Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白的性能驗(yàn)證

陶明俊 郎家慶 曹科 劉新剛 李飛 李嘉輝 陳運(yùn)生 馬東禮

【摘要】 目的：驗(yàn)證國(guó)賽Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）的性能。方法：對(duì)Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定hs-CRP的精密度、準(zhǔn)確度、線性、攜帶污染率等性能指標(biāo)進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果：批內(nèi)精密度為3.64%、2.46%、2.33%，批間精密度為9.67%、4.95%，均符合廠家要求；準(zhǔn)確度與廠家校準(zhǔn)品的偏倚4.47%，與國(guó)際參考品的偏倚-2.72%，均符合偏倚≤5%的要求；血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L。攜帶污染率為0.48%，符合≤1%的要求；20份全血標(biāo)本中，80%（16/20）偏倚≤12.5%，符合實(shí)驗(yàn)要求。結(jié)論：Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定hs-CRP的各項(xiàng)性能指標(biāo)均能達(dá)到廠家聲明的性能，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，符合臨床質(zhì)量要求，滿足實(shí)驗(yàn)室和臨床需要。

【關(guān)鍵詞】 超敏C反應(yīng)蛋白； 性能驗(yàn)證； 特定蛋白

【Abstract】 Objective：To verify the performance of the Guo Sai Astep Plus specific protein analyzer in the determination of high sensitivity C-reactive protein（hs-CRP）.Method：The precision，accuracy，linearity and carrying pollution rate and other performance indicators of hs-CRP were determined by Astep Plus specific protein analyzer.Result：The intra-assay precision was 3.64%，2.46%，2.33% and the inter-batch precision was 9.67% and 4.95%，which all met the requirements of the manufacturer.The bias compared with that of factory calibration and international reference was 4.47% and -2.72% respectively，which were all in accordance with the requirements of bias≤5%.The linear range was 1.6-320 mg/L in the serum mode while 0.5-225 mg/L in the whole blood mode.The carrying pollution rate was 0.48%，which meets the requirement of≤1%.Of the 20 whole blood samples，80%（16/20） bias≤12.5%，which met the requirements of the experiment.Conclusion：The performance indexes of hs-CRP by Astep Plus specific protein analyzer can achieve the performance declared by the manufacturer，the results are accurate，stable，meet the clinical quality requirements and meet the laboratory and clinical needs.

【Key words】 High sensitivity C-reactive protein； Performance verification； Specific protein

First-authors address：Shenzhen Childrens Hospital，Shenzhen 518026，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2018.11.032

隨著醫(yī)院的發(fā)展，患兒日益增多，為適應(yīng)日益增長(zhǎng)的標(biāo)本對(duì)檢測(cè)結(jié)果快速、準(zhǔn)確的要求，科室新近引進(jìn)了由深圳市國(guó)賽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的全自動(dòng)Astep Plus特定蛋白分析儀，采用散射比濁法檢測(cè)超敏C反應(yīng)蛋白（hs-CRP）。實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可的專用準(zhǔn)則-《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》中，要求申請(qǐng)認(rèn)可的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)設(shè)備、檢測(cè)系統(tǒng)或方法的主要分析性能進(jìn)行驗(yàn)證[1-2]，證實(shí)其技術(shù)性能指標(biāo)能否滿足臨床需要[3-4]。筆者查閱相關(guān)文獻(xiàn)和結(jié)合工作實(shí)際，制定了驗(yàn)證方案，對(duì)Astep Plus特定蛋白分析儀的hs-CRP的分析性能進(jìn)行驗(yàn)證，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 深圳市國(guó)賽生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的Astep Plus特定蛋白分析儀（散射比濁法）及配套試劑和校準(zhǔn)品（批號(hào)20180413）?？剖伊硇匈?gòu)買的伯樂CRP質(zhì)控品（批號(hào)66342）和國(guó)際參考品ERM-DA474（歐洲標(biāo)準(zhǔn)局網(wǎng)站購(gòu)買，批號(hào)6094）。對(duì)比儀器：深圳市國(guó)賽生物技術(shù)有限公司Nephstar plus特定蛋白分析儀（散射比濁法）及配套試劑（試劑批號(hào)0251170220）。

