• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    AIRE因子在重癥肌無力患者外周血中的表達(dá)及其影響

    2018-09-03 10:45:22王圣元肖楓林李航
    中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào) 2018年13期
    關(guān)鍵詞:重癥肌無力

    王圣元 肖楓林 李航

    [摘要] 目的 分析自身免疫性調(diào)節(jié)因子(AIRE)在重癥肌無力(MG)患者外周血中的表達(dá)及其影響因素。 方法 收集2016年1月~2017年1月空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院收治的MG患者臨床資料及外周血標(biāo)本,分為全身型(GMG)組(16例)、眼肌型(OMG)組(14例)、對(duì)照組(10例)。采用流式細(xì)胞術(shù)分析各組AIRE因子、Tfr細(xì)胞及Tfh細(xì)胞比值。 結(jié)果 GMG組AIRE因子陽性表達(dá)較OMG組和對(duì)照組下降(P < 0.001),而OMG組和對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)。AIRE因子陽性表達(dá)與Tfr/Tfh比值呈正相關(guān)(r=0.605,P < 0.001),而與QMG評(píng)分及臨床絕對(duì)評(píng)分均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.622,P < 0.001;r=-0.513,P=0.004)。 結(jié)論 AIRE可能參與了MG的發(fā)病過程,低水平AIRE在誘導(dǎo)MG發(fā)病的過程中可能起關(guān)鍵作用。

    [關(guān)鍵詞] 自身免疫性調(diào)節(jié)因子;重癥肌無力;定量重癥肌無力評(píng)分;絕對(duì)評(píng)分

    [中圖分類號(hào)] R746.1 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1673-7210(2018)05(a)-0047-04

    The expression and influencing factors of AIRE in peripheral blood of myasthenia gravis

    WANG Shengyuan1* XIAO Fenglin2* LI Hang1 ZHANG Yu1

    1.Department of HBO, Navy General Hospital of PLA, Beijing 100048, China; 2.Department of Nephrology, Navy General Hospital of PLA, Beijing 100048, China

    [Abstract] Objective To study the expression and influencing factors of AIRE in peripheral blood of MG. Methods Clinical data and peripheral blood samples of MG patients were collected at Tangdu Hospital of air force Military Medical University from January 2016 to January 2017. All data were divided into general type MG (GMG) group (16 cases), ocular MG (OMG) group (14 cases) and control group (10 cases). Flow cytometry was used to analyze the ratio of AIRE positive cells, Tfr cells and Tfh cells. Results The express of AIRE in GMG group was significantly lower than that in OMG group and control group (P=0.003), but there was no significant difference between OMG group and control group (P=0.152). The express of AIRE was positively correlated with the ratio of Tfr/Tfh (r=0.605, P < 0.001), but negatively correlated with the QMG score and clinical absolute score (r=-0.622, P < 0.001; r=-0.513, P=0.004). Conclusion AIRE may be involved in the pathogenesis of MG, and low level of AIRE may play a key role in the pathogenesis of MG.

    [Key words] Autoimmune regulator; Myasthenia gravis; Quantitative MG score; Clinical absolute score

    重癥肌無力(MG)是神經(jīng)系統(tǒng)常見的自身免疫系統(tǒng)疾病(AIDs),具有明確的抗原、抗體及病理作用靶點(diǎn),病變累及神經(jīng)-肌肉接頭突觸后膜上的乙酰膽堿受體[1-2]。MG發(fā)病機(jī)制與異常的免疫應(yīng)答明顯相關(guān),但引起MG起病或加重的機(jī)制仍不明確[3]。

    免疫性調(diào)節(jié)因子(AIRE)是一種轉(zhuǎn)錄因子,由胸腺髓質(zhì)上皮細(xì)胞亞群產(chǎn)生,可以選擇性的對(duì)自我耐受的T細(xì)胞受體表現(xiàn)出極高的親和性并促使后者進(jìn)入凋亡,避免了自身免疫的發(fā)生[4]。大量動(dòng)物實(shí)驗(yàn)揭示出AIRE突變對(duì)獲得性免疫缺陷綜合征(AIDs)的易感性之間的聯(lián)系,AIRE基因敲除小鼠與野生型小鼠比較對(duì)包括MG在內(nèi)的多種AIDs易感[5],表明AIRE表達(dá)對(duì)于AIDs發(fā)病起到關(guān)鍵作用。本研究擬對(duì)比AIRE在不同MG患者間的表達(dá),試圖分析AIRE的表達(dá)與患者基本情況、病情嚴(yán)重程度及Tfh細(xì)胞、Tfr細(xì)胞之間的關(guān)系,為進(jìn)一步研究MG發(fā)病機(jī)制提供思路。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料

