發(fā)酵大麥分離蛋白對3T3-L1細(xì)胞棕色化的影響

谷耀光，肖香，張家艷，董英

（江蘇大學(xué)食品與生物工程學(xué)院，江蘇鎮(zhèn)江 212013）

肥胖及其相關(guān)的代謝綜合征已成為全球面臨的挑戰(zhàn)，使人類承受著共同的壓力與負(fù)擔(dān)。研究發(fā)現(xiàn)棕色脂肪細(xì)胞可迅速將脂肪酸轉(zhuǎn)化為熱量從而消耗脂肪，為緩解肥胖帶來的一系列健康問題提供了新的思路[1]。2009年，Cypess等已經(jīng)確定成年人體內(nèi)存在棕色脂肪[2]，棕色脂肪被激活后通過UCP1蛋白將脂肪酸轉(zhuǎn)化為熱量[3]。但是在人體中，棕色脂肪組織隨著年齡的增長會(huì)逐漸減少，成年以后含量極低，并且由于激活條件苛刻，其功能難以展現(xiàn)。近年來，不斷有研究發(fā)現(xiàn)，在長期寒冷環(huán)境或者某些藥物的刺激下，機(jī)體內(nèi)的白色脂肪細(xì)胞經(jīng)棕色化反應(yīng)變?yōu)槊咨荆蛊渚哂凶厣炯?xì)胞的形態(tài)和功能[4]。但是米色脂肪的形成同樣需要一定的激活條件。因此，研究與開發(fā)促進(jìn)白色脂肪棕色化的食源性成分，具有重要的理論意義和應(yīng)用前景。

課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌發(fā)酵大麥提取物（LFBE）能夠抑制3T3-L1細(xì)胞的脂滴合成。史臘妮等人研究表明LFBE中蛋白質(zhì)含量高于未發(fā)酵大麥提取物（RBE），且LFBE能夠顯著下調(diào)脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因C/EBPα、SREBP-1c的表達(dá)，上調(diào)GLUT4的表達(dá)，從而減少細(xì)胞中脂肪酸的累積，增強(qiáng)細(xì)胞對葡萄糖的代謝能力，抑制3T3-L1細(xì)胞脂滴合成[5]。張家艷等人研究發(fā)現(xiàn)，LFBE能顯著降低營養(yǎng)型肥胖大鼠的體重，降低其血清和肝臟總甘油三酯（TG）及總膽固醇（TC）含量，并提高肥胖大鼠的糖耐受量[6]。Aung等發(fā)現(xiàn)脂肪組織分泌的愛帕琳肽（Apelin）是G蛋白偶聯(lián)受體APJ的配體，屬于內(nèi)源性多肽類激素，Apelin可以上調(diào)脂肪細(xì)胞PGC-1α和UCP1的表達(dá)，提高細(xì)胞耗氧量，促進(jìn)線粒體增殖[7]。LFBE與RBE相比蛋白質(zhì)含量明顯升高，尤其是蛋白質(zhì)大分子被分解成相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)，很可能參與了抑制脂肪細(xì)胞分化等反應(yīng)。

本文旨在初步分離純化乳酸菌發(fā)酵大麥蛋白質(zhì)，研究其與3T3-L1前脂肪細(xì)胞可能發(fā)生的棕色化反應(yīng)，并初步探索其作用途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

大麥品種為揚(yáng)飼3號(hào)，購自鹽城市雙增農(nóng)化科技有限公司；植物乳桿(Lactobacillus plantarum dy-1，菌株編號(hào)：CGMCCNo.601)實(shí)驗(yàn)室自行分離鑒定。

