厚樸對胃腸動力障礙作用的研究

巢蕾　曹雨誕　陳佩東

[摘要] 目的 研究厚樸以及厚樸酚促進小鼠胃腸動力的作用機制。 方法 將304只雄性ICR小鼠按體重隨機分為厚樸提取物低、中、高劑量組（1、2、4 g/kg），厚樸酚低、中、高劑量組（40、80、160 mg/kg），陽性對照組（鹽酸依托比利50 mg/kg）及空白對照組，每組8只。分別測定正常小鼠小腸推進率、采用阿托品（1 mg/kg）及昂丹司瓊（1.6 mg/kg）造模后小鼠胃排空和小腸推進率，應用多通道生理儀測定小鼠電生理波形。 結(jié)果 與空白對照組比較，厚樸提取物中、高劑量組與厚樸酚中、高劑量組均可顯著提高正常小鼠小腸推進率（P < 0.05）。與阿托品模型組比較，厚樸提取物中、高劑量組和厚樸酚低、中、高劑量組小鼠胃排空率均顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。與阿托品模型組比較，厚樸提取物高劑量組和厚樸酚高劑量組小腸推進率均顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。與昂丹司瓊模型組比較，厚樸酚高劑量組胃排空率、小腸推進率顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。 結(jié)論 厚樸提取物及厚樸酚可提高小鼠胃排空率及小腸推進率，其對胃腸動力的促進作用可能與5羥色胺（5-HT3）受體和M膽堿受體相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 厚樸；胃動力；小腸推動力；厚樸酚

[中圖分類號] R57 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2018）05（a）-0031-04

Study on the effect of Magnoliae Officinalis Cortex on gastrointestinal motility disorders

CHAO Lei1 CAO Yudan2 CHEN Peidong2 ZHANG Li2

1.Department of Pharmacy， Jiangsu Hospital of Traditional Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210029， China； 2.College of Pharmacy， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210046， China

[Abstract] Objective To investigate the mechanism of Magnoliae Officinalis Cortex on promoting gastrointestinal motility of mice. Methods Three hundred and four male ICR mice were randomly divided into low， medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups （1， 2， 4 g/kg）， low， medium， high dose of magnolol groups （40， 80， 160 mg/kg）， positive control group （Etobil Hydrochloride， 50 mg/kg） and blank control group according to the body weight， with 8 mice in each group. The intestinal propulsive rate of normal mice， and the gastric empty and intestinal propulsive rate of Atropine （1 mg/kg） and Ondansetron （1.6 mg/kg） induced mice were measured respectively. The multi-channel physiological instrument was used to detect the muscle electrophysiological waveform. Results Compared with blank control group， the intestinal propulsive rates of normal mice in medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups and medium， high dose of magnolol groups were significantly improved （P < 0.05）. Compared with Atropine model group， the gastric emptying rates in medium， high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract groups and low， medium， high dose of magnolol groups were significantly improved （P < 0.05 or P < 0.01）. Compared with Atropine model group， the intestinal propulsive rates in high dose of Magnoliae Officinalis Cortex extract group and high dose of magnolol group were improved， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Compared with Ondansetron model group， the gastric emptying rate and intestinal propulsive rate in high dose of magnolol group were improved， the differences were statistically significant （P < 0.05）. Conclusion Magnoliae Officinalis Cortex extract and magnolol can improve the gastric emptying rate and intestinal propulsive rate of mice， the positive effect for gastrointestinal motility may be connected with 5-HT3 receptor and M acetylcholine receptor.

[Key words] Magnoliae Officinalis Cortex； Gastric motility； Small intestinal propulsion； Magnolol

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、根皮及枝皮[1]，主要化學成分為新木脂素類[2-3]、苷類[4]和生物堿類[5]。厚樸主要的功效為消脹除滿、化導消積[6]，為通降胃氣之要藥[7]。此外，厚樸還具有抗氧化[8]、抗抑郁等作用[9]。厚樸對胃腸動力障礙患者具有確切的療效。厚樸排氣合劑對術(shù)后患者具有明顯的改善胃腸動力的作用[10]，厚樸提取物可提高胃排空率并且促進小腸推進率，對血清中D-木糖、胃動素、胃泌素等水平有調(diào)節(jié)作用[11]，而厚樸中的主要成分厚樸酚對胃排空率及小腸推進率均有促進作用[12]。盡管厚樸及含有厚樸的復方對胃腸動力障礙的作用研究有一定進展，但是其作用機制并不明確。在前期的工作中我們對厚樸的炮制工藝及化學成分進行了研究[13]，本研究應用M膽堿受體拮抗藥阿托品和5羥色胺（5-HT3）受體拮抗劑昂丹司瓊復制了小鼠胃腸動力障礙模型，對厚樸提取物和其中主要成分厚樸酚促進小鼠胃腸動力的作用進行了研究。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 試藥和儀器 厚樸購自安徽省六安市霍山縣（No.20160417），由南京中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室劉圣金副教授鑒定為厚樸（Magnolia officinalis Rehd. et Wils.）；厚樸酚對照品（批號：20131104）購自江蘇省藥檢所；硫酸阿托品注射液（批號：W140103）購自上海禾豐制藥有限公司；鹽酸昂丹司瓊（批號：140906）、伊文思藍（批號：201406）、可溶性淀粉（批號：201406）購自上海思域化工科技有限公司；鹽酸依托比利片購自日本Abbott制藥有限公司（批號：911-8555）。ALCB10-MPA2000型多道生理儀（上海奧爾科特生物科技有限公司）；TGL-16C型高速臺式離心機（上海安亭科學儀器廠）；UV-1600型紫外可見分光光度計（上海美譜達儀器有限公司）。