    收集2016年1月~2017年1月就診于空軍軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院門診的MG患者,對(duì)患者進(jìn)行臨床QMG評(píng)分及絕對(duì)評(píng)分并收集外周血標(biāo)本,共入組患者30例,根據(jù)Osserman分型分為全身型MG(GMG組)患者16例,眼肌型MG(OMG組)患者14例;同期選取健康對(duì)照組10例。所得數(shù)據(jù)中男24例,女16例,發(fā)病年齡20~66歲,平均(42.08±14.20)歲。各組年齡、性別比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05);MG組患者中臨床QMG評(píng)分3~27分,平均(10.97±6.28)分;絕對(duì)評(píng)分2~31分,平均(13.47±6.42)分。本研究通過醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)的批準(zhǔn),受試者知情同意并簽署知情同意書。

    參考中國MG診斷和治療指南(2015年版)制定入組標(biāo)準(zhǔn):①骨骼肌易疲勞,表現(xiàn)為波動(dòng)性及易疲勞性;呈晨輕暮重。②新斯的明試驗(yàn)陽性。③肌電圖低頻刺激波幅遞減10%以上。排除標(biāo)準(zhǔn):①3個(gè)月內(nèi)曾接受免疫抑制劑治療;②3個(gè)月內(nèi)曾接受免疫球蛋白或血漿置換治療;③合并其他AIDs。

    1.2 方法

    1.2.1 臨床QMG評(píng)分及絕對(duì)評(píng)分 定量MG評(píng)分量表由1983年提出,后由Tindall等[6]進(jìn)行修正并擴(kuò)展至13個(gè)項(xiàng)目,美國重癥肌無力協(xié)會(huì)推薦QMG評(píng)分用于所有與MG相關(guān)的臨床研究,總分0~39分;臨床絕對(duì)評(píng)分由我國專家于1997年提出并應(yīng)用臨床,被國內(nèi)MG治療的專家共識(shí)及治療指南收錄,總分0~60分,分?jǐn)?shù)越高提示MG病情越重。

    1.2.2 采用密度離心法分離外周血PBMCs 將3 mL血樣本與等量1640培養(yǎng)基(HyClone公司)充分混和,加入人外周血淋巴細(xì)胞分離液3 mL,使用離心機(jī)(貝克曼Allegra X-22R)在4℃下2000 r/m離心20 min;離心后吸出云霧層,即PBMCs層,加入5倍體積RMPI-1640溶液重懸洗滌細(xì)胞2次,保留黏附在離心管底部的PBMCs。將待測細(xì)胞加入抗人CD4抗體(Biolegend公司)和抗人CXCR5抗體(Biolegend公司)與細(xì)胞懸液充分混勻,避光孵育30 min;洗滌細(xì)胞2次后保留黏附在離心管底部的細(xì)胞。避光情況下加入1 mL固定/破膜液(Miltenyi公司)重懸,避光30 min進(jìn)行細(xì)胞破膜,洗滌并重懸細(xì)胞后加入抗人AIRE抗體(Miltenyi公司)和抗鼠/人Foxp3抗體(Biolegend公司)避光孵育30 min;避光加入2%多聚甲醛500 μL固定細(xì)胞。采用FACS Calibur流式細(xì)胞分析儀(BD公司),進(jìn)行流式分析。需要分析:AIRE陽性細(xì)胞占比,CD4+CXCR5+Foxp3+Tfr細(xì)胞占比,CD4+CXCR5+Foxp3-Tfh細(xì)胞占比。

    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn);采用相關(guān)檢驗(yàn)Spearman檢驗(yàn),以P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同組間AIRE表達(dá)的差異

    流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果示意圖見圖1A。三組AIRE陽性表達(dá)率比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=10.571,P < 0.01);AIRE因子陽性表達(dá)率GMG組[(76.25±12.73)%]較OMG組[(84.30±6.13)%]和對(duì)照組[(89.98±3.56)%]明顯下降,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P < 0.001),而AIRE表達(dá)在OMG組和對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P > 0.05)(圖1B)。

    2.2 AIRE表達(dá)與Tfr細(xì)胞、Tfh細(xì)胞的相關(guān)性分析

    細(xì)胞流式結(jié)果顯示Tfr細(xì)胞、Tfh細(xì)胞及兩者的比值見表1,AIRE因子陽性表達(dá)與Tfr/Tfh比值呈正相關(guān)(r=0.605,P < 0.001),見圖2。

