角音干預(yù)對肝火亢盛型自發(fā)性高血壓大鼠宏觀表征及易激惹程度的影響

楊佩 李君玲 李玉波 張思童 周倩 劉婧瑋 王田 趙慧輝 馬雪玲 王偉

摘要 目的：觀察中醫(yī)五行音樂（角音）對肝火亢盛型自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）宏觀表征及易激惹程度的影響，為進(jìn)一步探討角音降低高血壓肝火亢盛證的血壓、改善臨床癥狀及作用機(jī)制的研究提供參考。方法：將20只SHR大鼠隨機(jī)分為角音組（實驗組）和對照組，每組10只，實驗組給予連續(xù)角音干預(yù)（4周），對照組不予處理，每周動態(tài)采集宏觀表征指標(biāo)，干預(yù)前后對宏觀表征進(jìn)行對照觀察和比較易激惹程度評分。結(jié)果：經(jīng)過四周的角音干預(yù)，與對照組比較，角音組一般狀態(tài)和尾部的評分顯著高于對照組，兩者比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），但角音組被毛的評分和對照組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；角音組和對照組易激惹程度評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：連續(xù)角音干預(yù)對高血壓肝火亢盛證大鼠的宏觀表征及易激惹程度評分具有顯著的影響。

關(guān)鍵詞 角音；高血壓；肝火亢盛證；宏觀表征；易激惹程度

Abstract Objective：To observe the effects of five elements in music （jue tone） of Traditional Chinese Medicine on macroscopic characterization and irritability of hypertensive rats with liver-fire hyperactivity.Methods：A total of 20 spontaneously hypertensive rats （SHR） were randomly divided into jue tone （experimental） group and control group，with 10 rats in each group.The experimental group was given jue tone intervention for 4 weeks，and control group was not treated.Weekly dynamic macro indicators were collected，and the macroscopic characterization before and after the intervention were observed.The irritability was compared and evaluated.Results：After 4 weeks′ intervention by jue tone，compared with control group，the general status and tail score of rats in experimental group were significantly higher，and there was significant differences between the 2 groups （P<0.05）.There was significant difference in evaluation of irritability between experimental group and control group.Conclusion：Jue tone has significant effects on the macroscopic characterization and evaluation of irritability of SHR rats with liver-hypertension syndrome.

Key Words Jue tone； Hypertension； Liver-fire hyperactivity syndrome； Macroscopic characterization； Irritability degree

中圖分類號：R285.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2018.09.002

高血壓病，又稱原發(fā)性高血壓，其病理生理的主要靶器官是心臟和血管，長期高血壓會導(dǎo)致心、腦、腎等器官損害，引起腦血栓、心力衰竭、腎衰竭等，具有很高的致殘率和致死率，嚴(yán)重影響著人類的身體健康和身心健康。動物模型對闡明人類疾病的發(fā)病機(jī)理及建立預(yù)防、診斷和治療具有很重要的作用，而病證結(jié)合動物模型為人類研究高血壓疾病建立了一座橋梁。

按照高血壓病中醫(yī)辨證分型表，高血壓病中醫(yī)證候以肝火亢盛證、陰虛陽亢證、痰瘀互結(jié)證、氣血兩虛證、腎精不足證和沖任失調(diào)證等證型為主，尤以肝火亢盛證為早期突出證型。自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）是目前國際公認(rèn)的與人類原發(fā)性高血壓發(fā)病機(jī)制最為相似的動物模型。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)14～18周齡SHR為穩(wěn)定的高血壓肝火亢盛證。五行音樂是將中醫(yī)陰陽五行理論、天地人合一理論與音樂結(jié)合的嘗試。因五音入五臟，“角為木音通于肝”，中醫(yī)認(rèn)為高血壓病的發(fā)生與肝有關(guān)，《黃帝內(nèi)經(jīng)》曰：“諸風(fēng)掉眩，皆屬于肝”，因此本課題采用14周齡自發(fā)性高血壓大鼠，并篩選出符合高血壓肝火亢盛證證候?qū)傩缘拇笫?，運(yùn)用連續(xù)角音干預(yù)措施，觀察角音對高血壓肝火亢盛證大鼠宏觀表征指標(biāo)及易激惹程度的影響，為進(jìn)一步深入探討角音降低高血壓肝火亢盛證的血壓、改善臨床癥狀及作用機(jī)制的研究提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 14周齡自發(fā)性高血壓大鼠（SHR），雄性，20只，清潔級，按照常規(guī)飼養(yǎng)方法于北京中醫(yī)藥大學(xué)科研中心動物房用常規(guī)飼料飼養(yǎng)。