1.1.2 實驗動物 雄性清潔級ICR小鼠（18～22 g），鼠齡4～5周，購自上海杰思捷實驗動物有限公司，動物許可證號SCXK（滬）2013-0006。20～24℃恒溫飼養(yǎng)，相對濕度40%～70%，晝夜明暗交替時間為12 h。

1.2 厚樸樣品的制備

取20年樹齡厚樸100 g，去粗皮，粉碎，以1000 mL 95%乙醇提取2次，合并濾液，減壓濃縮，加0.1 g吐溫80，用0.5%羧甲基纖維素鈉分別配制成厚樸提取物低劑量組、中劑量組和高劑量組（含生藥量分別為1、2、4 g/kg）。

1.3 實驗動物分組與給藥

1.3.1 正常小鼠小腸推進研究 將64只小鼠按體重隨機分為空白對照組，陽性對照組（鹽酸依托比利50 mg/kg），厚樸提取物低、中、高劑量組（1、2、4 g/kg）和厚樸酚低、中、高劑量組（40、80、160 mg/kg），每組8只。禁食16 h后，各組小鼠灌胃給予相應的藥物溶液20 mL/kg，空白對照組給予等容積的羧甲基纖維素鈉。10 min后灌胃給予活性炭混合物0.01 mL/g，20 min后處死小鼠，測定小鼠小腸推進率。

1.3.2 阿托品造模小鼠胃排空和小腸推進率研究 將144只小鼠按體重隨機分為空白對照組，陽性對照組（鹽酸依托比利50 mg/kg），阿托品模型組（1 mg/kg），厚樸提取物低、中、高劑量組（1、2、4 g/kg）和厚樸酚低、中、高劑量組（40、80、160 mg/kg），每組8只。禁食16 h后，除空白組外其余各組皮下注射阿托品，20 min后各組小鼠灌胃給予相應的藥物溶液20 mL/kg，空白對照組給予等容積的羧甲基纖維素鈉。給藥后20 min灌胃給藥伊文斯蘭0.2 mL，20 min后處死小鼠，分別測定小鼠胃排空率和小腸推進率。

1.3.3 昂丹司瓊造模小鼠胃排空和小腸推進率研究 將96只小鼠按體重隨機分為空白對照組，陽性對照組（鹽酸依托比利50 mg/kg），昂丹司瓊模型組（1.6 mg/kg），厚樸酚低、中、高劑量組（40、80、160 mg/kg），每組8只。禁食16 h后，除空白組外其余各組腹腔注射昂丹司瓊，20 min后各組小鼠灌胃給予相應的藥物溶液20 mL/kg，空白對照組給予等容積的羧甲基纖維素鈉。給藥后20 min灌胃給藥伊文斯蘭0.2 mL，20 min后處死小鼠，分別測定小鼠胃排空率和小腸推進率。

1.3.4 活性炭混合物配制方法 活性炭0.5 g、可溶性淀粉0.5 g、玉米淀粉1.5 g、玉米油（金龍魚）1 g、脫脂奶粉（伊利）0.5 g，加水至10 mL。

1.3.5 小腸推進率和胃排空率測定 A為活性炭從幽門到小腸中的距離，B為小腸的長度，A/B×100%即為小腸推進率。胃排空率測定：灌胃給藥20 min后，立即摘下胃部，胃上下兩端均用醫(yī)用縫合線結(jié)扎，然后將胃剪下放入7 mL pH為7.4的PBS液中，剪碎后離心10 min，轉(zhuǎn)速15 000 r/min，離心半徑8.1 cm。取上清液5 mL，于570 nm下檢測。胃排空率=（A-B）/A×100%，其中A為加入含伊文斯蘭的混合食物后立即處死小鼠胃中伊文思藍的吸光度，B為20 min后小鼠胃中伊文思藍的吸光度。

1.4 多道生理儀測定

小鼠小腸電生理波形圖。小鼠處死后，取小腸靠近盲腸部分，放在臺式液中，剪成1 cm長小段共4段，多道生理儀上測試。

1.5 統(tǒng)計學方法

采用SPSS 16.0軟件，計量資料采用均數(shù)±標準差（x±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P < 0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 正常小鼠小腸推進實驗