    2.3 AIRE表達(dá)與病情嚴(yán)重程度、年齡、性別等相關(guān)性分析

    所有30例MG患者AIRE因子陽性表達(dá)與QMG評(píng)分[(10.97±6.28)分]及絕對(duì)評(píng)分[(13.47±6.42)分]均呈負(fù)相關(guān)(r=-0.622,P < 0.001;r=-0.513,P=0.004)(圖2A、B)。為了排除干擾因素,進(jìn)行了AIRE因子陽性表達(dá)與年齡之間相關(guān)性分析,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(r=-0.004,P=0.983)(圖2C)。比較不同性別間的AIRE因子陽性表達(dá)[男性(82.37±11.26)%,女性(82.69±9.76)%],差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.093,P=0.926)(圖2D)。

    3 討論

    AIRE主要存在于胸腺髓質(zhì)上皮細(xì)胞,屬于陰性選擇系統(tǒng),作為促凋亡因子,對(duì)存在自身抗原-抗體表現(xiàn)的T細(xì)胞加快其凋亡,從而阻止自反應(yīng)克隆的逃逸,在免疫耐受過程中發(fā)揮重要作用[7-8],而AIRE在外周血的作用主要是參與對(duì)抗原的識(shí)別,并通過對(duì)抗原進(jìn)行修飾及遞呈維護(hù)免疫系統(tǒng)的相對(duì)穩(wěn)定[9]。結(jié)合本實(shí)驗(yàn)結(jié)果,GMG組的AIRE表達(dá)明顯低于OMG組和對(duì)照組,而OMG組與對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,OMG患者因僅累計(jì)眼外肌群,其病情嚴(yán)重程度較GMG患者明顯減輕,并且AIRE在排除干擾因素后與MG患者病情嚴(yán)重程度呈負(fù)相關(guān),提示AIRE的下降與MG發(fā)病有一定的聯(lián)系,低水平AIRE在誘導(dǎo)MG發(fā)病的過程中可能起關(guān)鍵作用。

    本研究發(fā)現(xiàn)AIRE因子陽性表達(dá)與Tfr/Tfh比值呈正相關(guān)。目前研究認(rèn)為,MG發(fā)病機(jī)制與異常免疫應(yīng)答相關(guān),并且體液免疫在MG發(fā)病、發(fā)展過程中起了十分重要的作用,B細(xì)胞的失調(diào)及分泌的抗體可能直接或間接導(dǎo)致了MG發(fā)病,但其具體的機(jī)制還不明[10]。Tfh細(xì)胞是輔助B細(xì)胞的重要細(xì)胞群,可通過相應(yīng)的受體與B細(xì)胞牢固結(jié)合[11],在促使B細(xì)胞增殖、分化等重要轉(zhuǎn)變過程中起到十分重要的作用[12]。同時(shí),Tfh細(xì)胞通過分泌IL-21協(xié)助B細(xì)胞的成熟過程,并產(chǎn)生大量的抗體[13]。Tfh細(xì)胞可通過細(xì)胞因子遷徙至外周組織而發(fā)揮作用,并不斷通過級(jí)聯(lián)反應(yīng)增強(qiáng)B細(xì)胞的遷徙及過度強(qiáng)化,從而加強(qiáng)異常免疫反應(yīng)[14]。同樣動(dòng)物研究發(fā)現(xiàn),如果對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠進(jìn)行免疫耐受使B細(xì)胞缺失,或阻斷抗原呈遞的過程,即便小鼠體內(nèi)存在大量自反應(yīng)細(xì)胞,Tfh細(xì)胞占比仍不上升[15]??梢夿細(xì)胞與Tfh細(xì)胞之間可能存在重要調(diào)控機(jī)制,這一過程可能有AIRE的調(diào)控作用[16]。

    Tfr細(xì)胞是Treg細(xì)胞的特殊亞群,對(duì)Tfh細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞活化產(chǎn)生拮抗作用[17],進(jìn)一步抵制抗體的產(chǎn)生[18]。Tfr細(xì)胞具有調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及Tfh細(xì)胞的雙重特征[19],可通過直接或間接作用與B細(xì)胞發(fā)生關(guān)聯(lián),在Tfr細(xì)胞數(shù)量下降或功能降低時(shí),Tfh細(xì)胞表達(dá)可上調(diào),并使B細(xì)胞的數(shù)量上升??梢姡琓fr細(xì)胞可限制Tfh細(xì)胞對(duì)免疫調(diào)節(jié)的部分功能,從而避免B細(xì)胞過度表達(dá)、增殖及遷徙,保持細(xì)胞免疫的平衡。任何異?;驘o序Tfr/Tfh比值,都會(huì)破壞這種平衡,導(dǎo)致免疫功能紊亂,使B細(xì)胞產(chǎn)生過度的抗體,其結(jié)果是MG的發(fā)病、發(fā)展。