Millipore超濾膜購自美國Merck Millipore公司；G-25凝膠柱購自美國GE Healthcare公司。

3T3-L1細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)曹新教授贈(zèng)送；DMEM（Dulbecco’s Modified Eagle Medium）購自美國 Corning公司；胎牛血清購自美國 Gibco公司；CCK-8試劑盒購自碧云天公司；3-異丁基-1-甲基黃嘌呤（IBMX）、胰島素（INS）和地塞米松（DEX）購自上海創(chuàng)賽科學(xué)儀器有限公司；胰蛋白酶溶液購自BBI Life Science公司；青霉素-鏈霉素溶液購自生工生物工程（上海）股份有限公司；熒光定量PCR引物由上海生工生物工程技術(shù)服務(wù)有限公司合成；熒光定量PCR相關(guān)試劑購自Takara公司；葡萄糖檢測試劑盒，購自愛爾蘭 Megazym公司；其他生化試劑均為分析純，購自國藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司。

3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)液的配制：

基本培養(yǎng)基（BM）：DMEM 高糖培養(yǎng)基，含有10% FBS、100 U/mL青霉素和100 U/mL鏈霉素。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ⅰ（DMⅠ）：含有10 μg/mL胰島素，0.5 mmol/L IBMX和1 μmol/L地塞米松的BM。

誘導(dǎo)培養(yǎng)基Ⅱ（DMⅡ）：含有10 μg/mL胰島素的BM。

1.1.2 主要儀器與設(shè)備

冷凍離心機(jī)，美國Beckman公司；超濾器裝置，美國Merck Millipore公司；AKTApurifier蛋白純化系統(tǒng)，美國 GE Healthcare公司；垂直電泳儀，美國BIO-RAD公司；倒置顯微鏡，南京江南永新光學(xué)有限公司；FlexStationⅡ多功能酶標(biāo)儀，美國 Molecular Devices公司；CFX96熒光定量PCR儀，美國BIO-RAD公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 發(fā)酵液的制備

大麥發(fā)酵液制備：將脫殼后的大麥用水洗凈，37 ℃烘干表面水分，采用錘式磨粉機(jī)磨粉并過100目篩，按大麥粉(W)∶水(V)=1(kg)∶7(L)的比例在發(fā)酵罐中混合均勻。將250 mL菌液8000 r/min離心15 min，棄上清，用水懸浮菌體，加入發(fā)酵罐，密封，31 ℃、180 r/min條件下發(fā)酵24 h，8000 r/min離心20 min，收集上清液備用。

相同條件下制備RBE-P溶液，不加乳酸菌。

1.2.2 LFBE-P的制備

向離心后的上清液中加入飽和硫酸銨溶液，使終濃度為60%，4 ℃ 8000 r/min離心40 min，收集沉淀，用 PBS(pH=7.4)分別溶解沉淀，采用考馬斯亮藍(lán)法測量蛋白濃度，標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1。

圖1 考馬斯亮藍(lán)法測量蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve for protein concentration via Bradford

將 PBS溶解后的蛋白溶液過 0.22 μm濾膜，將GE Hitrap desalting預(yù)裝柱裝載于AKTApurifier蛋白純化系統(tǒng)，流速5 mL/min，在線監(jiān)測280 nm處吸光值和電導(dǎo)率，收集蛋白峰。脫鹽后，將溶液置于相對分子質(zhì)量500 u的透析袋，封口，用聚乙二醇掩埋透析袋，待脫去部分水后，收集濃縮后的蛋白溶液即為LFBE-P，并測量蛋白濃度。

1.2.3 SDS-PAGE蛋白質(zhì)電泳

將蛋白質(zhì)溶液和 loading buffer按照 4∶1（V∶V）混合后，煮沸5 min使其變性。配制10%分離膠和5%濃縮膠，上樣后初始電壓80 V，直到樣品被壓成一道細(xì)線，提高電壓至120 V約2 h，取出凝膠，考馬斯亮藍(lán)染色1 h，搖床脫色過夜，采用凝膠成像系統(tǒng)掃描泳帶。

1.2.4 LFBE-P中三種相對分子質(zhì)量范圍蛋白質(zhì)的制備采用Millipore超濾裝置，3 ku和20 ku超濾膜，分別收集濾過液和截留液，超濾完成后用NaOH和蒸餾水依次清洗超濾膜，保存于福爾馬林溶液。LFBE-P按分子量分為三部分：小于3 ku，3 ku～20 ku和大于20 ku。

