宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級與宮頸癌患者HPV感染基因型的分布差異分析

張曉興 陳瑛瑛 王家建 朱凱

[摘要] 目的 探討宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級與宮頸癌患者人乳頭瘤病毒（HPV）感染基因型的分布差異。 方法 分別選取湖州市婦幼保健院2010年1月～2017年10月收治的260例宮頸癌和280例宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者并記為癌癥組和瘤變組，對其HPV感染情況進行檢測和分型鑒定，對比癌癥組和瘤變組HPV感染基因型的分布差異，并對比癌癥組中不同組織類型患者HPV感染基因型差異。 結(jié)果 癌癥組HPV感染陰性構(gòu)成比低于瘤變組（P<0.05），且單一感染所有高危型構(gòu)成比均明顯高于瘤變組（P<0.05），且單一感染所有低危型構(gòu)成比均與瘤變組相近（P>0.05），癌癥組多重感染構(gòu)成比明顯高于瘤變組（P<0.05）；宮頸鱗癌HPV感染陰性、單一感染18型構(gòu)成比遠低于宮頸腺癌（P<0.05），且宮頸鱗癌HPV單一感染16型、多重感染構(gòu)成比均遠高于宮頸腺癌（P<0.05）。 結(jié)論 在宮頸癌患者中HPV感染的風(fēng)險明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級，且宮頸癌HPV高危型的感染率較高，多重感染的風(fēng)險也較高，并且可以根據(jù)HPV分型判斷宮頸癌組織類型。

[關(guān)鍵詞] 宮頸上皮內(nèi)瘤變；宮頸癌；人乳頭瘤病毒；基因型

[中圖分類號] R737.3 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2018）14-0061-04

[Abstract] Objective To investigate the distribution differences of human papillomavirus（HPV） genotypes in the patients with cervical intraepithelial neoplasia grade Ⅱ/Ⅲ and the patients with cervical cancer. Methods 260 cases of cervical cancer and 280 cases of cervical intraepithelial neoplasia grade Ⅱ/Ⅲ patients who were admitted to our hospital from January 2010 to October 2017 were selected and divided into cancer group and neoplasia group respectively. The HPV infection of patients was detected and typing identification was performed. The distribution differences of HPV genotypes in cancer group and neoplasia group were compared. The differences of genotypes of HPV infection in different types of tissues in cancer group were also compared. Results The negative constituent ratio of HPV infection in cancer group was lower than that in neoplasia group（P<0.05）， and the constituent ratio of all the high-risk types in single infection was significantly higher than that in the neoplasia group（P<0.05）. The constituent ratio of all the low-risk types in single infection was significantly similar to that in the neoplasia group（P>0.05）. The constituent ratio of multiple infections in cancer group was significantly higher than that in neoplasia group（P<0.05）； the constituent ratios of negative HPV infections and 18 types of single infections in cervical squamous cell carcinoma was much lower than that of cervical adenocarcinoma（P<0.05）. The constituent ratios of 16 types of HPV and multiple infections in cervical squamous cell carcinoma were much higher than that of cervical adenocarcinoma（P<0.05）. Conclusion The risk of HPV infection in cervical cancer patients is significantly higher than that of cervical intraepithelial neoplasia grade Ⅱ/Ⅲ， the infection rate of cervical cancer high-risk type HPV is higher， and the risk of multiple infections is also higher. The tissue types of cervical cancer can be determined according to HPV typing.

[Key words] Cervical intraepithelial neoplasia； Cervical cancer； Human papillomavirus （HPV）； Genotypes

宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級是宮頸癌前病變狀態(tài)，與宮頸浸潤癌密切相關(guān)，包括宮頸不典型增生和原位癌，能夠反映宮頸癌發(fā)生時的連續(xù)發(fā)展過程[1]。宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌發(fā)生的高危因素均包括人乳頭瘤病毒（HPV）感染，給全世界女性的身心健康均造成嚴重的危害[2]。隨著醫(yī)療技術(shù)的發(fā)展和人們對HPV認識的不斷加深，越來越多的證據(jù)表明HPV高危型感染是宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌發(fā)生的獨立危險因素，且HPV疫苗的問世使得宮頸癌的預(yù)防成為可能[3-4]。但是目前關(guān)于宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌患者HPV感染基因型分布的差異問題仍需要進一步探討分析。鑒于此，本研究通過臨床試驗，旨在了解2種疾病并為臨床預(yù)防提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取醫(yī)院婦產(chǎn)科2010年1月～2017年10月收治的260例宮頸癌和280例宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者展開臨床研究，分別記為癌癥組和瘤變組。納入標(biāo)準(zhǔn)：均經(jīng)宮頸活檢或手術(shù)病理檢查證實病情，均對本研究知情且同意配合；排除標(biāo)準(zhǔn)：合并其他類型婦科疾病者，妊娠期或者哺乳期女性者，其他部位原發(fā)性惡性腫瘤繼發(fā)宮頸癌者，合并精神障礙者，有HPV疫苗接種史者，拒絕簽署同意書者。癌癥組260例患者中年齡區(qū)間為37～67歲，平均（51.4±8.2）歲，宮頸鱗癌215例、宮頸腺癌45例；瘤變組280例患者中年齡區(qū)間為35～63歲，平均（50.9±9.3）歲，Ⅱ級者154例、Ⅲ級者126例。組間平均年齡對比均未見統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05），具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集方法 借助透景保存液手機收集宮頸脫落細胞，將宮頸內(nèi)過多的分泌物利用滅菌干棉球擦去，然后采用細胞刷在宮頸管內(nèi)順時針旋轉(zhuǎn)2周，注意力度適中，避免過分用力導(dǎo)致宮頸出血。收集到的標(biāo)本需要過夜保存，保存條件為4℃的恒溫冰箱。

1.2.2 標(biāo)本HPV分型檢測方法 利用流式熒光雜交法對標(biāo)本HPV分型進行檢測。首先利用試劑盒提取核酸，然后實施擴增反應(yīng)，進行原位雜交并標(biāo)記熒光物質(zhì)，利用檢測以期測定熒光信號的強度，與標(biāo)準(zhǔn)分型檢測試紙比對，統(tǒng)計檢測結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo)

對比癌癥組和瘤變組HPV感染基因型的分布差異，并對比癌癥組中不同組織類型患者HPV感染基因型差異。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行分析，采用χ2檢驗，計數(shù)資料以%表示，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌癥組和瘤變組HPV感染基因型分布差異

癌癥組HPV感染陰性構(gòu)成比低于瘤變組（P<0.05），且單一感染所有高危型構(gòu)成比均明顯高于瘤變組（P<0.05），且單一感染所有低危型構(gòu)成比均與瘤變組相近（P>0.05），癌癥組多重感染構(gòu)成比明顯高于瘤變組（P<0.05）。見表1。

2.2 癌癥組不同組織類型HPV感染基因型分布差異

宮頸鱗癌HPV感染陰性、單一感染18型構(gòu)成比遠低于宮頸腺癌（P<0.05），且宮頸鱗癌HPV單一感染16型、多重感染構(gòu)成比均遠高于宮頸腺癌（P<0.05）。見表2。

3 討論

HPV屬于乳多空病毒科的一種乳頭瘤空泡病毒A屬，是一種球形的DNA病毒感染引起的性傳播現(xiàn)象[5]。常見的HPV類型包括1、2、6、11等100多種分型，其中HPV16和HPV18長期持續(xù)性感染極可能會增加女性宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌的風(fēng)險[6]。研究顯示[7-8]，HPV的抵抗力較強，能夠在干燥的環(huán)境中長期生存，經(jīng)過福爾馬林或者加熱處理后可以滅活。大多數(shù)女性在一生中均會感染1次甚至數(shù)次HPV，但是大部分女性在感染HPV后機體能夠?qū)⑵湎麥?，很難長期持續(xù)在機體中增殖和生長，但是也有部分感染者難以抵抗HPV，導(dǎo)致其長期存在并可能會產(chǎn)生極大的危害[9-10]。HPV分型較多，不同分型感染對宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌的意義不同，因此探討不同疾病患者HPV感染分型情況有助于早期鑒別病情，還可為臨床治療提供指導(dǎo)。