    AIRE對(duì)MG發(fā)病的影響機(jī)制可能較多,但主要機(jī)制是在對(duì)自反應(yīng)細(xì)胞的清除,在維持免疫系統(tǒng)穩(wěn)定的管理上[20]。AIRE和Tfh、Tfr細(xì)胞之間可能存在相互作用的機(jī)制,使T細(xì)胞及B細(xì)胞功能相繼出現(xiàn)紊亂,逐漸形成惡性循環(huán),進(jìn)一步促使免疫功能發(fā)生紊亂,從而引起MG發(fā)病。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] Wolfe GI,Kaminski HJ,Aban IB,et al. Randomized Trial of Thymectomy in Myasthenia Gravis [J]. Med,2016,375(6):511-522.

    [2] Richards J,Howard JF. Seronegative myasthenia gravis associated with malignant thymoma [J]. Neuromuscul Disord,2017,27(5):417-418.

    [3] 汪杰,李宏增,李川,等.重癥肌無力患者的免疫指標(biāo)與臨床療效分析[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2016,16(31):6162-6191.

    [4] 閆斌,朱明振,李衛(wèi)君,等.自身免疫調(diào)節(jié)因子在重癥肌無力患者胸腺內(nèi)的表達(dá)及作用分析[J].中風(fēng)與神經(jīng)疾病雜志,2017,34(10):913-915.

    [5] Berrih-Aknin S. Myasthenia Gravis:Paradox versus paradigm in autoimmunity [J]. J Autoimmun,2014,52:1-28.

    [6] Tindall RS,Rollins JA. Preliminary results of a double-blind, randomized,placebocontrolled trial of cyclosporine in myasthenia gravis [J]. N Engl J Med,1987,316(12):719-724.

    [7] Zhang X,Ding XJ,Wang Q,et al. polymorphism in autoimmune regulator(AIRE) gene is associated with susceptibility of myasthenia gravis in Chinese patients [J]. Clin Neu?鄄rosci,2017,40(6):180-184.

    [8] Pezzi N,Assis AF,Cotrim-Sousa LC,et al. Aire knockdown in medullary thymic epithelial cells affects Aire protein,deregulates cell adhesion genes and decreases thymocyte interaction [J]. Molecular Immunol,2016,77:157-173.

    [9] Perniola R,Musco G. The biophysical and biochemical properties of the autoimmune regulator (AIRE) protein [J]. Biochim Biophys Act,2014,1842(2):326-337.

    [10] Guptill JT,Yi JS,Sanders DB,et al. Characterization of B cells in muscle-specific kinase antibody myasthenia gravis [J]. Neurol Neuroimmunol Neuroinflamm,2015, 26,2(2):e77.

    [11] Li D,Li H,F(xiàn)u H,et al. Aire-Overexpressing Dendritic Cells Induce Peripheral CD4+ T Cell Tolerance [J]. Int J Molecul Sci,2016,17(1):38.

    [12] Zhu J,Paul WE. Heterogeneity and plasticity of T helper cells [J]. Cell Res,2010,20(1):4-12.

    [13] 金伯泉.T-B細(xì)胞協(xié)作研究的重大突破——濾泡輔助性T細(xì)胞的發(fā)現(xiàn),一個(gè)新的CD4+效應(yīng)T細(xì)胞亞群[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志,2009,25:1-5.

    [14] Zhu Y,Zou L Liu Y. T follicular helper cells,T follicular regulatory cells and autoimmunity [J]. Int Immunol,2016, 28(4):173-179.

    [15] Poholek AC,Hansen K,Hernandez SG,et al. In vivo regulation of Bcl6 and T follicular helper cell development [J]. J Immunol,2010,185:313-326.

    [16] Deenick EK,Ma CS,Brink R,et al. Regulat ion of T follicular helper cell formation and function by antigen presenting cells [J]. Curr Opin Immunol,2011,23(1):111-118.

    [17] Lin J,Yang L,Silva HM,et al. Increased generation of Foxp3 (+) regulatory T cells by manipulating antigen pre?鄄sentation in the thymus [J]. Nat Commun,2016,7:10562.

    [18] Malchow S,Leventhal DS,Lee V,et al. Aire Enforces Immune Tolerance by Directing Autoreactive T Cells into the Regulatory T Cell Lineage [J]. Immunity,2016,44(5):1102-1113.

    [19] Sage PTT,Sharpe AH. T follicular regulatory cells [J]. Immunol Rev,2016,271(1):246-259.

    [20] Abramson J,Husebye ES. Autoimmune regulator and self-tolerance-molecular and clinical aspects [J]. Immunol Rev,2016,271(1):127-140.

