HPLC法鑒別復(fù)方太子參口服液的研究

廖金英 黃秋華 林鑫冰 游奶壽 吳小玲 張成輝

[摘要]本試驗采用高效液相色譜法（HPLC法）對復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B圖譜進行分析，并探討了其他可能作為復(fù)方太子參口服液定性定量的特征性成分。此法采用Welchrom C18（4.6×250mm，5μm）柱，柱溫為室溫、檢測波長為203mn、流動相為乙腈一水（30：70）、流速1.0mL/min、進樣量20μL。結(jié)果表明復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B峰形、分離度均符合要求，此法可用于復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B鑒別。復(fù)方太子參口服液中檢測有其他太子參特征峰，也可用于復(fù)方太子參口服液鑒別。本研究將為高效液相色譜法鑒別復(fù)方太子參口服液提供寶貴的理論依據(jù)。

[關(guān)鍵詞]復(fù)方太子參口服液;太子參環(huán)肽B;高效液相色譜法

太子參（Pseudostellaria heterophylla）別名童參、米參、孩兒參、雙批七、四葉參，是石竹科孩兒參屬植物[1]。素有“中國太子參之鄉(xiāng)”美譽的福建柘榮，其種植的太子參是聞名全國的道地藥材，享譽國內(nèi)外[2]，已經(jīng)成為柘榮縣許多大規(guī)模企業(yè)的主要生產(chǎn)原料[3]。福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的復(fù)方太子參口服液以太子參為主成分，此外還有茯苓、靈芝等成分，具有益氣生津、健脾消食的功效。目前主要采用薄層色譜法對口服液中的太子參進行定性鑒別，方法較復(fù)雜，且影響因素較多，會產(chǎn)生陰性結(jié)果，鑒別結(jié)果較不穩(wěn)定。

目前，太子參藥材的質(zhì)量評價還沒有統(tǒng)一的評價標準[4]。環(huán)肽類化合物是太子參中含有的特色成分，目前已經(jīng)從太子參中分離出了16種環(huán)肽類化合物[5]。已有研究表明，太子參環(huán)肽B是太子參的主要活性成分，目前關(guān)于太子參環(huán)肽B測定的報道中，普遍采用高效液相色譜法[6-9]。高效液相色譜法可以適應(yīng)中藥和中成藥成分的多樣性、復(fù)雜性以及分離難度大的特點，因此，高效液相色譜法在中藥化學(xué)成分分析領(lǐng)域廣泛應(yīng)用，發(fā)展迅速[10]。為此，本試驗采用高效液相色譜法對復(fù)方太子參口服液中的太子參環(huán)肽B進行鑒別，并對其他的特征成分進行了初步的分析，以期為復(fù)方太子參口服液的質(zhì)量標準制定提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 主要儀器

高效液相色譜儀Acme 9000：韓國英麟機器有限公司;紫外檢測器Acme 9000：韓國英麟機器有限公司;電子分析天平BSA224S：賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司;超純水機ING-CHE2kuv：默克化工技術(shù)有限公司;津騰針式過濾器：孔徑0.22μm。

1.1.2 試劑及藥品

甲醇、乙腈均為色譜純：美國Fisher公司;太子參環(huán)肽B標準品（HPLC≥98%，B21236-20mg）：上海源葉生物科技有限公司;太子參對照藥材（規(guī)格1g/瓶）：中國食品藥品建東研究院;復(fù)方太子參口服液（規(guī)格10mL/瓶）：福建省閩東力捷迅藥業(yè)有限公司。

1.2 方法

1.2.1 太子參環(huán)肽B對照溶液的配制

精密稱取太子參環(huán)肽B標準品（98%）3.3mg，置于10mL容量瓶中，用甲醇溶解定容，充分混勻，制成323.4μg/mL的對照品儲備液。用移液管準確移取1mL太子參環(huán)肽B對照品儲備液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容，充分混勻，制成32.34μg/mL太子參環(huán)肽B對照品溶液。同法，再稀釋2倍和5倍，分別得到16.17μg/mL和6.468μg/mL太子參環(huán)肽B對照品溶液，配置好的對照品溶液用0.22μm的針式過濾器過濾，備用。

1.2.2 太子參對照藥材溶液的制備

精密稱取太子參對照藥材1g，加入4mL甲醇，超聲提取45min，用針式過濾器過濾，存于樣品瓶中備用。另取部分續(xù)濾液用甲醇稀釋1倍，制成太子參對照藥材稀釋液，備用。

