胸腔積液γ-干擾素釋放試驗(yàn)在結(jié)核性胸膜炎診斷中的價值*

曾 君，王光明△，王 港，吳本清，張潤玲，湯冬娥，戴 勇，朱 鵬

(1.深圳市光明新區(qū)中心醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東深圳 518107；2.深圳市人民醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)研究中心，廣東深圳 518020；3.深圳市坪山區(qū)人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，廣東深圳 518000)

結(jié)核性胸膜炎是一種常見的結(jié)核分枝桿菌感染疾病，可在任何年齡段發(fā)病，胸腔積液是主要并發(fā)癥之一。近年來結(jié)核病的發(fā)病率呈明顯上升趨勢，有研究報道滲出性胸腔積液中約有54.8%為結(jié)核性胸膜炎引起，對該病的診斷主要依靠影像學(xué)、實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)、病理學(xué)等檢查，但實(shí)際臨床工作中存在諸多難題[1]。近年來，體外γ-干擾素釋放試驗(yàn)(IGRA)受到國內(nèi)外臨床醫(yī)務(wù)工作者的高度重視，它是一種結(jié)核分枝桿菌感染的體外免疫檢測新方法，靈敏度和特異度均較高。本研究通過分析105例疑似結(jié)核性胸膜炎患者的胸腔積液IGRA檢測數(shù)據(jù)，綜合評價胸腔積液IGRA在結(jié)核性胸膜炎患者中的診斷價值，為IGRA用于臨床診斷結(jié)核性胸膜炎提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2016年1-12月胸腔積液患者105例為研究對象，年齡19～92歲，其中男69例，女36例。結(jié)核性胸膜炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)參考中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《肺結(jié)核診斷》(WS 288-2008)。經(jīng)臨床診斷為結(jié)核性胸膜炎患者52例納入結(jié)核組；非結(jié)核性胸膜炎患者53例，其中IGRA結(jié)果陰性的42例患者納入IGRA陰性-非結(jié)核組；IGRA結(jié)果陽性的11例患者納入IGRA陽性-非結(jié)核組。非結(jié)核組包括肺部感染性疾病、胸腔積液、胸膜炎、癌性胸腔積液患者，均否定既往有結(jié)核感染史。

1.2儀器與試劑 本研究的主要儀器是ESCO-170B型二氧化碳培養(yǎng)箱，中科中佳SC-3612型低速離心機(jī)，雷杜RT6500酶標(biāo)儀，上海力康生物安全柜；檢測試劑盒由武漢海吉力生物科技有限公司提供，陰性刺激劑為磷酸鹽緩沖液(PBS)，結(jié)核刺激劑為PBS加ESAT6-CFP-10融合抗原，陽性刺激劑為PBS加外源凝集素。

1.3胸腔積液IGRA檢測 收集無菌操作穿刺胸腔積液20～50 mL，置于無菌離心管中，3 000 r/min離心5 min，去上清液，并留取1.5 mL的沉淀懸液，混勻后分別加入到陰性對照管(N)、陽性對照管(P)、結(jié)核刺激管(T)3種培養(yǎng)管中，每管0.5 mL，并加入對應(yīng)的刺激劑；輕柔混勻后放入37 ℃二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)(22±2)h，培養(yǎng)后的胸腔積液以3 000 r/min離心5 min；吸取上清，以ELISA 方法檢測人γ干擾素(IFN-γ) 水平，所有操作均嚴(yán)格按照IGRA診斷試劑盒說明書進(jìn)行。IGRA檢測陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核刺激劑干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.35 IU/mL，并且陽性對照干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.50 IU/mL；IGRA檢測陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)是結(jié)核刺激劑干擾素水平減去陰性對照干擾素水平小于0.35 IU/mL，并且陽性對照干擾素水平減去陰性對照干擾素水平大于或等于0.50 IU/mL。

2 結(jié) 果

105例胸腔積液患者胸腔積液IGRA全部檢測成功，其中IGRA陽性結(jié)果63例，陰性結(jié)果42例；結(jié)核組中陰性對照干擾素水平明顯高于IGRA陰性-非結(jié)核組(t=0.001 6)和IGRA陽性-非結(jié)核組(t=0.001 7)陰性對照干擾素水平；且結(jié)核組結(jié)核刺激劑干擾素水平明顯高于IGRA陰性-非結(jié)核組(t=6.327 61×10-8)和IGRA陽性-非結(jié)核組(t=5.906 37×10-7)結(jié)核刺激劑干擾素水平，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組胸腔積液IGRA干擾素水平比較(IU/mL)

3 討 論

IGRA在結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷中廣泛開展，受到國內(nèi)外臨床醫(yī)務(wù)人員的高度重視。IGRA的原理是結(jié)核分枝桿菌感染患者的體液中存在結(jié)核特異效應(yīng)淋巴細(xì)胞，該細(xì)胞受到結(jié)核分枝桿菌特異抗原刺激后分泌IFN-γ，實(shí)驗(yàn)室通過檢測刺激培養(yǎng)后的體液IFN-γ水平來判斷機(jī)體結(jié)核分枝桿菌感染情況[2]。WILKINSON等[3]的研究表明結(jié)核性患者的胸腔積液中，抗原特異性T淋巴細(xì)胞比外周血中高出10倍，理論上講是有希望通過IGRA將其與非結(jié)核性胸腔積液鑒別開來。ARIGA等[4]的研究結(jié)果表明，胸腔積液IGRA檢測能夠準(zhǔn)確迅速地診斷活動性結(jié)核性胸膜炎。

目前，國內(nèi)外有大量的文章討論IGRA檢測結(jié)果對結(jié)核病診斷的價值[5-6]，諸多文獻(xiàn)表明IGRA的特異度及靈敏度都較高[7-8]，也有文獻(xiàn)報道IGRA聯(lián)合結(jié)核分枝桿菌-DNA或腺苷脫氨酶檢測結(jié)果能夠有效提高診斷率[9]。而極少有研究報道IGRA檢測值在結(jié)核性胸膜炎中的診斷價值，本研究顯示結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液IGRA檢測陰性對照干擾素水平明顯高于非結(jié)核性胸膜炎患者(P<0.05)，說明結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中存在分泌干擾素的細(xì)胞，使結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液干擾素基礎(chǔ)水平增高，與石瑞如等[10]的研究報道相同。本研究結(jié)核性胸膜患者胸腔積液IGRA檢測結(jié)核刺激劑干擾素水平明顯高于非結(jié)核性胸膜炎患者(P<0.05)。因此，通過綜合分析胸腔積液IGRA檢測陰性對照及結(jié)核刺激劑干擾素水平能夠有效診斷結(jié)核性胸膜炎，體現(xiàn)胸腔積液IGRA檢測值的臨床應(yīng)用價值。