熒光增白劑5BM的毒理學(xué)數(shù)據(jù)及其使用安全性（二）

董仲生

（沈陽化工研究院，遼寧沈陽，110021）

（上接第6期第52頁）

4. 4 急性吸入毒性

IBT實驗室在1971年用FWA 5BM（Ciba-Geigy公司提供）對白化大鼠（5只/性別/組，平均體重290g）進(jìn)行了一項非- GLP的吸入毒性研究。

實驗物質(zhì)FWA 5BM由高速、清潔、干燥的氣流輸送。產(chǎn)生的混合物被引入到頂部的有機(jī)玻璃接觸室（容量70L），通過一個隔板被分散和在底部排出。接觸室中FWA 5BM粉塵的濃度通過在動物吸入?yún)^(qū)域環(huán)境的取樣進(jìn)行測定。10只白化大鼠暴露于2.9mg/L FWA 5BM的粉塵中4h，在室內(nèi)空氣中直徑為2～5、2～25和大于25mm的顆粒百分?jǐn)?shù)分別為31%、59%和10%[4]。

結(jié)果：暴露1～4h，動物普遍表現(xiàn)出不活潑。在之后14天的暴露期動物表現(xiàn)健康和體重增加正常，沒有動物死亡。在暴露14天后的全身尸檢顯示，2只動物的肺發(fā)生輕微實變，3只大鼠（性別不詳）的肺發(fā)生輕微充血，結(jié)果LC50＞2.9mg/L[5]。

4.5 急性皮膚毒性

(1) Ciba-Geigy公司1974年進(jìn)行的一項研究報道，F(xiàn)WA 5BM對兔子的經(jīng)皮LD50值為＞2000mg/kg bw[3]。

根據(jù)OECD指南402（急性皮膚毒性），Wistar大鼠（5只/性別）在半-封閉的條件下以2000mg/kg bw劑量經(jīng)皮膚途徑暴露于FWA 5BM下24h，然后跟蹤給藥觀察15天。結(jié)果沒有觀察到死亡，其LD50＞2000 mg / kg bw[5]。

(2) 1975年毒理學(xué)家按照美國食品和藥品官員協(xié)會（AFDO）的 食品、藥品和化妝品中化學(xué)品的安全評價（1959）中斑貼技術(shù)規(guī)程對兔子皮膚的刺激、腐蝕進(jìn)行了評估[1]。

用俄羅斯兔子（雌性、雄性各3只，體重1.5～2kg），F(xiàn)WA 5BM用量為0.5g，把有FWA 5BM的紗布斑貼2.5cm×2.5cm施用于已備好的有擦傷和無擦傷刮毛的皮膚處，暴露24h后移除紗布。觀察3天。同時進(jìn)行對照實驗。

對皮膚刺激立即進(jìn)行評分和在除去紗布斑貼48h后評分（在實驗開始后的24和72h）。

皮膚刺激（包括紅斑和焦痂形成以及浮腫形成）的嚴(yán)重性評價標(biāo)準(zhǔn)為：刺激指數(shù)平均值小于2表示輕微刺激，2～5表示中等刺激，大于6表示皮膚刺激嚴(yán)重。

結(jié)果：本實驗的主要刺激指數(shù)被評估1.5，因此實驗物質(zhì)FWA 5BM對兔子皮膚造成的刺激為輕微刺激。

上述實驗中皮膚反應(yīng)強(qiáng)度的評分標(biāo)準(zhǔn)與OECD指南中的報道相同。根據(jù)CLP法規(guī)（歐盟物質(zhì)和混合物的分類、標(biāo)簽和包裝法規(guī)）（EC 1272/2008）把FWA 5BM歸類為：無皮膚刺激性物質(zhì)[1]。

(3) 另外，在1975年和1976年，毒理學(xué)家按照AFDO的 食品、藥品和化妝品中化學(xué)品的安全評價”（1959）中斑貼技術(shù)規(guī)程對兔子皮膚的刺激、腐蝕還分別進(jìn)行了兩項和一項類似的評估實驗[1]。