1.1.2 試劑與儀器 尾動脈無創(chuàng)血壓測量儀SoftronBP-2010A（北京軟隆科技有限責(zé)任公司）、比色卡（Casmtch）、攝像機(jī)（索尼HXR-NX5C）、五行音樂生命律動儀（北京樂先藥后科技有限公司，SW528C）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 大鼠分籠喂養(yǎng)，每籠5只，飼養(yǎng)籠為配有塑料吸水瓶的鐵絲制品，環(huán)境溫度為23～24 ℃，常規(guī)飼料為國家標(biāo)準(zhǔn)混合固體飼料，自由飲食。飼養(yǎng)1周后，測基線血壓，采用血壓、宏觀表征量表采集、行為學(xué)實驗，判別大鼠的證候?qū)傩?，?0只自發(fā)性高血壓大鼠（SHR）按照隨機(jī)數(shù)字表分為角音組（實驗組）和對照組，每組10只，實驗組給予連續(xù)角音干預(yù)（4周），對照組不予處理，每周動態(tài)采集宏觀表征指標(biāo)，干預(yù)前后對宏觀表征進(jìn)行對照觀察。

1.2.2 干預(yù)方法 采用五行音樂生命律動儀中角音曲目。將角音組大鼠置于籠具中，放入密閉安靜的環(huán)境中，用五行音樂律動儀播放五行音樂當(dāng)中的角音，播放30～45 min/次，1次/d，于每天13：00—15：00行角音干預(yù)（根據(jù)子午流注表）。

1.2.3 檢測指標(biāo)與方法

1.2.3.1 血壓及心率的采集 采用大鼠無創(chuàng)尾動脈測壓儀SoftronBP-2010A（北京軟隆科技有限責(zé)任公司）測量安靜狀態(tài)下肝火亢盛證大鼠血壓。按照儀器操作規(guī)范流程書測量大鼠安靜清醒狀態(tài)下尾部的血壓，于每周一、周五上午固定的時間段測量其血壓，通過血壓軟件讀出血壓及心率的值，并及時記錄。

1.2.3.2 宏觀表征指標(biāo)的采集 每周采集1次宏觀表征指標(biāo)，共4次。采集宏觀表征的指標(biāo)根據(jù)文獻(xiàn)[1-7]，使用動態(tài)采集大鼠計量化宏觀表征量表，主要包括精神狀態(tài)，活動度，耳廓、爪、尾血管充盈程度、大/小便量/質(zhì)/色的情況等。對癥狀進(jìn)行分級：精神狀態(tài)神疲記為1級，正常記為2級，興奮記為3級；活動度減少記為1級，正常記為2級，增加記為3級；被毛顏色白、濕滑、無豎起記為1級，白中少有黃色、頸部豎起、柔順記為2級，滿目皆黃色、干枯、全身豎起記為3級；耳廓無瘀點(diǎn)、血管數(shù)量3個以上記為1級，有需仔細(xì)辨認(rèn)的瘀點(diǎn)、血管數(shù)量有1～2個，記為2級，有顯著瘀點(diǎn)、血管數(shù)量為0，記為3級；尾部無角化記為1級，輕度角化記為2級，中度角化記為3級；爪部鮮紅、濕潤記為1級，暗紅、潤澤度適中記為2級，淡紅、干澀或脫屑記為3級；舌體瘦、鮮紅、少津干燥記為1級，舌體適中、暗紅、潤記為2級，舌體胖大、淡紅、濕潤記為3級。