1.2.5 3T3-L1細(xì)胞培養(yǎng)

用BM培養(yǎng)細(xì)胞，控制培養(yǎng)箱的溫度為37 ℃，CO2濃度為5%，待細(xì)胞生長至80%時(shí)胰蛋白酶消化傳代，選取對數(shù)期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.6 LFBE-P的細(xì)胞毒性測定

將3T3-L1細(xì)胞以5×104個(gè)/mL的濃度接種于96孔板，每孔接種100 μL，培養(yǎng)箱中孵育12 h，待細(xì)胞貼壁后加入含指定蛋白濃度的培養(yǎng)基，分為調(diào)零組，空白組和實(shí)驗(yàn)組，每組6個(gè)平行，分組設(shè)置如表1。

將96孔板在培養(yǎng)箱中孵育24 h后，每孔加入10 μL CCK-8溶液，繼續(xù)孵育2 h，使用雙波長法（檢測波長450 nm，參比波長650 nm）測定OD值。

表1 LEBE-P對3T3-L1細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)Table 1 Cytotoxicity test of LFBE-P for 3T3-L1 adipocytes

表2 3T3-L1細(xì)胞誘導(dǎo)分化步驟Table 2 Procedure for 3T3-L1 adipocytes differentiation

1.2.7 3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化

將對數(shù)期細(xì)胞接種于六孔板，用BM培養(yǎng)細(xì)胞至完全融合，繼續(xù)培養(yǎng)48 h，此時(shí)為day0。按照表2所示開始誘導(dǎo)分化。RBE-P的終濃度為20 μg/mL（day0 to day8）。

1.2.8 細(xì)胞消耗葡萄糖量測定

采用葡萄糖氧化酶法，即 Megazyme的D-GLUCOSE試劑盒，吸取0.1 mL標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液（1 mg/mL）于試管中，加入3 mL GOPOD酶液，50 ℃孵育20 min，對樣品稀釋后做同樣處理，在510 nm處測量吸光值。

細(xì)胞消耗葡萄糖量的計(jì)算方法：

培養(yǎng)基中初始葡萄糖含量-培養(yǎng)后培養(yǎng)基中葡萄糖含量∶

葡萄糖含量(μg/0.1 μL)=100×(ΔAsample-ΔAblank)/(ΔAstandard-ΔAblank)

其中：水的OD值為ΔAblank，標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖為ΔAstandard，樣品為 ΔAsample。計(jì)算后轉(zhuǎn)化為 μmol作圖（Mglucose=180.16 g/mol），其中培養(yǎng)基體積為2.5 mL（六孔板）。

1.2.9 白色脂肪棕色化相關(guān)基因相對表達(dá)量的測定

采用TAKARA RNA extraction kit試劑盒法提取誘導(dǎo)分化后的3T3-L1細(xì)胞總RNA。提取RNA后按試劑盒步驟進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR的擴(kuò)增條件：95 ℃預(yù)變性 30 s，95 ℃變性 15 s，60 ℃退火34 s，共40個(gè)循環(huán)?；虻南鄬Ρ磉_(dá)量用2-ΔΔCt計(jì)算。在Geen bank中查詢小鼠的mRNA序列，應(yīng)用primer3.0設(shè)計(jì)引物，相關(guān)基因的引物序列如表3。

表3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR引物設(shè)計(jì)Table 3 Gene-specific primers used for real-time PCR

1.2.10 統(tǒng)計(jì)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS 21.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，Excel軟件進(jìn)行作圖，各組數(shù)據(jù)以±SD（平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差）表示，采用單項(xiàng)方差分析，用DPS來確定數(shù)據(jù)間的顯著性差異，顯著性水平設(shè)定為p＜0.05。

2 結(jié)果與討論

2.1 LFBE-P與RBE-P的比較分析

圖2 Hitrap desalting G-25凝膠柱圖譜Fig.2 Hitrap desalting 25 gel filtration chromatogram