結(jié)果：原發(fā)刺激指數(shù)被分別評估為1.2、0.6（1975年）和1.2（1976年），為輕微刺激。

根據(jù)CLP法規(guī)（EC 1272/2008）把FWA 5BM歸類為：無皮膚刺激性物質(zhì)。

4.6 眼睛刺激

(1) 1975年毒理學(xué)家按照AFDO的 食品、藥品和化妝品中化學(xué)品的安全評價”（1959）中的規(guī)程對兔子眼睛的刺激進(jìn)行了評估[1]。

眼睛刺激的評級標(biāo)準(zhǔn)為：眼刺激指數(shù)0～10：極?。?1～25：輕微；26～56：中等；57～84：顯著；高于84：極大。

用俄羅斯兔子（雌、雄性各3只，體重1.5～2kg），F(xiàn)WA 5BM用量為0.1g，被放入兔子左眼的結(jié)膜囊中，眼瞼輕輕地閉合1s，右眼不做處理用于對照。3只兔子的眼睛在施藥處理30s后，用10mL溫水清洗眼睛。觀察時間為7天。

在第1、2、3、4和7天對刺激進(jìn)行評價，并對每只兔子進(jìn)行評分。

結(jié)果：眼刺激指數(shù)被評估為角膜2.8，虹膜0，結(jié)膜為2.7；極小的刺激。

討論和結(jié)論：

盡管在AFDO和OECD之間的物質(zhì)去除時間明顯不同（該實驗中為30s，OECD中為1h），但結(jié)果清晰地表明：來自于24、48和72h的清洗與未清洗所有動物眼睛兩者等級的平均值對于角膜的透明度低于1，對于虹膜也低于1，對于兩者的結(jié)膜紅色和水腫低于2。

因此，依據(jù)CLP法規(guī)，該物質(zhì)被分類為無刺激。

(2) 另外在1976年幾位毒理學(xué)家按照AFDO的 食品、藥品和化妝品中化學(xué)品的安全評價（1959）中的規(guī)程對兔子眼睛的刺激進(jìn)行了3項評估實驗[1]。

刺激/腐蝕的相應(yīng)數(shù)據(jù)如下：

1976年第一項實驗結(jié)果：眼刺激指數(shù)被評估為角膜0，虹膜0，結(jié)膜為1。FWA 5BM對兔子眼睛造成最小的刺激。沖洗的影響（未沖洗的/沖洗的眼睛）被評估為0.4。

1976年第二項實驗結(jié)果：眼刺激指數(shù)被確定為角膜1.4，虹膜0，結(jié)膜為2.1；最小的（極微的）刺激。

1976年第三項實驗結(jié)果：眼刺激指數(shù)被確定為角膜0，虹膜0，結(jié)膜為0；無刺激。

因此，依據(jù)CLP法規(guī)，該物質(zhì)被分類為無刺激。

4.7 皮膚刺激/致敏

(1) 在1965年進(jìn)行了一項由65人參與的為期3周的人類重復(fù)傷害斑貼實驗[4]，目的是研究FWA 5BM對皮膚的刺激和致敏性。實驗物質(zhì)FWA 5BM（洗滌劑基料溶液中含F(xiàn)WA 5BM 10%）被用于一個系列9個密閉斑貼敷用物（每一個為期24h）中，2周后激發(fā)敷用位置。賦形劑作為陰性對照，沒進(jìn)行陽性對照。

洗滌劑基料在通常的商業(yè)配方范圍內(nèi)，濃度為0.5%的水溶液。時不時地觀察傷害斑貼點，對其進(jìn)行評分作為原發(fā)性刺激[4]。檢驗結(jié)果：

有陽性反應(yīng)受試者的數(shù)量：0

有陰性反應(yīng)受試者的數(shù)量：65有刺激反應(yīng)受試者的數(shù)量：0該物質(zhì)沒有引起刺激或致敏。

(2) 在1970年FWA 5BM以24%的濃度用于光敏實驗，有78人參與。除了每周兩天在斑貼移除后，實驗區(qū)域立即在室外陽光下暴露30min外，其他類似于上一實驗。