1.2.3.3 易激惹程度分級及評分 參照文獻(xiàn)[8]分級方法：1級：指捉持領(lǐng)部時出現(xiàn)尖叫、驚跳，記1分；2級：指捉持頸部時欲咬人或咬人，記2分；3級：指提拿尾部時即出現(xiàn)尖叫、驚跳甚至咬人或與同籠大鼠頻繁打斗，記3分；無上述情況者為0級，記0分。

1.2.3.4 大鼠舌、爪R值采集 照片采集以及照片分析方法：于收集宏觀表征過程中采集大鼠舌、爪部位的圖像，采用日光燈頂棚照明方式在暗室內(nèi)拍攝完成。采用Adobe Photoshop 8.0.1對圖像進(jìn)行分析：按照Casmtch比色卡說明書，對所有圖像進(jìn)行歸一化處理，固定選取區(qū)域，設(shè)定色階，白色為L：93、a：0、b：0；灰色為L：58、a：0、b：0；黑色為L：22、a：0、b：0。分析每張圖片時，將黑、灰、白色階值設(shè)置為圖片標(biāo)準(zhǔn)色卡中的黑、白、灰色階值。選用矩形工具，依據(jù)比色卡上的規(guī)格選取圖像面積大小固定，舌體、爪部固定的位置，運(yùn)用Photoshop軟件中的“直方圖”工具，計算選定區(qū)域的R、G、B值（紅色、綠色、藍(lán)色值），并計算r[r=R/（R+G+B）]、g[r=G/（R+G+B）]、b[b=B/（R+G+B）]值。最后將圖像選定區(qū)域內(nèi)的R、G、B值錄入Excel表格待進(jìn)一步統(tǒng)計分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較采用t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血壓及心率 14周齡時2組大鼠的血壓及心率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），連續(xù)角音干預(yù)后第3～4周肝火亢盛證角音組大鼠的血壓及心率出現(xiàn)顯著的差異，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖1、圖2。

2.2 宏觀表征指標(biāo)的結(jié)果

角音組大鼠體格健壯，活動較多，反應(yīng)敏捷，飲食正常，行動迅速。對照組大鼠則消瘦，反應(yīng)遲鈍，活動緩慢，被毛蓬起無光澤。

與對照組比較，角音干預(yù)后第1周和第3周角音組SHR大鼠一般狀態(tài)的活動增加比率稍低于對照組，但角音干預(yù)后第2周一般狀態(tài)活動增加比率高于對照組，而持續(xù)至第4周時角音組SHR大鼠的一般狀態(tài)活動增加比率顯著低于對照組，角音組合對照組之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與對照組比較，角音組第1周和第2周的精神狀態(tài)比率沒有差異，角音組第3周和第4周的精神狀態(tài)比率與對照組有了顯著的差異；與對照組比較，角音組SHR大鼠被毛的光澤度干預(yù)3周后出現(xiàn)明顯變化，和對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；與對照組比較，角音組SHR大鼠尾的角化比率在4周內(nèi)顯著增長，對照組同時也出現(xiàn)了顯著的增長，但在角音干預(yù)后第4周尾的角化比率與對照組比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；角音組與對照組耳廓瘀點(diǎn)和血管數(shù)量沒有明顯的變化；與對照組比較，角音組的爪部濕潤程度和舌體都沒有明顯變化。見表1。

2.3 易激惹程度評分結(jié)果 與對照組比較，角音組干預(yù)1周后肝火亢盛證SHR大鼠易激惹程度和對照組無顯著性差異；與角音組比較，對照組SHR大鼠易激惹程度隨周齡增加逐漸加重，從角音干預(yù)第2周開始，肝火亢盛證SHR大鼠易激惹程度呈下降趨勢；角音干預(yù)第2周、第3周角音組大鼠和對照組大鼠易激惹，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；第4周時角音組和對照組易激惹程度比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見圖3。

