定登品的回收率。在已知含量的40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑中加入一定量的聯(lián)苯肼酯、乙螨唑的標(biāo)樣，按上述色譜操作條件進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算回收率。測(cè)定聯(lián)苯肼酯的回收率為 98.42%～100.80%，平均回收率為99.49%；乙螨唑的回收率為98.39%～100.22%，平均回收率為99.15%(表2)。

圖3 聯(lián)苯肼酯線性關(guān)系圖

圖4 乙螨唑線性關(guān)系圖

表2 40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑準(zhǔn)確度測(cè)定

3 結(jié) 論

上述試驗(yàn)表明，40%聯(lián)苯肼酯·乙螨唑懸浮劑中有效成分質(zhì)量分?jǐn)?shù)的分析方法，具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，方法操作簡(jiǎn)便、快速、分離好，可以滿足生登企業(yè)生登中的質(zhì)量控制要求。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 曹巍, 陳高部, 關(guān)云飛等. 聯(lián)苯肼酯的高效液相色譜分析研究[J].農(nóng)藥, 2011, 50(6): 424－425.

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