結(jié)果顯示：上述兩個實驗，在不同的時間間隔（時間沒有說明）對斑貼位置進(jìn)行刺激評級，F(xiàn)WA 5BM不會引起人體過敏，不是致敏物[4]。

(3) Keplinger等人于1974年進(jìn)行了一項由自愿者參與的實驗。200人用凡士林中含1%和5%的FWA 5BM（Ciba-Geigy公司提供，濃度不詳）或50人用0.1%的洗滌劑溶液（類型沒有說明）中含0.05%的FWA 5BM進(jìn)行的斑貼實驗。在每周一、三、五（在同一位置施用10次）封閉斑貼。斑貼在24h后移除，然后對斑貼點的初始刺激進(jìn)行評分。在10～14天的實驗后，在同一位置或相鄰位置（或兩者）進(jìn)行斑貼激發(fā)。24h后移除斑貼。然后立即、24h和48h后對斑貼點的反應(yīng)進(jìn)行檢查。

結(jié)果：人類暴露在任何配方中都沒有觀察到刺激或致敏[3-4]。

4.8 重復(fù)-劑量毒性

4.8.1 經(jīng)口

(1) 根據(jù)OECD 指南407（嚙齒動物重復(fù)-劑量28-天經(jīng)口毒性），Wistar 大鼠（5只/性別/組）灌胃劑量0，50，200，1000 mg/kg-bw/day 的FWA 5BM 28天。沒有發(fā)現(xiàn)死亡。對兩個性別的高劑量組，與處理相關(guān)的影響是減少了紅細(xì)胞數(shù)（減少了15%～17 %），對兩個性別的中和高劑量組血紅蛋白濃度減少了（減少了8%～23%），對兩個性別的中和高劑量組紅細(xì)胞比容值略微地減少了（減少了6%～21%），在中和高劑量組動物在絕對和或者相對肝、腎和睪丸重量方面分別發(fā)現(xiàn)明顯的差異[5]。

結(jié)果：觀察到有害作用的最低劑量LOAEL=1000mg/kg-bw/day（基于血液學(xué)變化主要反映輕微的溶血性貧血）。

未觀察到有害作用的劑量N O A E L=2 0 0 mg/kg-bw/day

(2) 在一項非GLP實驗中用大鼠對FWA 5BM的重復(fù)-劑量毒性進(jìn)行了研究（IBT實驗室在 1973年，Keplinger 等人在1974年，Lyman等人在1975年）。大鼠用含0、40、200和1000mg/kg FWA 5BM的食物喂養(yǎng)2年（約為0、2、8和40mg/kg bw/day）。

結(jié)果：FWA 5BM對體重沒有影響；對食物的消耗沒有明顯的影響；沒有發(fā)現(xiàn)異常行為反應(yīng)；在動物的死亡總數(shù)上沒有明顯地影響；對測量的血液學(xué)、血液化學(xué)或尿分析參數(shù)沒有影響。處理對器官的組織病理學(xué)檢查方面沒有明顯的影響。對腫瘤的發(fā)生率沒有影響。

NOAEL是最大的實驗劑量=1000mg/kg[3]。

4.8.2 經(jīng)皮

(1) 據(jù)1956年的研究報告介紹，用老鼠的背部區(qū)域進(jìn)行了亞急性實驗[1]，F(xiàn)WA 5BM劑量為每5mg/只動物，暴露處理5天。每個性別每個劑量動物數(shù)量為5只。FWA 5BM的純度大于80%。

結(jié)果：8天后沒有發(fā)現(xiàn)異常。無局部刺激，無再吸收毒性。

(2) 另據(jù)1956年的研究報告介紹，用老鼠的背部區(qū)域進(jìn)行了亞急性實驗[1]，F(xiàn)WA 5BM劑量為每只動物20mg，暴露處理5天。每個性別每個劑量動物數(shù)量為5只。FWA 5BM純度大于80%。