本研究發(fā)現(xiàn)，癌癥組HPV感染陰性構(gòu)成比低于瘤變組（P<0.05），且單一感染所有高危型和多重感染構(gòu)成比均明顯高于瘤變組（P<0.05），可知在宮頸癌患者中HPV高危性感染和多重感染的風(fēng)險明顯高于宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者。HPV16和HPV18是宮頸癌患者中常見的HPV分型，此外，HPV52感染也是宮頸癌發(fā)生的重要危險因素。研究認為[11-13]，HPV16、18感染后病毒對酸性環(huán)境的耐受能力更強，生存能力相較于其他分型來講也更強，因而更容易在機體中長時間存在，因而很難徹底殺滅HPV。而上述現(xiàn)象使得HPV對機體宮頸上皮細胞造成的傷害隨著時間的延長不斷加重，最終誘發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌[14-15]。另有國內(nèi)外研究資料證實[16-17]，HPV感染是宮頸癌發(fā)生和發(fā)展的重要基礎(chǔ)，以HPV16和HPV18為代表的高危型HPV感染對全世界女性的生殖系統(tǒng)健康和生存質(zhì)量均造成了嚴重的危害，呼吁人們必須引起高度的重視，做好HPV感染的監(jiān)測和防控才有利于從根源上降低宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險。此外，既往一項關(guān)于癌前病變患者宮頸癌發(fā)生的危險因素分析結(jié)果顯示[18]，HPV16和HPV18感染均是其獨立危險因素，危險系數(shù)分別為8.974、7.613，可知宮頸癌前病變患者一旦感染HPV16和HPV18，也會增加宮頸癌的發(fā)生風(fēng)險。分析其中原因可能為HPV高危型感染可對宮頸上皮細胞造成嚴重損傷，并且隨著時間的延長，損傷程度不斷加重，很可能會因此導(dǎo)致宮頸上皮細胞異常增生，進而誘發(fā)宮頸上皮內(nèi)瘤變和宮頸癌。另一方面，當(dāng)前國內(nèi)外盛行的宮頸癌疫苗也是針對HPV高危型感染的，可知HPV感染在宮頸癌發(fā)生和發(fā)展中的作用已經(jīng)引起臨床醫(yī)學(xué)人員的一致關(guān)注。

此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，宮頸鱗癌HPV感染陰性、單一感染18型構(gòu)成比遠低于宮頸腺癌（P<0.05），且宮頸鱗癌HPV單一感染16型、多重感染構(gòu)成比均遠高于宮頸腺癌（P<0.05），可知不同宮頸癌組織類型患者HPV感染的分型也存在明顯的差異。既往郝敏等[19]的研究中，在宮頸鱗癌患者中HPV16型和HPV18型構(gòu)成比分別為29.5%和4.5%，在宮頸腺癌患者中2種HPV感染的分型構(gòu)成比分別為4.5%和66.5%，可知HPV16感染的宮頸癌患者屬于鱗癌的可能性更高；而HPV18感染的宮頸癌患者屬于腺癌的可能性更高，與本次研究結(jié)果相符合共同證實了HPV18感染很可能是宮頸癌發(fā)生的危險因素，且在癌前病變患者中HPV18的陽性率的確明顯低于宮頸癌患者。結(jié)合既往研究[20]，分析其中原因為：在HPV整合到宿主基因組時HPV分型的L1和E6基因裂解，但是子宮頸細胞采樣時可能會出現(xiàn)誤差，或者含有低水平HPV DNA的細胞樣品降解，且宮頸腺癌組織中可能存在有HPV無關(guān)的腺體病變。

綜上所述，宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級患者和宮頸癌患者中HPV感染的基因型存在有明顯的差異，且宮頸鱗癌患者HPV16感染的風(fēng)險更高，宮頸腺癌患者HPV18感染的風(fēng)險更高，能夠根據(jù)HPV感染的分型情況了解宮頸癌的患病風(fēng)險，還可為組織分型鑒定提供參考。本研究仍存在明顯的不足，雖然證實了宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌患者及不同病理分型的宮頸癌患者HPV感染分型之間均存在明顯的差異，但是不同分型對上述疾病的發(fā)生和發(fā)展誘導(dǎo)機制仍不明確，需要進一步探討分析，才能更好地預(yù)防宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級和宮頸癌的發(fā)生，應(yīng)當(dāng)將其作為下一步的研究方向。

[參考文獻]

[1] 喻朝霞，王春蘭，耿建祥，等.宮頸正常細胞和宮頸CINⅢ級病變、鱗狀細胞癌組織中HPV感染基因型的分布[J].中國婦幼保健，2015，30（31）：5354-5358.