    (收稿日期:2018-02-01 本文編輯:任 念)

    猜你喜歡
    重癥肌無力
    徐明漣教授運(yùn)用治痿湯加減辨治重癥肌無力驗(yàn)案
    單纖維肌電圖在重癥肌無力診斷預(yù)后評(píng)估中價(jià)值
    重癥肌無力患者護(hù)理中安全護(hù)理的臨床價(jià)值
    機(jī)械通氣在胸腺瘤術(shù)后肌無力危象中的應(yīng)用
    胸腔鏡下手術(shù)治療胸腺瘤合并重癥肌無力療效
    1例重癥肌無力合并咳嗽變異性哮喘及肺部感染患者的用藥分析
    血漿置換在重癥肌無力患者治療中的應(yīng)用效果分析
    11例重癥肌無力患者的臨床研究分析
    IA治療全身型重癥肌無力的臨床研究
    規(guī)范化護(hù)理干預(yù)在重癥肌無力患者中的臨床價(jià)值
    搡女人真爽免费视频火全软件| 免费黄色在线免费观看| 国产在线一区二区三区精 | 天堂中文最新版在线下载 | 少妇的逼水好多| 欧美区成人在线视频| 精品人妻视频免费看| 亚洲欧洲日产国产| 欧美色视频一区免费| 中文字幕亚洲精品专区| 少妇高潮的动态图| 亚洲精品日韩av片在线观看| 午夜亚洲福利在线播放| 免费看av在线观看网站| 亚洲在久久综合| 日韩一本色道免费dvd| 国产成年人精品一区二区| 一区二区三区四区激情视频| 午夜激情福利司机影院| 国产在线男女| 国产三级中文精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 又爽又黄a免费视频| 久久久久国产网址| 国产三级在线视频| 久久综合国产亚洲精品| 国产69精品久久久久777片| av专区在线播放| 免费观看在线日韩| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 欧美日韩国产亚洲二区| 国产一区二区三区av在线| 综合色av麻豆| 国产成人aa在线观看| 精品久久久噜噜| 国产老妇女一区| 日韩精品有码人妻一区| 欧美成人a在线观看| 如何舔出高潮| 看免费成人av毛片| 免费播放大片免费观看视频在线观看 | av卡一久久| 嘟嘟电影网在线观看| 日韩在线高清观看一区二区三区| 欧美日本亚洲视频在线播放| 欧美一区二区亚洲| 91精品国产九色| 91精品一卡2卡3卡4卡| 欧美一区二区精品小视频在线| 爱豆传媒免费全集在线观看| 精品一区二区三区视频在线| 国产一区有黄有色的免费视频 | 日本一二三区视频观看| 卡戴珊不雅视频在线播放| 亚洲成人久久爱视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 日韩视频在线欧美| 女人久久www免费人成看片 | 岛国在线免费视频观看| 国产91av在线免费观看| 一个人看的www免费观看视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| videossex国产| 成人亚洲精品av一区二区| 天天一区二区日本电影三级| 成人三级黄色视频| 精品久久久久久久末码| 日本一本二区三区精品| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美一区二区亚洲| 欧美成人午夜免费资源| 九九在线视频观看精品| 又粗又硬又长又爽又黄的视频| 在现免费观看毛片| 国产伦精品一区二区三区四那| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 国产精品精品国产色婷婷| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 中文字幕av成人在线电影| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 能在线免费观看的黄片| 欧美变态另类bdsm刘玥| 亚洲精品亚洲一区二区| 搡老妇女老女人老熟妇| 色尼玛亚洲综合影院| 国产精品1区2区在线观看.| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜精品在线福利| 久久久久久久久中文| 午夜日本视频在线| 听说在线观看完整版免费高清| 成人av在线播放网站| 成人欧美大片| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 日韩一区二区三区影片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 精品无人区乱码1区二区| 尾随美女入室| 亚洲成人中文字幕在线播放| 性色avwww在线观看| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 午夜日本视频在线| 免费大片18禁| 亚洲国产精品国产精品| 日韩欧美 国产精品| 国产一区二区在线av高清观看| 最近2019中文字幕mv第一页| 日本熟妇午夜| 国产私拍福利视频在线观看| 乱系列少妇在线播放| 欧美高清成人免费视频www| 村上凉子中文字幕在线| 日日摸夜夜添夜夜爱| 久久精品国产亚洲av天美| av福利片在线观看| 久久人人爽人人爽人人片va| 亚洲精品456在线播放app| 成年版毛片免费区| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 99热这里只有是精品在线观看| 内射极品少妇av片p| 国产精品福利在线免费观看| 一区二区三区免费毛片| 人人妻人人看人人澡| 亚洲国产精品sss在线观看| 69av精品久久久久久| 国产在线一区二区三区精 | 69av精品久久久久久| 又爽又黄a免费视频| av在线蜜桃| 欧美性猛交黑人性爽| 嘟嘟电影网在线观看| 亚洲成人av在线免费| 黑人高潮一二区| 亚洲成人久久爱视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 