1.2 標(biāo)本來源 新鮮靜脈血標(biāo)本均來自深圳市兒童醫(yī)院門、急診患者。

1.3 質(zhì)量控制 實(shí)驗(yàn)前對(duì)各儀器進(jìn)行了維護(hù)、校準(zhǔn)，實(shí)驗(yàn)期間室內(nèi)質(zhì)控均在控。實(shí)驗(yàn)儀器空白值均合格。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 精密度 （1）批內(nèi)精密度：取高值、中值、低值3份濃度的新鮮全血樣本，每份樣本連續(xù)重復(fù)測(cè)定10次，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)（CV），判斷是否小于廠家規(guī)定（CV≤5%）的性能標(biāo)準(zhǔn)。（2）批間精密度：取中值、低值2個(gè)濃度的伯樂質(zhì)控血清，每天檢測(cè)1次，連續(xù)測(cè)定20 d，計(jì)算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和CV，判斷是否小于廠家規(guī)定（CV≤10%）的性能標(biāo)準(zhǔn)。

1.4.2 準(zhǔn)確度 （1）校準(zhǔn)品驗(yàn)證：采用廠家提供1個(gè)濃度校準(zhǔn)品（靶值160 mg/L），連續(xù)檢測(cè)5次，計(jì)算均值和偏倚，判斷是否小于廠家規(guī)定（偏倚≤5%）的性能標(biāo)準(zhǔn)。（2）參考品驗(yàn)證：采用國(guó)際參考品（靶值41.2 mg/L），連續(xù)檢測(cè)5次，計(jì)算均值和偏倚，判斷是否小于國(guó)際參考品規(guī)定（偏倚≤5%）的性能標(biāo)準(zhǔn)。

1.4.3 線性范圍 （1）血清線性范圍：取1份高值血清標(biāo)準(zhǔn)品（靶值為320 mg/L），將標(biāo)準(zhǔn)品與稀釋液按比例由低到高稀釋成6個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。將實(shí)測(cè)值與理論值作比較，計(jì)算y=bx+a，驗(yàn)證線性范圍。（2）全血線性范圍：取1份高值全血樣本H（盡量接近范圍上限），1份低值全血樣本L（檢測(cè)值約0.5 mg/L）。將高值和低值標(biāo)本按0∶1、1︰15、1∶7、1∶3、1∶1、1∶0的比例進(jìn)行混合，制備成6個(gè)濃度梯度的樣品，每個(gè)濃度標(biāo)本重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。將實(shí)測(cè)值與理論值作比較，計(jì)算y=bx+a，驗(yàn)證線性范圍。血清及全血線性范圍結(jié)果判斷：斜率b值為1±0.05，相關(guān)系數(shù)R≥0.975（或R2≥0.95）即線性符合要求。

1.4.4 攜帶污染率 取高值、低值全血標(biāo)本各1份依次測(cè)高值3次（H1、H2、H3）、低值3次（L1、L2、L3），計(jì)算攜帶污染率，攜帶污染率=|（L1-L3）|/（H3-L3）×100%。攜帶污染率<1%為可接受。

1.4.5 儀器間比較 選20份不同濃度的全血標(biāo)本，分別在Nephstar plus和Astep Plus儀器各檢測(cè)1次，以Nephstar plus儀器檢測(cè)結(jié)果為參考結(jié)果，以Astep Plus檢測(cè)結(jié)果為比對(duì)結(jié)果進(jìn)行偏倚統(tǒng)計(jì)，至少80%標(biāo)本偏倚應(yīng)≤12.5%。

2 結(jié)果

2.1 精密度 3份不同濃度全血標(biāo)本的批內(nèi)精密度分別為3.64%、2.46%、2.33%；2份質(zhì)控血清的批間精密度分別為9.67%、4.95%，均符合廠家要求，見表1、2。

2.2 準(zhǔn)確度 校準(zhǔn)品5次檢測(cè)結(jié)果分別為160.7、168.14、171.74、172.09、163.11 mg/L，計(jì)算得出偏倚4.47%；參考品結(jié)果39.14、40.18、41.47、39.65、39.95 mg/L，計(jì)算得出偏倚-2.72%。校準(zhǔn)品和參考品均符合偏倚應(yīng)≤5%的要求。