[2] 梅靜，徐海燕，耿建祥，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變組織中人乳頭瘤病毒感染基因型的分析[J].中國婦幼保健，2015， 30（15）：2333-2336.

[3] 揭偉霞，薛武進，史志華，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變與宮頸癌患者人乳頭狀瘤病毒感染的臨床分析[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（6）：1380-1381.

[4] 何鑫，陶繪丞，劉晨，等.醫(yī)院機會性篩查人群HR-HPV感染的流行病學(xué)特征及與宮頸癌前病變的關(guān)系[J].首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015，36（2）：219-225.

[5] 宋曉玲，蔡紅兵.HPV16-E6-DNA對宮頸癌預(yù)后預(yù)測價值分析[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（6）：416-420.

[6] Cuzick J， Myers O， Lee JH，et al. New mexico HPV pap registry steering committee. Outcomes in women with cytology showing atypical squamous cells of undetermined significance with vs without human papillomavirus testing[J]. JAMA Oncol，2017，3（10）：1327-1334.

[7] 吳翠霞，張艷紅，葛小花，等.高危型HPV感染與宮頸癌前病變與宮頸癌的相關(guān)性研究[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2016，26（11）：2568-2570.

[8] 李玲，馬燕玲，馬華玲，等.E-cadherin在宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌中的表達及其與高危型HPV感染的相關(guān)性[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展，2017，17（6）：1090-1093.

[9] 魏文斐，蘇桂棟，吳蘭芳，等.宮頸癌與癌前病變組織中HPV-16的整合感染狀態(tài)[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2015， 35（1）：47-50.

[10] Abu Qatouseh L，Sabri I，Alkhatib I，et al. Detection of high-risk human papillomavirus genotypes 16 and 18 in head and neck squamous cell carcinomas in jordan[J]. Asian Pac J Cancer Prev，2017，18（5）：1337-1341.

[11] 邱笑飛，林敏，姚招男，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變及宮頸癌Ⅰ期患者高危型人乳頭瘤病毒的變化情況[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2017，27（7）：1597-1600.

[12] 楊麗，王靜，馬彩玲.預(yù)防性HPV疫苗預(yù)防宮頸癌有效性和安全性Meta分析[J].中華腫瘤防治雜志，2015，22（9）：719-727.

[13] Brotherton JML，Tabrizi SN，Phillips S，et al. Looking beyond human papillomavirus （HPV） genotype 16 and 18：Defining HPV genotype distribution in cervical cancers in Australia prior to vaccination[J]. Int J Cancer，2017， 141（8）：1576-1584.

[14] 周琦，龍玲，曾莉.宮頸癌患者HPV感染情況分析及其宮頸組織CD4+、CD8+的表達研究[J].中國病原生物學(xué)雜志，2016，14（9）：851-854.

[15] 馬莉，叢笑，卞美璐，等.高危型HPV分型檢測作為子宮頸癌及其癌前病變初篩手段的探討[J].中華婦產(chǎn)科雜志，2015，50（4）：246-252.

[16] 王麗靜，任秀花，許春香.不同級別宮頸上皮內(nèi)瘤變患者宮頸HPV感染狀況的分析[J].中國婦產(chǎn)科臨床雜志，2016，17（3）：263-265.

[17] Szentirmay Z，Veleczki Z，Kásler M. Human papillomavirus associated cervix uteri morbidity in Hungary：Epidemiology and correlation with the HPV types and the simultaneous cytological diagnosis[J]. Orv Hetil，2017， 158（31）：1213-1221.

[18] 郭敏，朱波，葉琳，等.宮頸癌術(shù)后HPV持續(xù)感染的危險因素及對免疫失衡的影響[J].中華醫(yī)院感染學(xué)雜志，2017，27（17）：4000-4003.

[19] 郝敏，郝增平，金影.絕經(jīng)后婦女宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ級及以上患者高危人乳頭瘤病毒感染的分型特點[J].臨床和實驗醫(yī)學(xué)雜志，2016，15（17）：1725-1727.

[20] 李曉琳，萬曉潔，鄭飛云，等.宮頸上皮內(nèi)瘤變Ⅱ/Ⅲ級及宮頸癌中人乳頭瘤病毒基因型分布的比較[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2016，32（15）：2494-2497.

（收稿日期：2018-01-25）