蛋白質(zhì)沉淀復(fù)溶于PBS溶液中，由于含有高濃度的鹽，需要對溶液進(jìn)行脫鹽處理。GE的Hitrap desalting G-25凝膠柱具有高效的脫鹽能力，脫鹽結(jié)果見圖2。電導(dǎo)率峰位置在蛋白吸收峰之后，收集蛋白吸收峰并濃縮，即可得LFBE-P溶液。

圖3 SDS-PAGE聚丙烯酰胺電泳圖譜Fig.3 SDS-PAGE Polyacrylamide gel electrophoresis

通過SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝膠電泳，對LFBE-P和RBE-P進(jìn)行分析，由圖3可知，RBE-P相對分子質(zhì)量分布廣泛，大分子蛋白質(zhì)較多。經(jīng)過乳酸菌發(fā)酵以后，分子量在45 ku以上的大分子蛋白幾乎全部消失，表明大麥中的可溶性大分子蛋白質(zhì)經(jīng)過乳酸菌作用后被分解成相對分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)。

同時(shí)，由電泳圖譜3可知，發(fā)酵前后蛋白的種類均有很多，因此對LFBE-P功能活性的研究，需對其進(jìn)行初步的分離提純。

2.2 LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞存活率的影響

3T3-L1是前脂肪細(xì)胞，在一定刺激下會(huì)被誘導(dǎo)分化成成熟的脂肪細(xì)胞。對藥物的作用濃度一般采用MTT法和CCK8法進(jìn)行研究，由于乳酸菌發(fā)酵大麥產(chǎn)物能夠與 MTT反應(yīng)，因此選擇 CCK8作為鑒定LFBE-P最佳作用濃度范圍的方法。

圖4 LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞增殖的影響Fig.4 Effect of LFBE-P on the proliferation of 3T3-L1 preadipocytes

圖4表示了LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞存活率的影響，由于細(xì)胞培養(yǎng)需要每隔48 h進(jìn)行換液，以供細(xì)胞營養(yǎng)代謝所需，因此需要研究48 h以內(nèi)的細(xì)胞毒性試驗(yàn)。由圖4可知，低濃度LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞的抑制率不明顯，反而有略微的促進(jìn)其生長的能力。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)濃度大于40 μg/mL時(shí)，對細(xì)胞開始產(chǎn)生明顯的抑制作用，此時(shí)的細(xì)胞存活率分別為81%（24 h）和69%（48 h）。當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)濃度繼續(xù)升高，到320 μg/mL時(shí)，3T3-L1細(xì)胞經(jīng)過48 h培養(yǎng)，存活率僅為10.8%，表明大部分細(xì)胞已經(jīng)死亡。在此基礎(chǔ)上，最終選擇LFBE-P作用濃度為 10 μg/mL，15 μg/mL 和 20 μg/mL。

2.3 LFBE-P誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞棕色化的作用

2.3.1 LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響

圖5表示RBE-P和LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響。由圖可知，在24 h以內(nèi)，細(xì)胞對葡萄糖的消耗量，RBE-P比空白提高了 28.7%，而LFBE-P在低濃度（10 μg/mL）下對葡萄糖消耗量低于RBE-P，隨著濃度升高，葡萄糖消耗量逐漸上升，20 μg/mL的LFBE-P相比空白提高了近一倍，比對照組提高了80%。Yi Han等人利用槲皮素誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞棕色化，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的代謝水平提高，并且在胰島素的作用下，細(xì)胞在分化早期對葡萄糖利用率迅速提高[8]。Laura等人通過激活G蛋白偶聯(lián)受體，使皮下白色脂肪組織細(xì)胞發(fā)生棕色化反應(yīng)，線粒體迅速增殖，進(jìn)而加強(qiáng)細(xì)胞的氧化呼吸和對葡萄糖消耗量[9]。本研究中細(xì)胞在受到LFBE-P的刺激下，短期內(nèi)即可迅速提高對葡萄糖的利用率，提高能量代謝效率，有明顯的棕色化脂肪細(xì)胞的性狀。在培養(yǎng)時(shí)間達(dá)48 h后，細(xì)胞對葡萄糖的消耗量趨于穩(wěn)定，由于培養(yǎng)基中底物充足，可能是因?yàn)榱装逯屑?xì)胞數(shù)量受限，相關(guān)酶的活力已趨于飽和。