2.4 SHR大鼠舌、爪R值結(jié)果 連續(xù)干預(yù)4周時角音組SHR大鼠舌、爪部R值均低于對照組大鼠，肝火亢盛證癥狀顯著減弱，2組舌爪R值不滿足正態(tài)性分布，進(jìn)行非參數(shù)檢驗后發(fā)現(xiàn)統(tǒng)計結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表2。

3 討論

原發(fā)性高血壓病是嚴(yán)重危害人類健康的常見病之一，是以體循環(huán)血壓升高為主要表現(xiàn)的臨床綜合征，以慢性血壓升高為主要特征，主要病理變化是全身細(xì)小動脈痙攣、硬化，是引起心腦血管病的重要因素，易導(dǎo)致心、腦、腎、血管等靶器官損害，愈加受到防范和重視。高血壓定義為收縮壓≥140 mmHg和（或）舒張壓≥90 mmHg。引起高血壓的因素很多，不僅有顯著的軀體因素，而且還有顯著的心理因素，是遺傳因素和環(huán)境因素相互作用的結(jié)果，遺傳因素占40%，環(huán)境因素占60%[9]，高血壓病屬于中醫(yī)學(xué)“眩暈”“頭疼”范疇，后世醫(yī)家以《黃帝內(nèi)經(jīng)》為基礎(chǔ)，補(bǔ)充和發(fā)展了中醫(yī)學(xué)對“眩暈”和“頭痛”的認(rèn)識。

有研究表明，高血壓病與心理因素有密切關(guān)系[10]，高血壓病更應(yīng)重視心理的治療。參考文獻(xiàn)[11]，有效的心理治療如音樂療法對高血壓患者有較好的療效。音樂已經(jīng)在治療領(lǐng)域中使用了數(shù)萬年，早在春秋時期，中國就有文字記載?，F(xiàn)代音樂療法進(jìn)入我國40多年以來，在臨床醫(yī)學(xué)中音樂逐漸做為一種醫(yī)療手段，廣泛應(yīng)用于調(diào)節(jié)情調(diào)、減輕痛苦、改善焦慮、抑郁狀態(tài)等一系列疾病，并在疾病的康復(fù)中收到了獨(dú)特的效果[12]。音樂療法是以心理治療的理論和方法為基礎(chǔ)，運(yùn)用音樂特有的生理和心理效應(yīng)來促進(jìn)或恢復(fù)健康[11]，五行音樂結(jié)合常規(guī)降壓治療的角度優(yōu)于常規(guī)降壓治療，可改善中醫(yī)證候。因五音入五臟，“角為木音通于肝”，利用角音可以實現(xiàn)高血壓肝火亢盛證的降壓效果。