1.2.3 供試品溶液的配制

隨機抽取10支復(fù)方太子參口服液，將內(nèi)容物倒出，混合均勻，從中隨機取樣，用0.22μm微孔濾膜過濾，將續(xù)濾液置樣品瓶中，制成未稀釋的混合供試品溶液。另取5mL未稀釋的混合供試品溶液，置于10mL容量瓶中用甲醇定容后搖勻，制成稀釋2倍的供試品溶液，過濾，置樣品瓶中備用。同法制成稀釋4倍的供試品溶液。最終得到3個濃度梯度的10瓶混合的供試品溶液。

1.2.4 色譜條件

色譜柱：WelchromC18（4.6×250mm，5μm）柱;柱溫：室溫;檢測器：Acme 9000紫外檢測器;檢測波長：203nm;流動相：乙腈-水（30：70）;進樣量：20μL。

1.2.5 復(fù)方太子參口服液中太子參特征峰檢測

取太子參環(huán)肽B對照溶液、太子參對照藥材溶液和3個濃度梯度的供試品溶液，按1.2.4下的色譜條件進樣，采集時間為40min。對比太子參環(huán)肽B、太子參對照藥材和供試品三者高效液相色譜圖的共有峰，并記錄其中峰面積隨供試品溶液濃度變化而變化的色譜峰。并計算太子參環(huán)肽B峰與鄰近色譜峰的分離度R，R越大，說明太子參環(huán)肽B峰與鄰近色譜峰的分離越好，均要求滿足R>1.5。

2 結(jié)果與分析

2.1 復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B的鑒別

太子參環(huán)肽B對照品溶液的液相檢測圖譜如圖1所示。由圖1中可以看出，隨著太子參環(huán)肽B對照品溶液濃度的增大，保留時間為18.9min左右的色譜峰面積也隨之增大，其他色譜峰無明顯變化，說明此峰即為太子參環(huán)肽B的特征峰。

復(fù)方太子參口服液供試溶液和太子參對照藥材溶液的高效液相色譜圖見圖2。據(jù)圖2可知，供試品和太子參對照藥材中均含有一個保留時間為18.9min左右的色譜峰，可判定供試品溶液及對照藥材溶液中均含有太子參環(huán)肽B。另結(jié)果顯示供試品中太子參環(huán)肽B與前后鄰近峰的分離度分別為3.4、17.4，太子參對照藥材溶液中太子參環(huán)肽B與鄰近峰的分離度為18.6，太子參環(huán)肽B對照品溶液中太子參環(huán)肽B與鄰近峰的分離度分別為33.7，分離度均大于1.5，說明太子參環(huán)肽B與各溶液的其他組分離良好，且從圖中可以看出峰形較好。由此可知，太子參環(huán)肽B可作為太子參的特征成分用于復(fù)方太子參口服液的鑒別。

2.2 復(fù)方太子參口服液中特征峰分析

復(fù)方太子參口服液中其他特征峰成分測定的結(jié)果如圖3所示，供試品溶液與太子參對照藥材中保留時間相同且峰面積隨供試品溶液濃度變小而相應(yīng)變小的色譜峰的保留時間分別為4.37min、7.37min左右，這兩個特征峰對應(yīng)的成分可能是供試品溶液中含有且含量較大的太子參特征成分，也可作為復(fù)方太子參口服液定性鑒別。

3 結(jié)論

本試驗采用太子參環(huán)肽B的最大吸收波長203nm作為檢測波長，此波長與甲醇的末端吸收接近，甲醇是本試驗的溶劑，采用此波長會出現(xiàn)較大的溶劑峰，但太子參環(huán)肽B峰與鄰近峰的分離度良好，對太子參環(huán)肽B的測定無影響[11]。

復(fù)方太子參口服液的配方較復(fù)雜，干擾成分較多，本試驗采取直接過濾的方法配制供試品溶液，故復(fù)方太子參口服液中太子參環(huán)肽B的檢測結(jié)果含量較低，在配制供試品溶液時，可以用乙酸乙酯萃取，濃縮處理后再進行檢測，但采用此法也會造成太子參環(huán)肽B的損失[12]。

本試驗所需的太子參環(huán)肽B標準品是以太子參為原料，提取分離純化而得到的[13]，價格昂貴，故采用此法成本較高。

本試驗發(fā)現(xiàn)復(fù)方太子參口服液中除太子參環(huán)肽B以外，還檢測到其他特征峰存在，但還不確定是何特征物質(zhì)，可以對其成分做進一步研究。此外，福建柘榮產(chǎn)的太子參中太子參環(huán)肽A的含量是太子參環(huán)肽B含量的10-20倍[14-20]，也可對其進一步研究，為復(fù)方太子參口服液的質(zhì)量標準提供更多的參考。

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