結(jié)果：8天后沒有發(fā)現(xiàn)異常。無局部刺激；無再吸收毒性。

(3) 另據(jù)1961年的研究報告介紹，在大鼠（重量140～171g）的背部區(qū)域進(jìn)行了亞急性實驗[1]，F(xiàn)WA 5BM濃度為5%，劑量為0.4mL/只動物，暴露處理5天。每個性別每個劑量動物數(shù)量為5只。

結(jié)果：8天后沒有發(fā)現(xiàn)異常。局部刺激輕微；無再吸收毒性。

4.9 遺傳毒性

4.9.1 基因突變

(1) 1971年IBT（工業(yè)生物-檢測實驗室）用出生60～70天的12只雄性白化小鼠進(jìn)行了顯性致死實驗。小鼠被分成幾組：無FWA 5BM處理的陰性對照組；用甲磺酸乙酯處理的陽性對照組；用25、50mg/kg FWA 5B M處理的實驗組。

結(jié)果：用FWA 5BM處理對交配指數(shù)沒有影響；對黃體、著床點、早期再吸附和胚胎的數(shù)無影響；對末期再吸收數(shù)量無影響；對突變速率也沒有影響。沒有動物死亡或出現(xiàn)出毒性癥狀。

(2) 1974年Keplinger等人用FWA 5BM對小鼠的顯性致死實驗呈陰性[3]。

(3) McGregor和Ainsworth于1976年用FWA 5BM對鼠傷寒沙門氏菌株TA1535進(jìn)行了一項研究，其實驗結(jié)果為陰性[3]。

(4) 根據(jù)OECD指南471（細(xì)菌回復(fù)突變實驗），鼠傷寒沙門氏菌株A 1535、TA 1537、TA 98、TA100和大腸桿菌株WP2uvrA在有或無S9代謝活化物的情況下暴露于0、33、100、333、2500或5000μg/盤的FWA 5BM中，同時進(jìn)行陰性和陽性對照獲得了預(yù)期的結(jié)果。沒有發(fā)現(xiàn)細(xì)胞毒性。因此，認(rèn)為FWA 5BM在該實驗中不是誘導(dǎo)有機(jī)體基因突變的物質(zhì)[5]。

4.9.2 染色體畸變

4.9.2.1 體外

(1) 據(jù)Kilbey B.J.和McGregor D.B等人在1973年、1975年和1976年的實驗資料[10-12]介紹，毒理學(xué)家用鼠傷寒沙門氏菌TA1535和TA1538菌落，靶基因his（組氨酸），在有或無代謝活化物S9-混合物（雄性大鼠肝臟去線粒體后上層清液和輔酶因子）存在下，進(jìn)行了細(xì)菌回復(fù)突變實驗（例如Ames test）。

結(jié)果和結(jié)論：

無論FWA 5BM有沒有 活化”，菌株都沒有任何誘變活性跡象。

顯微鏡檢驗含有FWA 5BM的實驗盤，結(jié)果顯示存在適當(dāng)?shù)木Γ⒕涞拇笮『蛿?shù)量與陰性對照實驗盤沒有明顯的差異。

在用FWA 5BM和對照物處理后，使用鼠傷寒沙門氏菌TA1535和TA1538每盤（3盤平均）獲得的突變菌落，見表10。

陽性對照：

二氯甲基二乙胺鹽酸鹽和2-乙酰胺基芴在每盤突變數(shù)量上引起增加。在2-乙酰胺基芴的情況下，增加只發(fā)生在代謝活化之后。

結(jié)果：無論FWA 5BM有沒有活化，菌株都沒有任何誘變活性跡象。致基因突變?yōu)殛幮浴?/p>

(2) 另有資料介紹[5]，根據(jù)OECD指南 473（體外哺乳動物染色體畸變實驗），中國倉鼠肺成細(xì)胞(V79)在有或無活化的情況下暴露于濃度范圍在0.1～5mg/mL的FWA 5BM中，F(xiàn)WA 5BM沒有引起染色體畸變[5]。