與空白對照組比較，陽性對照組可顯著提高正常小鼠小腸推進率，差異有高度統(tǒng)計學意義（P < 0.01），厚樸提取物中、高劑量組與厚樸酚中、高劑量組均可提高小鼠小腸推進率（P < 0.05）。而厚樸提取物低劑量組、厚樸酚低劑量組與空白對照組比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表1。

2.2 阿托品造模測定厚樸提取物及厚樸酚對小鼠胃排空率和小腸推進率的影響

與空白對照組比較，阿托品模型組胃排空率、小腸推進率顯著降低（P < 0.01）。與阿托品模型組比較，厚樸提取物中、高劑量組和厚樸酚低、中、高劑量組小鼠胃排空率均顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05或P < 0.01）。與阿托品模型組比較，厚樸提取物高劑量組和厚樸酚高劑量組小腸推進率均顯著上升，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05），而厚樸提取物低、中劑量組和厚樸酚低、中劑量組均無明顯變化，差異無統(tǒng)計學意義（P > 0.05）。見表2。

2.3 昂丹司瓊造模測定厚樸酚對小鼠胃排空和小腸推進率的影響

與空白對照組比較，昂丹司瓊模型組小鼠胃排空率、小腸推進率顯著降低，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05、P < 0.01）。與昂丹司瓊模型組比較，陽性對照組、厚樸酚高劑量組胃排空率、小腸推進率顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義（P < 0.05）。見表3。

2.4 多道生理儀測定小鼠小腸電生理實驗

取各組小鼠小腸片段，采用多通道生理儀比較小鼠小腸電生理波形圖，見圖1。從圖中可見，正常小鼠（圖1A）在單位時間內(nèi)（18.87 s）出現(xiàn)9個波峰。阿托品造模后，陽性對照組（圖1B）出現(xiàn)9個完整波峰，而阿托品模型組（圖1C）出現(xiàn)6個完整的波峰，厚樸提取物高劑量組為8個完整波峰（圖1D）。昂丹司瓊模型組出現(xiàn)7個完整的波峰（圖1E）。昂丹司瓊造模后，厚樸酚高劑量組出現(xiàn)9個完整的波峰（圖1F）。

3 討論

厚樸作為通降胃氣之要藥[14]，臨床中常用于治療各種原因引起的胃腸蠕動功能障礙疾病[15-16]。有研究表明厚樸中的化學成分對5-HT等單胺類神經(jīng)遞質(zhì)有調(diào)節(jié)作用[17-18]，其中厚樸酚通過對大鼠腦中5-HT的調(diào)節(jié)對抑郁癥有抑制作用[19]。而昂丹司瓊通過競爭5-HT3受體，可以抑制胃、腸平滑肌的收縮，在胃腸動力障礙作用研究中是一個重要的造模藥物[20]，所以我們選擇了昂丹司瓊造模方法驗證厚樸中的主要成分厚樸酚促進胃腸動力作用。鹽酸依托比利是一種胃腸動力藥物，其作用機制主要是一方面阻斷多巴胺D2受體及抑制乙酰膽堿酯酶活性，是研究腸胃動力的常用陽性對照藥物。

本研究結(jié)果表明，厚樸提取物及其主要成分厚樸酚的中、高劑量組對正常小鼠小腸的推進率有促進作用，提示厚樸酚可能為厚樸中促進胃腸動力的成分之一。在阿托品造模小鼠中，厚樸提取物及厚樸酚對小鼠胃排空率的促進作用顯著，特別是厚樸酚低劑量組即表現(xiàn)出促進胃排空的作用。而在促進小腸推進率實驗中，只有厚樸酚高劑量組才表現(xiàn)出顯著作用。以上實驗結(jié)果提示，厚樸提取物和厚樸酚在由M膽堿受體抑制導致的胃腸動力障礙中，對胃排空率的促進作用更強。在昂丹司瓊造模小鼠中，厚樸酚高劑量組表現(xiàn)出促進胃排空率及小腸推進率作用，提示厚樸酚對5-HT受體抑制引起的胃腸動力障礙具有一定的促進作用。小鼠小腸電生理實驗結(jié)果表明，厚樸提取物及厚樸酚高劑量組對阿托品和昂丹司瓊導致的小腸蠕動頻率下降均有改善作用。

胃腸動力障礙是臨床常見病，厚樸在臨床中常用于消脹除滿。本研究結(jié)果提示，厚樸消脹除滿的作用不僅與興奮M膽堿受體有關(guān)，而且可對5-HT3受體產(chǎn)生一定的調(diào)節(jié)作用，增強胃腸平滑肌的收縮性。

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（收稿日期：2017-12-04 本文編輯：張瑜杰）