亚洲精品乱久久久久久| 国产69精品久久久久777片| 网址你懂的国产日韩在线| 免费电影在线观看免费观看| 国产麻豆成人av免费视频| 国产伦理片在线播放av一区| 七月丁香在线播放| 国产成人aa在线观看| 搞女人的毛片| 亚洲av成人av| 99久久人妻综合| 日本-黄色视频高清免费观看| 亚洲国产欧美人成| 高清毛片免费看| 人妻夜夜爽99麻豆av| 99九九线精品视频在线观看视频| 久久人妻av系列| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本免费a在线| 色尼玛亚洲综合影院| 两个人的视频大全免费| 天美传媒精品一区二区| 联通29元200g的流量卡| 国产 一区精品| 久久午夜福利片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 亚洲精品,欧美精品| 成人午夜高清在线视频| 啦啦啦韩国在线观看视频| 欧美日韩在线观看h| av国产久精品久网站免费入址| 亚洲在线观看片| 日本五十路高清| 免费搜索国产男女视频| 成人午夜精彩视频在线观看| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 国产片特级美女逼逼视频| 尾随美女入室| 国产高清视频在线观看网站| 免费在线观看成人毛片| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久久久久大精品| 午夜久久久久精精品| 嫩草影院新地址| 国产精品伦人一区二区| 国内精品美女久久久久久| 久久久精品94久久精品| 能在线免费观看的黄片| 国产精品永久免费网站| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 欧美最新免费一区二区三区| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 婷婷六月久久综合丁香| 国产精品三级大全| 国产精华一区二区三区| 中文在线观看免费www的网站| 99久久九九国产精品国产免费| av国产免费在线观看| 最近中文字幕高清免费大全6| 久久久久性生活片| a级一级毛片免费在线观看| 午夜福利网站1000一区二区三区| 免费电影在线观看免费观看| 97热精品久久久久久| 尤物成人国产欧美一区二区三区| .国产精品久久| 免费av毛片视频| 久久久午夜欧美精品| 国产乱人偷精品视频| 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 亚洲美女搞黄在线观看| 亚洲在线观看片| 熟女人妻精品中文字幕| 中国美白少妇内射xxxbb| 国产精品福利在线免费观看| 精品免费久久久久久久清纯| 国产亚洲av片在线观看秒播厂 | 少妇人妻一区二区三区视频| 国产免费视频播放在线视频 | 99视频精品全部免费 在线| av又黄又爽大尺度在线免费看 | 亚洲成色77777| 高清av免费在线| a级毛色黄片| 国产成人freesex在线| 七月丁香在线播放| 亚洲欧美一区二区三区国产| 国产探花极品一区二区| 国产国拍精品亚洲av在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 99热网站在线观看| 久久久久性生活片| 高清午夜精品一区二区三区| 在线观看美女被高潮喷水网站| 国产大屁股一区二区在线视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 亚洲国产最新在线播放| 国产午夜精品论理片| 99久久精品热视频| 超碰97精品在线观看| 欧美日韩综合久久久久久| 欧美一区二区国产精品久久精品| 亚洲图色成人| 中文欧美无线码| 一级毛片我不卡| 亚洲成av人片在线播放无| 国产不卡一卡二| 国产人妻一区二区三区在| 欧美激情久久久久久爽电影| 嫩草影院精品99| 国产精品永久免费网站| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲va在线va天堂va国产| 尾随美女入室| 精品久久久久久久久av| 中文在线观看免费www的网站| 国产三级中文精品| 免费观看的影片在线观看| 欧美日本视频| 久久人人爽人人爽人人片va| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲精品自拍成人| 亚洲四区av| 免费看光身美女| 亚洲国产精品国产精品| 日本与韩国留学比较| 男人的好看免费观看在线视频| 亚洲欧美成人精品一区二区| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品永久免费网站| 精品久久久久久久久亚洲| 男人的好看免费观看在线视频| 色播亚洲综合网| 精品人妻视频免费看| 日韩成人av中文字幕在线观看| 18禁在线播放成人免费| 禁无遮挡网站| 日韩视频在线欧美| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲av成人精品一二三区| 69av精品久久久久久| 99久久成人亚洲精品观看| 亚洲性久久影院| 亚洲国产欧美在线一区| 国产精品一区www在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 高清视频免费观看一区二区 | 国产精品一区www在线观看| 在线观看一区二区三区| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 纵有疾风起免费观看全集完整版 | 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 久久99蜜桃精品久久| 精品国产露脸久久av麻豆 | 亚洲在久久综合| 在线播放无遮挡| 成人一区二区视频在线观看| 真实男女啪啪啪动态图| 