該實驗中FWA 5BM對染色體畸變呈陰性。

(3) 1975年Kilbey B.J.等人[11]在 熒光增白劑對微生物的致突變性實驗 中介紹，使用酵母菌（釀酒酵母）品系D4和W10，F(xiàn)WA 5BM劑量為100 mg/kg，三平行，對作為二倍體酵母菌細(xì)胞質(zhì)小菌落突變體和有絲分裂基因轉(zhuǎn)換的可能的誘導(dǎo)體的物質(zhì)活性進(jìn)行了研究。

結(jié)論：結(jié)果表明FWA 5BM不能產(chǎn)生誘變或任何遺傳物質(zhì)的變化。

(4) 1975年Kilbey B.J.等人[11]在 熒光增白劑對微生物的致突變性實驗 中介紹，代謝活化系統(tǒng)為大鼠S9（肝勻漿液的去線粒體上清液），用靶基因his（多聚組氨酸），鼠傷寒沙門氏菌TA1530，TA1532，TA1535，TA1538在有或無代謝活化進(jìn)行了細(xì)菌回復(fù)突變實驗。實驗濃度為1000mg/kg。實驗中沙門氏菌株TA1530，TA1532，TA1535，TA1538被暴露于可見光或保存在暗處1h伴有通風(fēng)。

結(jié)果：在暗處生長后或固定相細(xì)胞在光照后，沒有跡象表明誘導(dǎo)突變或生存能力受影響。生長正如細(xì)胞在固定相的滴度所表明的那樣，不受以標(biāo)準(zhǔn)濃度使用的FWA 5BM存在的影響。

表10 不同試驗物質(zhì)處理后的突變菌落

結(jié)論：無論FWA 5BM有沒有活化，菌株都沒有任何致突變活性跡象。遺傳毒性為陰性。

(5) 2014年毒理學(xué)家根據(jù)OECD指南471進(jìn)行了細(xì)菌回復(fù)突變分析實驗[1]，使用大腸桿菌E.coli WP2 uvr A菌株，靶基因trp（色氨酸）。代謝活化方法為來自于苯巴比妥和b-萘黃酮的S9-混合物誘導(dǎo)大鼠肝臟。實驗濃度為33～6666mg/板。同時進(jìn)行對照實驗，實驗為三平行。

結(jié)果：在實驗濃度下用或不用S9混合物，均未發(fā)現(xiàn)FWA 5BM的沉淀。在實驗條件之下，測交品系回復(fù)突變體數(shù)量是在歷史陰性對照數(shù)據(jù)范圍之內(nèi)。FWA 5BM被認(rèn)為是非-誘變性物質(zhì)。遺傳毒性為陰性。

4.9.2.2 體內(nèi)

(1) 1974年的研究報告介紹，按照OECD指南474（哺乳動物紅細(xì)胞微核實驗），給中國倉鼠（3只/性別/組）經(jīng)口連續(xù)灌胃劑量為1250、2500或5000 mg/kg-bw/day 的FWA 5BM兩天。同時進(jìn)行陽性和陰性對照實驗。在最后服藥24h后獲取骨髓。每只動物檢查1000個細(xì)胞以尋找細(xì)胞核異常，包括單純的Jolly體、紅細(xì)胞中的片段、微核和漸進(jìn)性壞死細(xì)胞[5]。

結(jié)果：處理對細(xì)胞核異常的發(fā)生率沒有影響。對每一組動物細(xì)胞核異常的總的百分?jǐn)?shù)范圍是：陰性對照組為0～0.3%，在1250mg/kg組為0～0.4%，在2500mg/kg組為0～0.2%，在5000mg/kg組為0～0.2%。單一的Jolly體（0～0.3%）和其他特殊異常（0～0.1%）的發(fā)生率在對照和處理動物之間是相似的。