綜上，LFBE-P相比RBE-P能夠顯著提高3T3-L1細(xì)胞對葡萄糖的利用率。

圖5 RBE-P和LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞葡萄糖消耗量的影響Fig.5 Effect of RBE-P and LFBE-P on glucose consumption of 3T3-L1 preadipocytes

2.3.2 LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞棕色化特征基因表達(dá)的影響

以胰島素誘導(dǎo) 3T3-L1分化成脂肪細(xì)胞為對照，觀察 RBE-P和 LFBE-P對其分化的影響。熒光定量PCR對3T3-L1細(xì)胞mRNA含量的分析結(jié)果如圖6所示。

UCP1是白色脂肪棕色化過程中最重要的蛋白質(zhì)之一。Maria等人研究發(fā)現(xiàn)棕色脂肪細(xì)胞的線粒體產(chǎn)熱能力遠(yuǎn)高于白色脂肪細(xì)胞，棕色化脂肪細(xì)胞的主要特征表現(xiàn)為提高有氧呼吸速率，線粒體擴(kuò)增，利用線粒體內(nèi)膜的UCP1蛋白分解脂肪酸和葡萄糖產(chǎn)生熱量[10]。Ayalon等人對比了肥胖和正常小鼠脂肪組織的UCP1表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)前者UCP1含量低于后者，表明UCP1在白色脂肪細(xì)胞中的表達(dá)量比較低[11]。UCP1蛋白是棕色化脂肪細(xì)胞實(shí)現(xiàn)其功能的重要執(zhí)行蛋白，因此其基因表達(dá)量可以間接反映細(xì)胞是否發(fā)生了棕色化。

由圖6a可知，RBE-P組與正常脂肪細(xì)胞的UCP1表達(dá)量基本相同，而LFBE-P僅僅在10 μg/mL的濃度時(shí)即可顯著上調(diào)UCP1表達(dá)量，是RBE-P表達(dá)量的1.5倍。且UCP1基因表達(dá)量與LFBE-P濃度呈正相關(guān)，20 μg/mL時(shí)基因上調(diào)接近2倍。

圖6 RBE-P和LFBE-P對3T3-L1細(xì)胞棕色化相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.6 Effect of RBE-P and LFBE-P on brown-specific gene expression

過氧化物酶體增殖激活受體 γ的共激活劑PGC-1α是細(xì)胞棕色化過程中的重要轉(zhuǎn)錄因子，PGC-1α涉及體內(nèi)能量代謝，是線粒體增殖過程中的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子[12]，因此，其表達(dá)量與細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)量呈正相關(guān)，同時(shí)可以反映細(xì)胞的氧化呼吸能力的提升。Katarina等人發(fā)現(xiàn)，抑制Gq蛋白可以提高米色脂肪的含量，引起PGC-1α和UCP1表達(dá)量上升，最終導(dǎo)致細(xì)胞能量代謝得以增強(qiáng)[13]。

由圖6b可知，在RBE-P作用下PGC-1α的表達(dá)比對照組低13%，說明RBE-P對PGC-1α的表達(dá)具有抑制作用，不利于3T3-L1細(xì)胞的棕色化。LFBE-P可提高PGC-1α的表達(dá)量，增加幅度與LFBE-P的濃度相關(guān)，20 μg/mL時(shí)PGC-1α的表達(dá)量是對照組的2倍，且三組不同濃度與對照組相比均差異顯著（p＜0.05）。

