40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑的高效液相色譜分析

黃東進(jìn)，羅成燕

(1.江蘇優(yōu)嘉植物保護(hù)有限公司，江蘇南通 226400；2.江蘇揚農(nóng)化工股份有限公司，江蘇揚州 225009)

氟啶胺(fluazinam)化學(xué)名稱為 3-氯-N-(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)-α,α,α-三氟-2,6-二硝基對甲苯胺，是由日本石原產(chǎn)業(yè)公司開發(fā)的二硝基苯胺類殺菌劑，是一種保護(hù)性殺菌劑。該劑為線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，通過抑制孢子萌發(fā)、菌絲突破、生長和孢子形成而抑制病原菌的侵染。氟吡菌胺(fluopicolide)化學(xué)名稱為2,6-二氯-N-[(3-氯-5-三氟甲基-2-吡啶基)甲基]苯甲酰胺，是德國拜耳作物科學(xué)公司開發(fā)的苯甲酰胺類殺菌劑，具有保護(hù)和治療作用。它主要作用于細(xì)胞膜和細(xì)胞間的特異性蛋白而表現(xiàn)殺菌活性，對病原菌的各主要形態(tài)均有很好的抑制活性[1]。將兩者混合制成40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑，很好的發(fā)揮了各自的優(yōu)點，同時對作物的病害防治有極好的增效作用，擴(kuò)大了殺菌譜，提高了殺菌活性，可有效防治各類蔬菜和葡萄作物上的霜霉病、灰霉病、晚疫病、疫病、根腫病等病害，應(yīng)用前景廣泛。氟啶胺、氟吡菌胺單劑或與其他藥劑復(fù)配制劑的分析方法已有報道[2-6]，但有關(guān)氟啶胺和氟吡菌胺兩者復(fù)配制劑同條件分析方法尚未見公開報道。本文采用反相高效液相色譜法，使用Diamonsil C18柱和紫外可變波長檢測器，以乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)為流動相，在同一色譜條件下用外標(biāo)法對有效成分進(jìn)行分析和定量。該方法具有操作簡便，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度高的特點。

1 試驗部分

1.1 儀器與試劑

高效液相色譜儀：Shimadzu LC-20A，具可變波長紫外檢測器和自動進(jìn)樣器；色譜數(shù)據(jù)處理工作站；色譜柱：250 mm×4.6 mm (i.d.)不銹鋼柱，內(nèi)裝Diamonsil C18填充物，粒徑5 μm；超聲波清洗器；微孔過濾膜：0.45 μm有機(jī)膜。

乙腈：色譜純；水：新蒸二次蒸餾水；氟啶胺標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)、氟吡菌胺標(biāo)樣(質(zhì)量分?jǐn)?shù)99.0%)：江蘇揚農(nóng)化工股份有限公司；40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑試樣：江蘇揚農(nóng)化工股份有限公司研制。

1.2 色譜條件

流動相：乙腈+水(0.05%磷酸水溶液，體積比80∶20)；流速：1.0 mL/min；柱溫30 ℃；檢測波長：210 nm；進(jìn)樣體積：2 μL；保留時間：氟吡菌胺約4.6 min，氟啶胺約7.5 min。典型的液相色譜圖見圖1、2。

圖1 氟啶胺、氟吡菌胺標(biāo)樣液相色譜圖

圖2 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑液相色譜圖

1.3 分析步驟

1.3.1 標(biāo)樣溶液的配制

稱取氟啶胺標(biāo)樣約0.06 g和氟吡菌胺標(biāo)樣約0.02 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。

1.3.2 試樣溶液的配制

稱取試樣約0.2 g (精確至0.000 2 g)，置于50 mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，超聲振蕩使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻，用0.45 μm有機(jī)濾膜過濾后備用。

1.3.3 測定

在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，直至相鄰2針氟啶胺(氟吡菌胺)的峰面積相對變化小于1.2%后，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)行測定。