久久久国产成人精品二区| 午夜激情欧美在线| 国内精品宾馆在线| 男女视频在线观看网站免费| 综合色丁香网| 中文精品一卡2卡3卡4更新| 欧美bdsm另类| 日本与韩国留学比较| 99视频精品全部免费 在线| 观看免费一级毛片| 超碰97精品在线观看| 亚洲av免费高清在线观看| 久久久久久大精品| 日本五十路高清| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品麻豆人妻色哟哟久久 | 中文字幕熟女人妻在线| 精品一区二区三区人妻视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 午夜亚洲福利在线播放| 久久精品人妻少妇| 久久久欧美国产精品| 免费在线观看成人毛片| 长腿黑丝高跟| 国产精品日韩av在线免费观看| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| ponron亚洲| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲无线观看免费| 一边亲一边摸免费视频| 久久精品国产亚洲av天美| 亚洲精品乱码久久久久久按摩| 嫩草影院入口| 久久久久久久久久成人| 床上黄色一级片| 亚洲精品一区蜜桃| 国产 一区精品| 亚洲国产色片| 色网站视频免费| 欧美一区二区亚洲| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品 | 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 免费电影在线观看免费观看| 国产单亲对白刺激| 中文字幕av成人在线电影| 丰满少妇做爰视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产视频首页在线观看| 久久久久久久亚洲中文字幕| 看非洲黑人一级黄片| 韩国av在线不卡| 欧美三级亚洲精品| 精品久久久久久久久av| 亚洲国产成人一精品久久久| 国产亚洲5aaaaa淫片| 日本色播在线视频| 麻豆乱淫一区二区| 身体一侧抽搐| 午夜免费激情av| 国内精品一区二区在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 中文在线观看免费www的网站| 久久久亚洲精品成人影院| 搡老妇女老女人老熟妇| 美女内射精品一级片tv| 国产精品永久免费网站| 亚洲av不卡在线观看| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 亚洲成人中文字幕在线播放| 美女内射精品一级片tv| 欧美潮喷喷水| 国产一区二区三区av在线| 国产精华一区二区三区| 久久亚洲国产成人精品v| 色综合亚洲欧美另类图片| 日韩亚洲欧美综合| 亚洲在久久综合| 97超视频在线观看视频| 日韩一区二区三区影片| 老司机影院毛片| 成人特级av手机在线观看| 亚洲美女搞黄在线观看| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 毛片女人毛片| 大话2 男鬼变身卡| videos熟女内射| 国产极品精品免费视频能看的| 永久免费av网站大全| 黑人高潮一二区| 一本一本综合久久| 中国美白少妇内射xxxbb| 美女国产视频在线观看| 免费在线观看成人毛片| 久久鲁丝午夜福利片| 日韩制服骚丝袜av| 一级毛片我不卡| 中文字幕久久专区| 精华霜和精华液先用哪个| 2021少妇久久久久久久久久久| 欧美日本视频| 日韩大片免费观看网站 | 国产色爽女视频免费观看| 亚洲精品,欧美精品| 97热精品久久久久久| 在线播放无遮挡| 99久久中文字幕三级久久日本| 韩国av在线不卡| 日本免费在线观看一区| 一级毛片久久久久久久久女| 成人综合一区亚洲| 日本wwww免费看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 婷婷色麻豆天堂久久 | 婷婷六月久久综合丁香| videos熟女内射| 哪个播放器可以免费观看大片| 男人的好看免费观看在线视频| 不卡视频在线观看欧美| 综合色av麻豆| 人人妻人人看人人澡| 中文字幕熟女人妻在线| 久久久久国产网址| 一区二区三区乱码不卡18| 成年女人看的毛片在线观看| 午夜爱爱视频在线播放| 又粗又爽又猛毛片免费看| 麻豆乱淫一区二区| 久久精品国产自在天天线| 久久久久久久久久久丰满| 免费电影在线观看免费观看| 美女被艹到高潮喷水动态| 久久久精品94久久精品| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 午夜福利在线观看免费完整高清在| 亚洲欧美日韩高清专用| 亚洲精品,欧美精品| 亚洲国产成人一精品久久久| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 插阴视频在线观看视频| 国产高潮美女av| 午夜激情福利司机影院| 91av网一区二区| 日本三级黄在线观看| 我的女老师完整版在线观看| 国产淫语在线视频| 偷拍熟女少妇极品色| 久久久久国产网址| 禁无遮挡网站| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | 99热这里只有是精品50| 一级毛片电影观看 | 国国产精品蜜臀av免费| 日本熟妇午夜| 国产在视频线精品| 亚洲欧美清纯卡通| 久久精品91蜜桃| 简卡轻食公司| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 内地一区二区视频在线| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 97超碰精品成人国产| 日日干狠狠操夜夜爽| 一级黄色大片毛片| 最近2019中文字幕mv第一页| 美女大奶头视频| 