亞甲基四氫葉酸還原酶C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性對(duì)采用葉酸聯(lián)合維生素B12治療的老年H型高血壓患者的影響研究

張翠，司君增，鄭立峰

近年來，隨著人們物質(zhì)生活水平提高，我國高血壓發(fā)病率呈現(xiàn)逐年升高趨勢(shì)［1］。臨床上將伴有血漿同型半胱氨酸（Hcy）水平＞10 μmol/L的原發(fā)性高血壓定義為H型高血壓［2］，而血漿Hcy水平升高會(huì)增加動(dòng)脈粥樣硬化事件發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)，口服葉酸聯(lián)合維生素B12可有效降低血漿Hcy水平［3］。血漿Hcy水平的影響因素分為遺傳因素和環(huán)境因素，亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是Hcy代謝的關(guān)鍵酶之一，其C677T位點(diǎn)基因突變可導(dǎo)致MTHFR活性降低及血漿Hcy水平升高［4］。本研究旨在探討MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性對(duì)采用葉酸聯(lián)合維生素B12治療的老年H型高血壓患者的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2015年9月—2017年9月萊蕪市人民醫(yī)院收治的老年H型高血壓患者146例，其中男87例，女59例；年齡61～86歲，平均年齡（74.5±13.1）歲；血漿Hcy水平＞10 μmol/L；收縮壓 ＞140 mm Hg（1 mm Hg=0.133 kPa）和 /或舒張壓＞90 mm Hg［5］。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）伴有惡性腫瘤、肝腎衰竭及感染性疾病者；（2）伴有認(rèn)知障礙、精神異常、心理問題者；（3）近3個(gè)月內(nèi)服用過對(duì)血漿Hcy水平有影響的藥物（維生素B12和葉酸除外）者。所有患者未服用降壓藥時(shí)測(cè)量上臂血壓，重復(fù)3次，并根據(jù)《中國高血壓防治指南2010》［6］進(jìn)行高血壓分級(jí)，其中1級(jí)44例，2級(jí)42例，3級(jí)60例。本研究經(jīng)萊蕪市人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，所有患者及其家屬知情并簽署知情同意書。

1.2 治療方法 所有患者參照《中國高血壓防治指南2010》［6］進(jìn)行常規(guī)降壓治療，同時(shí)口服葉酸（湖北武當(dāng)生物制藥有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：050901）聯(lián)合維生素B12（成都瑞芬思生物科技有限公司生產(chǎn)，生產(chǎn)批號(hào)：150801），均為5 mg/d；共連續(xù)治療4個(gè)月。

1.3 MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性檢測(cè)方法 采集所有患者外周靜脈血3 ml，參照DNA提取試劑盒（南京建成生物科技有限公司）說明書提取DNA；采用梯度聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）儀（Bio-Rad）對(duì)提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性10 min，95 ℃變性30 s，50 ℃退火30 s，70 ℃延伸1 min，40個(gè)循環(huán)，最后70 ℃延伸10 min；取PCR擴(kuò)增產(chǎn)物并置于全自動(dòng)雜交儀上進(jìn)行雜交反應(yīng)，采用生物芯片識(shí)讀儀讀取基因芯片數(shù)據(jù)，采用基因芯片分析軟件分析MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性。

1.4 觀察指標(biāo) 比較不同基因型患者高血壓分級(jí)，治療前后血漿Hcy水平、頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分及不穩(wěn)定斑塊檢出率。血漿Hcy水平檢測(cè)方法：分別于治療前、后采集所有患者空腹外周靜脈血3 ml，2 000 r/min離心5 min，分離血漿并放置-20 ℃冰箱中保存；采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血漿Hcy水平，試劑盒購自南京建成生物科技有限公司。頸動(dòng)脈超聲檢查：所有患者分別于治療前、后進(jìn)行頸動(dòng)脈超聲檢查，斑塊呈低回聲或回聲不均質(zhì)定義為不穩(wěn)定斑塊，斑塊呈強(qiáng)回聲則定義為穩(wěn)定斑塊；頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分采用Crouse積分，即兩側(cè)頸動(dòng)脈每個(gè)斑塊最大厚度之和，頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分越高提示斑塊穩(wěn)定性越差。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以（x± s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料分析采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高血壓分級(jí) 146例患者中CC基因型26例（占17.8%），CT基因型46例（占31.5%），TT基因型74例（占50.7%）。不同基因型患者高血壓分級(jí)比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=0.641，P＞0.05，見表1）。

表1 不同基因型患者高血壓分級(jí)比較〔n（%）〕Table 1 Comparison of hypertension grade in patients with different genotypes

2.2 血漿Hcy水平 治療前、后不同基因型患者血漿Hcy水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療前、后TT基因型患者血漿Hcy水平高于CC基因型、CT基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后CC基因型、CT基因型患者血漿Hcy水平低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

2.3 頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分 治療前、后不同基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；治療前、后TT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分高于CC基因型、CT基因型，CT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分高于CC基因型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療后CC基因型、CT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分低于治療前，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。治療前、后不同基因型患者頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊檢出率比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05，見表3）。

表2 不同基因型患者治療前后血漿Hcy水平比較（x±s，μmol/L）Table 2 Comparison of plasma Hcy level in patients with different genotypes before and after treatment

表3 不同基因型患者治療前后頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分及不穩(wěn)定斑塊檢出率比較Table 3 Comparison of carotid atherosclerotic plaque score and detection rate of unstable plaque before and after treatment