PRDM16是一種鋅指轉(zhuǎn)錄因子，在棕色脂肪細(xì)胞中含量豐富，有助于棕色脂肪細(xì)胞中產(chǎn)熱基因 UCP1和CIDEA的表達(dá)，激活細(xì)胞的產(chǎn)熱程序，從而使細(xì)胞高效利用脂肪。Mirko等人發(fā)現(xiàn)miRNA-133能夠下調(diào)PRDM16的表達(dá)量，對miRNA-133的抑制可以提高PRDM16含量，進(jìn)而促進(jìn)棕色脂肪細(xì)胞分化[14]。在白色脂肪細(xì)胞中 PRDM16的表達(dá)有利于細(xì)胞分化成米色脂肪細(xì)胞，表現(xiàn)出類似于棕色脂肪產(chǎn)熱的能力[15]。

由圖6c可知，低濃度的LFBE-P對PRDM16的調(diào)節(jié)作用不明顯，濃度為20 μg/mL時(shí)，PRDM16表達(dá)量上調(diào)27%。而RBE-P對PRDM16有抑制作用，其表達(dá)量較對照組降低了30%。因此，LFBE-P能夠在一定程度上促進(jìn)PRDM16的表達(dá)，有利于3T3-L1細(xì)胞棕色化。

2.4 不同相對分子質(zhì)量的LFBE-P誘導(dǎo)3T3-L1細(xì)胞棕色化

圖7 LFBE-P不同相對分子質(zhì)量對棕色化相關(guān)基因表達(dá)的影響Fig.7 Effect of LFBE-P with different molecular weights on brown-specific gene expression

由于LFBE-P中含有很多雜蛋白，甚至可能含有抑制 3T3-L1細(xì)胞棕色化的部分物質(zhì)。因此，將其按照相對分子質(zhì)量分為三部分：1～3 ku，3～20 ku和大于20 ku，分別進(jìn)行試驗(yàn)。

由圖7不難看出，成熟的3T3-L1脂肪細(xì)胞，對產(chǎn)熱相關(guān)基因的表達(dá)均處于較低水平，可見白色脂肪細(xì)胞的產(chǎn)熱能力很低。RBE-P對棕色化相關(guān)基因的表達(dá)具有不同程度的微調(diào)。LFBE-P中相對分子質(zhì)量處于 3～20 ku范圍內(nèi)的蛋白，能夠明顯提高 UCP1和PGC-1α的表達(dá)量，說明LFBE-P中的主要活性成分是3～20 ku的蛋白質(zhì)。而分子量小于3 ku的蛋白，反而對棕色化相關(guān)基因的表達(dá)有抑制作用，不利于3T3-L1細(xì)胞的棕色化。

Fgf21是一種成纖維細(xì)胞生長因子，在胰島素的作用下會(huì)促進(jìn)脂肪細(xì)胞對葡萄糖的攝取能力，Murielle等人研究表明Fgf21能夠提高細(xì)胞的能量消耗和脂肪利用率，并且不必依賴UCP1蛋白的產(chǎn)熱功能，從而抑制肥胖[16]。由圖7可知，LFBE-P中相對分子質(zhì)量為 3～20 ku的蛋白質(zhì)可以顯著促進(jìn) 3T3-L1細(xì)胞中Fgf21和Cidea的表達(dá)，進(jìn)而提高細(xì)胞的脂解作用和產(chǎn)熱能力。但是，基因表達(dá)水平只是 3T3-L1細(xì)胞發(fā)生棕色化的主要證據(jù)之一，其具體的分子機(jī)制和相關(guān)的信號(hào)調(diào)節(jié)通路還需要進(jìn)一步的研究。

3 結(jié)論

RBE-P能夠在一定程度上促進(jìn)棕色化基因的表達(dá)，但是效果不明顯。LEBE-P可顯著提高3T3-L1細(xì)胞產(chǎn)熱基因如UCP1的表達(dá)，濃度為20 μg/mL時(shí)即可使其表達(dá)量提高近2倍，在24 h內(nèi)細(xì)胞對葡萄糖的利用率比空白組提高80%。LFBE-P中包含了相對分子質(zhì)量不同的系列蛋白，其中相對分子質(zhì)量3～20 ku的蛋白對提升UCP1、PGC-1α和Fgf21表達(dá)量的幅度最大，即誘導(dǎo)白色脂肪細(xì)胞棕色化的作用最為明顯，但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。