1.3.4 計算

將測得的2針試樣溶液以及試樣前后2針標(biāo)樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積分別進(jìn)行平均。試樣中氟啶胺(氟吡菌胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)X(%)按下式計算：

式中：A1為標(biāo)樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積的平均值；A2為試樣溶液中氟啶胺(氟吡菌胺)峰面積的平均值；m1為氟啶胺(氟吡菌胺)標(biāo)樣的質(zhì)量(g)；m2為試樣的質(zhì)量(g)；w為標(biāo)樣中氟啶胺(氟吡菌胺)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)(%)。

2 結(jié)果與討論

2.1 色譜條件的選擇

2.1.1 檢測波長的選擇

對氟啶胺和氟吡菌胺標(biāo)樣溶液分別在190～400 nm進(jìn)行紫外光譜掃描，得到其相應(yīng)的吸收波長與響應(yīng)值的紫外吸收光譜圖。當(dāng)選用210 nm作為檢測波長時，氟啶胺和氟吡菌胺均有較強(qiáng)吸收峰，同時雜質(zhì)響應(yīng)值小，流動相無吸收。綜合考慮各組分質(zhì)量比、雜質(zhì)分離、儀器基線及儀器響應(yīng)值等諸多因素，最終選定210 nm作為檢測波長。

2.1.2 流動相的選擇

在Diamonsil C18色譜柱上，分別試用不同比例的甲醇和水，乙腈和水作為流動相對試樣進(jìn)行分離檢測。經(jīng)測定發(fā)現(xiàn)，選擇乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相較理想。當(dāng)流速控制在1.0 mL/min時，有效成分與雜質(zhì)能很好地分離，峰形對稱，色譜峰尖銳，且基線平穩(wěn)，保留時間適當(dāng)。綜合以上因素，最終選定乙腈+水(0.05%磷酸水溶液)作為流動相，體積比為80∶20。

2.2 線性相關(guān)性測定

配制一系列不同濃度的氟啶胺(氟吡菌胺)標(biāo)樣溶液，按上述色譜操作條件，測定相應(yīng)的響應(yīng)值，并以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到氟啶胺和氟吡菌胺的線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)。氟啶胺線性方程為y=5.816 1x-10.298 2，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 9；氟吡菌胺線性方程為y=8.805 9x-0.189 8，相關(guān)系數(shù)R2=0.999 7。結(jié)果表明，該方法的線性關(guān)系良好。

2.3 方法精密度測定

在上述色譜操作條件下，對同一個40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑樣品進(jìn)行5次平行測定，計算標(biāo)準(zhǔn)偏差和變異系數(shù)。結(jié)果得到該方法測定氟啶胺和氟吡菌胺的標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為0.14和0.074，變異系數(shù)分別為0.46%和0.72%(表1)。由此可知該方法精密度較高。

2.4 方法準(zhǔn)確度測定

采用標(biāo)準(zhǔn)品添加法，在已知含量的40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑中加入一定量的氟啶胺、氟吡菌胺的標(biāo)準(zhǔn)品，按上述色譜操作條件進(jìn)行測定，計算回收率。測得氟啶胺的回收率為98.61%～100.89%，平均回收率為99.56%；氟吡菌胺的回收率為98.36%～100.65%，平均回收率為99.36%(表2)。由此可知該方法準(zhǔn)確度較高，可準(zhǔn)確定量。

表1 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑精密度測定

表2 40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑回收率測定

3 結(jié) 論

試驗結(jié)果表明，用本方法同時測定40%氟啶胺·氟吡菌胺懸浮劑中2種有效成分的含量，2種有效成分與雜質(zhì)能很好的分離，具有較高準(zhǔn)確度和精密度，線性關(guān)系良好，并且操作簡便、快速，該方法是此復(fù)配制劑較理想的分析方法。

參 考 文 獻(xiàn)

[1] 朱衛(wèi)剛, 胡偉群, 張蕊蕊, 等. 新型殺菌劑氟吡菌胺室內(nèi)殺菌活性[J].農(nóng)藥, 2012, 51(12): 922-923.

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