久久久久久久久久久丰满| 长腿黑丝高跟| 欧美人与善性xxx| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 亚洲精品aⅴ在线观看| 99热全是精品| 久久亚洲精品不卡| 久久久精品大字幕| 一级毛片久久久久久久久女| 最近中文字幕2019免费版| 国产真实乱freesex| 91aial.com中文字幕在线观看| 99久久人妻综合| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 欧美人与善性xxx| 日韩欧美精品免费久久| 22中文网久久字幕| 国产单亲对白刺激| 日韩欧美三级三区| 尾随美女入室| 午夜老司机福利剧场| 一区二区三区高清视频在线| 久久久国产成人精品二区| 久久久久久久久大av| 久久这里有精品视频免费| 我要搜黄色片| 国产av码专区亚洲av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产不卡一卡二| 国产色婷婷99| 精品免费久久久久久久清纯| 亚洲欧美精品自产自拍| 青春草国产在线视频| 婷婷六月久久综合丁香| 麻豆一二三区av精品| 99国产精品一区二区蜜桃av| 我的老师免费观看完整版| 青春草国产在线视频| 精品一区二区免费观看| a级一级毛片免费在线观看| 天美传媒精品一区二区| 高清午夜精品一区二区三区| 人体艺术视频欧美日本| 天天躁日日操中文字幕| 精品熟女少妇av免费看| 建设人人有责人人尽责人人享有的 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 国产黄片美女视频| 午夜老司机福利剧场| 最近中文字幕2019免费版| 丰满少妇做爰视频| 欧美潮喷喷水| 人妻夜夜爽99麻豆av| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 成年版毛片免费区| 日本av手机在线免费观看| 亚洲欧美成人精品一区二区| 成人特级av手机在线观看| 国产成人精品一,二区| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产乱人偷精品视频| 国产成人免费观看mmmm| 亚洲精品一区蜜桃| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美成人午夜免费资源| 久久精品久久久久久噜噜老黄 | 国内精品美女久久久久久| 一本一本综合久久| av在线蜜桃| 国产精品嫩草影院av在线观看| 国产极品精品免费视频能看的| 毛片女人毛片| 国产精品一区二区性色av| 国产精品嫩草影院av在线观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产极品天堂在线| 中文字幕人妻熟人妻熟丝袜美| a级毛片免费高清观看在线播放| 亚洲色图av天堂| 狂野欧美白嫩少妇大欣赏| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 午夜视频国产福利| 美女内射精品一级片tv| 国产亚洲5aaaaa淫片| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 99九九线精品视频在线观看视频| 亚洲国产高清在线一区二区三| 成人二区视频| 亚洲av福利一区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 国内精品宾馆在线| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 中文字幕av成人在线电影| 国产在线一区二区三区精 | 国产日韩欧美在线精品| 嫩草影院新地址| 欧美一区二区精品小视频在线| 国产久久久一区二区三区| 国国产精品蜜臀av免费| 在线a可以看的网站| 麻豆乱淫一区二区| 国产欧美另类精品又又久久亚洲欧美| 久久鲁丝午夜福利片| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 变态另类丝袜制服| 女人久久www免费人成看片 | 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 91精品一卡2卡3卡4卡| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 欧美日本亚洲视频在线播放| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 99久久无色码亚洲精品果冻| 日本五十路高清| 久久久精品大字幕| 色播亚洲综合网| 汤姆久久久久久久影院中文字幕 | av在线亚洲专区| 国产老妇伦熟女老妇高清| 日韩精品有码人妻一区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产在视频线精品| 少妇被粗大猛烈的视频| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 国产在视频线精品| 国产一区二区在线观看日韩| 国产又色又爽无遮挡免| 日本一二三区视频观看| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 成人午夜精彩视频在线观看| 一边摸一边抽搐一进一小说| 欧美日本亚洲视频在线播放| 99热精品在线国产| 亚洲精品影视一区二区三区av| 免费看a级黄色片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国模一区二区三区四区视频| 久久99蜜桃精品久久| 国产欧美日韩精品一区二区| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| www日本黄色视频网| 国产在线男女| 日本欧美国产在线视频| 亚洲欧洲国产日韩|