陽性對照組異常細(xì)胞的發(fā)生率有明顯的增加。在每一個陽性對照中總的異常發(fā)生率為7.4%～14.3%。記錄在陽性對照組的主要異常是單一的Jolly體 (發(fā)生率5.2%～10.2%)、紅細(xì)胞中細(xì)胞核片段（發(fā)生率0.7%～1.9%）和有核紅細(xì)胞（成紅細(xì)胞）中的微核（發(fā)生率0.8%～2.6%）[4]。

結(jié)論：在該實驗中FWA 5BM不能引起染色體畸變。

(2) 1974年的研究報告介紹，按照OECD指南475（哺乳動物骨髓染色體畸變檢驗），中國倉鼠（2只/性別/組）經(jīng)口連續(xù)灌胃1250、2500或5000 mg/kg-bw/day劑量的FWA 5BM兩天，每天給藥一次。同時進(jìn)行對照實驗。倉鼠在最后服藥2h后腹腔注射秋水仙胺，在注射秋水仙胺后4h獲取骨髓。檢查每只動物100個中期板，以尋求染色單體-核染色體-類型畸變、裂隙和粉化[5]。

結(jié)果：在最低劑量組的雌性發(fā)現(xiàn)每400個細(xì)胞（0.25%）有一個出現(xiàn)染色單體型畸變（染色單體斷裂）。在賦形劑、2500或5000 mg/kg劑量組沒有發(fā)現(xiàn)這些染色體畸變。在所有劑量組都沒有發(fā)現(xiàn)染色體畸變或粉碎。在載玻片上來自于用1250mg/kg（2.25%）、2500mg/kg（0.5%）和 5000mg/kg（1.75%）劑量處理的動物的染色體裂隙發(fā)生率與賦形劑對照組的動物（1.25%）沒有差別。

這項研究中陽性對照引起了所有畸變類型（染色單體斷裂發(fā)生率14.25%、染色單體交換發(fā)生率17.5% 、染色單體型畸變發(fā)生率 1.0%、染色單體裂隙發(fā)生率15.25%、粉碎發(fā)生率 2.75%）明顯的增加[4]。

結(jié)論：在該實驗中FWA 5BM不能引起染色體畸變。

(3) 為了評價FWA 5BM對雄性生殖細(xì)胞的細(xì)胞毒性或致突變性，1974年毒理學(xué)家按照OECD指南478（遺傳毒理學(xué)：嚙齒動物顯性致死實驗）進(jìn)行了FWA 5BM的顯性致死實驗[1]。實驗動物為老鼠（品系NMRI），每個劑量給藥動物數(shù)為12只雄性。劑量為1650和5000mg/kg，給藥途徑為經(jīng)口灌胃。實驗持續(xù)時間為6周。同時進(jìn)行對照實驗。

交配時間：每組有12只雄性，每組的每一個被處理后立即放入裝有3只未處理的雌性老鼠的籠子里。在一周末，將雌性從籠子中移出，換成例外一組3只雌性。該過程持續(xù)進(jìn)行6周。每日對雌性是否成功受孕進(jìn)行檢查，有陰道栓表明成功受孕。觀察到陰道栓的那一天被認(rèn)定為孕 0天”。整個的6個

交配時間 由所有從A-精原細(xì)胞到成熟精子的生殖細(xì)胞（胚細(xì)胞，受精卵）的成熟階段組成，。

觀察和記錄雄性在給藥之后第一周的全身狀況、癥狀和體重變化。雌性在孕14天被尸檢，并對其后代進(jìn)行檢查。

結(jié)果：所有實驗組，其交配率、著床數(shù)量和胚胎死亡有可比性。對雄性沒有觀察到不適的癥狀。

結(jié)論：FWA 5BM的基因毒性（遺傳毒性）為陰性，不會引起染色體畸變，不是致突變物。

(4) 1975年Muller等人用經(jīng)口濃度高達(dá)5000 mg/kg的FWA 5BM對中國倉鼠骨髓的細(xì)胞遺傳性和核異常性進(jìn)行了實驗，結(jié)果呈陰性[3]。