基于生物堿含量測定評價江油地區(qū)附子商品的品質(zhì)現(xiàn)狀

唐雪梅 趙雪梅 謝慶璐 金艷 馬蓉 冉連輝

（1江油市中醫(yī)醫(yī)院藥劑科 四川 江油 621700）（2江油市中醫(yī)醫(yī)院中醫(yī)科 四川 江油 621700）

江油作為附子的道地產(chǎn)區(qū)，其種植加工歷史可追溯到唐代以前，迄今已有1300余年。產(chǎn)地加工技術(shù)成熟。附子生品毒性大，一般需經(jīng)炮制加工后方能入藥。隨著飲片生產(chǎn)的標準管理與市場競爭的優(yōu)勝劣汰，江油地區(qū)現(xiàn)有通過國家中醫(yī)藥管理局驗收的附子飲片加工企業(yè)三家，具一定規(guī)模的散戶數(shù)家，附子的減毒存效為炮制重點。2015版《中國藥典》、2015版《四川省中藥飲片炮制規(guī)范》均將單酯、雙酯生物堿含量測定作為附子質(zhì)控的重要指標，文中雙酯型生物堿為烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿百分含量之和。雙酯型生物堿經(jīng)加工炮制后水解成毒性較小的單酯型生物堿，文中單酯型生物堿為苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿百分含量之和。本研究通過對江油地區(qū)不同廠家生產(chǎn)的三個炮制品種的江油附子商品進行單酯、雙酯型生物堿含量測定，摸清江油種植附子商品的品質(zhì)現(xiàn)狀。

1.實驗部分

1.1 儀器與材料

HPLC 色譜儀（島津LC-20A）；烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭堿、苯甲酰新烏頭堿對照品均購自中國藥品生物制品檢定所。乙腈為色譜純，其余化學試劑均為分析純；實驗材料購自生產(chǎn)廠家，產(chǎn)地為江油，經(jīng)課題組鑒定為毛茛科植物烏頭(Aconitum carmichaeli Debx)子根經(jīng)不同炮制方法而成的附子商品。

1.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-四氫呋喃（25：15）為流動相A，以0.1mol／L醋酸銨溶液（每1000ml加冰醋酸0.5ml）為流動相B，按下表中的規(guī)定進行梯度洗脫，檢測波長為235nm。

時間（分鐘） 流動相A（%） 流動相B（%）0～48 15→26 85→74 48～49 26→35 74→65 49～58 35 65 58～65 35→15 65→85

1.3 對照品溶液的制備

取烏頭堿、新烏頭堿、次烏頭堿、苯甲酰新烏頭原堿、苯甲酰烏頭原堿、苯甲酰次烏頭原堿對照品適量，精密稱定，加異丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液制成每1ml各含10μg的混合溶液，即得。

1.4 供試品溶液的制備

取本品粉末(過三號篩)約2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加氨試液3ml，精密加入異丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液50ml，稱定重量，超聲處理(功率300W，頻率40kHz，水溫在25℃以下)30分鐘，放冷，再稱定重量，用異丙醇-乙酸乙酯（1：1）混合溶液補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續(xù)濾液25ml，40℃以下減壓回收溶劑至干，殘渣精密加入異丙醇-二氯甲烷（1：1）混合溶液3ml溶解，濾過，取續(xù)濾液，即得。

1.5 標準曲線的繪制

將上述對照品溶液梯度稀釋成6個濃度的對照品溶液，分別精密吸取10μl，注入液相色譜儀，測定。以濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，以線性回歸方法繪制標準曲線圖，回歸方程依次為：

注：1-苯甲酰新烏頭原堿；2-苯甲酰烏頭原堿；3-苯甲酰次烏頭原堿；4-新烏頭堿；5-次烏頭堿；6-烏頭堿

1.6 樣品測定

分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。經(jīng)炮制后生產(chǎn)的各種附子商品，其酯型生物堿的含量均符合相關(guān)規(guī)定，測定結(jié)果見表1。

表1 不同廠家附子商品的雙酯型、單酯型生物堿含量測定結(jié)果

2.討論

附子炮制減毒的同時，也造成了有效成分的流失，如何平衡減毒存效為附子研究的重中之重；附子的炮制規(guī)格眾多，除文中提到的炮制規(guī)格以外，還有近10余種；江油道地產(chǎn)區(qū)形成了附子特有多道工序的產(chǎn)地加工(炮制)技術(shù)，在多個環(huán)節(jié)能夠?qū)Ω阶又袆《镜臑躅^堿類雙酯型生物堿起到很好的炮制解毒作用，成為臨床安全使用附子的重要保證,成為江油附子譽滿全球的必要保證[7]。江油地區(qū)炮制加工更是歷史悠久，在飲片生產(chǎn)標準化的同時，傳統(tǒng)工藝仍占有一席之地，說明傳統(tǒng)炮制仍有優(yōu)勢所在。但附子飲片炮制加工存在非道地產(chǎn)地非規(guī)范工藝生產(chǎn)附子[8]，影響江油附子的質(zhì)量和品牌，如何正確對待附子炮制散戶加工廠，亟待解決，以利于附子炮制加工更好的發(fā)展。

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典一部[S].2015年版.北京: 中國醫(yī)藥科技出版社，191-193.

[2]四川省中藥飲片炮制規(guī)范[M].2015年版.四川：四川科學技術(shù)出版社.

[3]劉智，張大方，曲曉波，等.炮制對烏頭生物堿的影響及毒性作用研究[J].時珍國醫(yī)國藥，2012,5（23）：1113-1114.

[4]考玉萍，劉滿軍，袁秋貞.附子化學成分和藥理作用[J].陜西中醫(yī)，2010:1658-1660．

[5]吳克紅.附子的化學成分及其活性研究[D].中國中醫(yī)科學院，2013．

[6]徐霄.附子化學成分的研究現(xiàn)狀[J].中國中醫(yī)藥現(xiàn)代遠程教育，2014，(20) : 140-141．

[7]黃勤挽.附子炮制歷史沿革研究[J].中國實驗方劑學雜志，2011.12（23）:269-271.

[8]陳彥琳.道地藥材附子炮制加工規(guī)范化探討[J].中國現(xiàn)代中藥，2009.11(7):41-43.