肝火亢盛癥是高血壓常見證型[13]，西醫(yī)認(rèn)為高血壓的發(fā)生與遺傳因素、環(huán)境因素如飲食和高膽固醇血癥等其他因素有關(guān)[14]，有研究指出，音樂可以抑制腎上腺素和去甲腎上腺素的分泌[15-16]，從而減小外周阻力，降低血壓，本研究采用古典音樂五行音樂的角音，曲調(diào)悠揚(yáng)，中國古典音樂強(qiáng)調(diào)和諧、自然、清新、淡雅的意境美，尤其適應(yīng)于修身養(yǎng)性與平衡身心，可以將五行音樂用來輔助高血壓的治療通肝理氣[17-19]；本實驗結(jié)果中14、16周齡角音組SHR大鼠一般狀態(tài)的評分稍高于對照組，但15周齡時評分低于對照組，角音組SHR大鼠在經(jīng)過3周的治療后第17周的評分顯著高于對照組，兩者之間比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；角音組SHR大鼠被毛14周到17周的評分沒有變化，和對照組未見顯著的差異；角音組SHR大鼠尾的評分在14～17周顯著增長，對照組同時也出現(xiàn)了顯著的增長，但在強(qiáng)烈應(yīng)激后角音組第17周的評分與對照組出現(xiàn)了顯著的差異；易激惹程度評分的結(jié)果為14周齡時角音組SHR大鼠易激惹程度評分和對照組差異無統(tǒng)計學(xué)意義，對照組SHR大鼠易激惹程度評分隨周齡增加逐漸加重，從15周齡角音開始干預(yù)后，肝火亢盛證大鼠易激惹程度評分呈下降趨勢；15、16周齡大鼠角音組大鼠和對照組大鼠易激惹評分差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；17周齡大鼠角音組和對照組易激惹程度評分比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），即自發(fā)性高血壓大鼠出現(xiàn)于14～18周齡易激惹程度評分顯著增加。本研究表明，隨著周齡的增加和外界環(huán)境的干預(yù)如角音，SHR宏觀表征中對應(yīng)臨床癥狀中急躁易怒的易激惹程度評分顯著增加，尤以舌和爪的變化更為顯著，角音組舌、爪部R值均低于對照組，肝火亢盛癥狀顯著減弱，五行音樂中的角音干預(yù)對于改善高血壓肝火亢盛證大鼠的舌、爪和易激惹程度均有顯著效果，依據(jù)高血壓肝火亢盛證-臨床癥狀與動物證候等效的轉(zhuǎn)換，臨床疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)為SBP>140 mmHg，DBP>90 mmHg，為臨床疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)，主癥表現(xiàn)為為眩暈、頭痛和急躁易怒，次癥表現(xiàn)為面紅、目赤、口干、口苦、便秘、溲赤、舌紅、苔黃、脈弦數(shù)；動物疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)為SBP>140 mmHg，DBP>90 mmHg，為動物宏觀替代指征，主要依據(jù)是旋轉(zhuǎn)耐受時間縮短、易激惹程度評分高、行為學(xué)試驗（曠場試驗總活動距離、穿格次數(shù)、直立次數(shù)增加），次要依據(jù)是舌質(zhì)少津、被毛干枯蓬亂、便質(zhì)干硬、排便時間延長。角音可以用于改善高血壓肝火亢盛證患者的眩暈、減少焦慮躁動。有研究表明，目前有關(guān)高血壓治療的非藥物手段的報道越來越多，尤其是音樂療法，但相對于國外而言，國內(nèi)的研究相對較少，所以本研究可為實驗或臨床中的實驗研究中角音的運(yùn)用提供了部分理論依據(jù)。綜合評價五行音樂對高血壓肝火亢盛證大鼠的作用[20-23]，為高血壓肝火亢盛證的護(hù)理干預(yù)提供新的思路，優(yōu)化高血壓的護(hù)理干預(yù)措施，恢復(fù)和提高其生命質(zhì)量提供基礎(chǔ)。根據(jù)文獻(xiàn)[24]，穴位按摩配合五行音樂療法可改善患者，為促進(jìn)高血壓患者的血壓及失眠質(zhì)量。中醫(yī)五行音樂干預(yù)疾病的方法逐步開展，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展人們生活水平不斷提高，醫(yī)療手段不斷增加，人們防病治病的意識逐步提高，對中醫(yī)理論的運(yùn)用也不斷深入，五行音樂得到廣泛運(yùn)用。本課題為臨床研究提供了一定的理論基礎(chǔ)，即角音對高血壓肝火亢盛證大鼠的宏觀表征及易激惹程度具有顯著的影響。

綜上所述，角音干預(yù)可降低高血壓肝火亢盛證大鼠血壓及心率，減輕肝火亢盛證大鼠焦慮狀躁動狀態(tài)，并抑制可能與與高血壓相關(guān)的宏觀表征（爪、舌、尾）等臨床表現(xiàn)。

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（2018-07-27收稿 責(zé)任編輯：徐穎）