2.3 線性范圍 計(jì)算相關(guān)回歸方程，均符合線性要求，得出血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L，血清和全血模式線性檢測(cè)數(shù)據(jù)見表3、4，驗(yàn)證結(jié)果見圖1、2。

2.4 攜帶污染率 實(shí)驗(yàn)結(jié)果為H1 95.08 mg/L、H2 97.06 mg/L、H3 93.33 mg/L，L1 2.29 mg/L、L2 1.9 mg/L、L3 1.85 mg/L，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算得出攜帶污染率為0.48%，符合攜帶污染率≤1%的要求。

2.5 儀器間比較 經(jīng)比對(duì)，20份全血標(biāo)本中偏倚≤12.5%有16份，計(jì)算得出80%的標(biāo)本偏倚≤12.5%，符合實(shí)驗(yàn)要求，見表5。

3 討論

感染性疾病是一種臨床上常見的兒科疾病，具有多發(fā)性，其發(fā)病主要與細(xì)菌、病毒及支原體等有關(guān)[5]。C反應(yīng)蛋白是一種由腫瘤壞死因子、白細(xì)胞介素等炎性因子調(diào)節(jié)，并由肝細(xì)胞合成的非特異性急性時(shí)相反應(yīng)蛋白，hs-CRP是根據(jù)測(cè)定方法更敏感而命名。既往研究顯示，當(dāng)組織受到損傷、炎癥或感染時(shí)，C反應(yīng)蛋白可以在數(shù)小時(shí)內(nèi)急劇上升，并在2～3 d達(dá)峰值，待病情改善時(shí)逐漸下降，恢復(fù)正常[6-8]。C反應(yīng)蛋白被廣泛應(yīng)用于感染的診斷與鑒別診斷，是鑒別細(xì)菌或病毒感染的一個(gè)首選指標(biāo)，用于評(píng)估感染的嚴(yán)重程度、抗生素的療效監(jiān)測(cè)[9-11]，且C反應(yīng)蛋白與多種兒科感染性疾病相關(guān)，并在臨床上常與PCT等其他指標(biāo)共同應(yīng)用于疾病診斷[12-15]。C反應(yīng)蛋白與PCT聯(lián)合檢測(cè)常用于新生兒感染的診斷[16-20]。而全血C反應(yīng)蛋白的檢測(cè)快速、方便、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠、結(jié)果準(zhǔn)確可靠、創(chuàng)傷小，容易被患兒及家長(zhǎng)接受[21]。

從本研究驗(yàn)證結(jié)果看，Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定hs-CRP的批內(nèi)精密度和批間精密度均較好，完全符合廠家要求；準(zhǔn)確度驗(yàn)證結(jié)果顯示，與廠家校準(zhǔn)品的偏倚為4.47%，特別與國(guó)際參考品相比，偏倚仍然很低（僅-2.72%），說明此項(xiàng)目有很好的溯源性，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確；線性范圍的驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)顯示，血清模式線性范圍是1.6～320 mg/L，全血模式線性范圍是0.5～225 mg/L；攜帶污染率≤1%；儀器間比較發(fā)現(xiàn)20份全血標(biāo)本中偏倚≤12.5%有16份，計(jì)算得出80%的標(biāo)本偏倚≤12.5%，符合實(shí)驗(yàn)要求。相比于舊款的半自動(dòng)Nephstar Plus儀器，Astep Plus特定蛋白分析儀為全自動(dòng)，有血清和全血兩種模式可選，儀器自動(dòng)進(jìn)行結(jié)果換算，操作簡(jiǎn)單，檢測(cè)速度快（180測(cè)試/h），用血量少（儀器吸血量為13 μL），可使用靜脈全血管和0.5 mL EP管直接上機(jī)檢測(cè)，特別是直接使用0.5 mL EP管上機(jī)檢測(cè)時(shí)，標(biāo)本最少只需要17μL，特別適合兒科使用。

綜上所述，Astep Plus特定蛋白分析儀測(cè)定hs-CRP的各項(xiàng)指標(biāo)能達(dá)到廠家聲明的性能，結(jié)果準(zhǔn)確、穩(wěn)定，符合臨床質(zhì)量要求，滿足實(shí)驗(yàn)室和臨床需要。

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