3 討論

研究表明，我國高血壓患者近80%存在血漿Hcy水平不同程度升高［7］，且血漿Hcy水平與高血壓分級(jí)、動(dòng)脈粥樣硬化事件發(fā)生率呈正相關(guān)［8］，血漿Hcy水平可能是頸動(dòng)脈粥樣硬化的獨(dú)立危險(xiǎn)因素［9］。MTHFR是Hcy代謝的關(guān)鍵酶，其C677T位點(diǎn)基因由C向T突變可引起MTHFR活性降低［10］，攜帶TT基因型者M(jìn)THFR活性明顯降低，僅為攜帶CC基因型者的一半，而攜帶CT基因型者M(jìn)THFR活性雖然有所降低，但與攜帶TT基因型者相比降低幅度較小［11］。MTHFR活性降低可抑制Hcy甲基化，繼而造成血漿Hcy水平升高。

有學(xué)者對(duì)167例缺血性腦卒中患者M(jìn)THFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，MTHFR C677T位點(diǎn)TT基因型占34.7%［12］；對(duì)248例伴血漿Hcy水平＞21.35 μmol/L的急性冠脈綜合征患者分析發(fā)現(xiàn)，MTHFR C677T位點(diǎn)TT基因型占67.7%［13］。本研究146例老年H型高血壓患者中CC基因型占17.8%，CT基因型占31.5%，TT基因型占50.7%，與上述研究報(bào)道結(jié)果相符，提示老年H型高血壓患者M(jìn)THFR C677T位點(diǎn)TT基因型所占比例較高，有可能是導(dǎo)致H型高血壓及血漿Hcy水平升高的原因之一。

大量臨床研究表明，體內(nèi)葉酸、維生素B12含量與血漿Hcy水平呈負(fù)相關(guān)［14-16］，其中維生素B12是蛋氨酸合成酶的輔酶之一，在一定程度上可促進(jìn)體內(nèi)Hcy向蛋氨酸方向轉(zhuǎn)化，但易受葉酸含量影響，葉酸含量降低會(huì)抑制Hcy向蛋氨酸轉(zhuǎn)化，增加Hcy在體內(nèi)的蓄積［17-18］，而補(bǔ)充外源性葉酸、維生素B12可有效降低血漿Hcy水平。樊敬峰等［19］研究發(fā)現(xiàn)，口服維生素B12可有效降低H型高血壓患者血漿Hcy水平；一項(xiàng)Meta分析結(jié)果顯示，中國人群中攜帶MTHFR C677T位點(diǎn)TT基因型者血漿Hcy水平高于攜帶CC、CT基因型者，葉酸含量低于攜帶CC、CT基因型者；補(bǔ)充外源性葉酸后血漿Hcy水平降低，其中攜帶MTHFR C677T位點(diǎn)TT基因型者葉酸含量升高程度、血漿Hcy水平降低程度均低于攜帶CC、CT基因型者［20］，提示MTHFR C677T位點(diǎn)為TT基因型者補(bǔ)充外源性葉酸的反應(yīng)較差。本研究結(jié)果顯示，治療后CC基因型、CT基因型患者血漿Hcy水平低于治療前，且治療前、后TT型患者血漿Hcy水平高于CC基因型、CT基因型，與上述研究結(jié)果基本一致，提示葉酸聯(lián)合維生素B12可有效降低老年H型高血壓患者血漿Hcy水平，但在一定程度上受C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性影響，TT基因型患者血漿Hcy水平降低效果不如CC基因型、CT基因型患者。

CAI等［21］研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR C677T位點(diǎn)基因由C向T突變會(huì)誘導(dǎo)Hcy損傷血管；吳慶慶等［22］研究發(fā)現(xiàn)，MTHFR C677T位點(diǎn)TT基因型老年高血壓患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊檢出率較高，提示MTHFR C677T位點(diǎn)基因突變可能是導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化事件的遺傳因素。目前，國內(nèi)外關(guān)于葉酸聯(lián)合維生素B12改善老年H型高血壓患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的研究報(bào)道較少［23］，本研究結(jié)果顯示，治療前、后TT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分高于CC基因型、CT基因型，CT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分高于CC基因型，治療后CC基因型、CT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分低于治療前，而治療前、后不同基因型患者頸動(dòng)脈不穩(wěn)定斑塊檢出率間無差異，提示葉酸聯(lián)合維生素B12降低老年H型高血壓患者頸動(dòng)脈血管粥樣硬化斑塊積分，但在一定程度上受MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性影響，TT基因型患者頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分降低效果不如CC、CT基因型患者。

綜上所述，葉酸聯(lián)合維生素B12降低老年H型高血壓患者血漿Hcy水平、頸動(dòng)脈粥樣硬化斑塊積分的效果與MTHFR C677T位點(diǎn)基因多態(tài)性有關(guān)，其中TT基因型患者的降低效果不如CC基因型、CT基因型，臨床應(yīng)當(dāng)考慮遺傳因素和基因多態(tài)性，盡可能實(shí)現(xiàn)個(gè)體化、早期干預(yù)，減少高同型半胱氨酸血癥所致心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生；但本研究樣本量較小、基因位點(diǎn)單一，結(jié)果結(jié)論仍需進(jìn)一步擴(kuò)大樣本量、增加基因點(diǎn)深入研究，為實(shí)現(xiàn)老年H型高血壓患者的個(gè)體化治療及精準(zhǔn)治療提供參考。

作者貢獻(xiàn)：張翠進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、負(fù)責(zé)撰寫論文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；司君增進(jìn)行試驗(yàn)實(shí)施、評(píng)估、資料收集；鄭立峰進(jìn)行質(zhì)量控制及審校。

本文無利益沖突。