頭孢克肟脂質(zhì)體的制備工藝研究

陳淑云 邱禮臻 龐國棉 李曉玲 朱岳鑫

（1廣東省中醫(yī)院廣州中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院大學(xué)城藥劑科 廣東 廣州 510006）（2廣東藥科大學(xué)藥學(xué)院 廣東 廣州 510006）

頭孢克肟（cefixime）是由日本藤澤藥品工業(yè)株式會(huì)社于上世紀(jì)80年代初合成開發(fā)的β-內(nèi)酰胺類第三代頭孢類廣譜抗生素[1-3]，其對淋球菌、鏈球菌、大腸桿菌、變形桿菌等多種菌屬均有較強(qiáng)的殺菌能力，臨床上廣泛應(yīng)用于敏感菌引起的多種疾病。目前，頭孢克肟的劑型主要有膠囊劑、散劑、顆粒劑、片劑等形式，而頭孢克肟易受外界環(huán)境（光、水、熱等）影響，使其功能官能團(tuán)發(fā)生降解，從而減小其抗菌活性和增加過敏風(fēng)險(xiǎn)，為能使頭孢克肟藥物劑型能減毒增效，擴(kuò)大其臨床應(yīng)用范圍，本文將對頭孢克肟制成脂質(zhì)體[4-6]，提高其穩(wěn)定性和生物利用度，以期開發(fā)出一種適用于臨床的新劑型。

1.試驗(yàn)和設(shè)備

1.1 實(shí)驗(yàn)試劑

頭孢克肟原料藥（湖北康寶泰精細(xì)化工有限公司提供）；頭孢克肟對照品（中國藥品生物制品鑒定所）；葡聚糖凝膠G-50(上海伯奧生物科技有限公司)；卵磷脂(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；膽固醇(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；膽酸鈉(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；其余試劑均為分析純，水為雙蒸水。

1.2 儀器設(shè)備

實(shí)驗(yàn)中主要的設(shè)備高效液相色譜儀HPLC（1260型，美國Agilent公司）；精密電子天平（JJ224BC型，江蘇雙杰測試儀器廠）；真空干燥箱（ZK-82A型，上海實(shí)驗(yàn)儀器總廠）；電熱恒溫水浴鍋（HH-8A型，北京科偉儀器公司）；PH 計(jì)（PHS-3C型，上海儀電科學(xué)儀器公司）。WH-2微型漩渦混合儀(上海滬西分析儀器廠)；超聲破碎乳化儀；SHZ-Ⅲ型循環(huán)水真空泵(上海亞榮生化儀器廠)；HP-01抽濾儀；恒溫磁力攪拌器(TH2-82A上海)；PH值測定儀(PB-10)；600三用水箱。

2.實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1 頭孢克肟含量測定

2.1.1 色譜條件 在全波長下對頭孢克肟溶液進(jìn)行掃描，其在254nm條件下具有最高吸收峰，HPLC所用色譜柱為Kromsail-C18柱（250*4.6mm，5um），流動(dòng)相選用乙腈-0.2%磷酸二氫鈉溶液(20∶80)（稀磷酸調(diào)節(jié)至4.0），柱溫為35℃，進(jìn)樣量為20μL，流速為1.0mL/min。

2.1.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 準(zhǔn)確稱取頭孢克肟對照品10.00mg于20ml容量瓶，用20%乙腈定容至刻度線，搖勻即得濃度為0.5mg/ml的對照品溶液。分別量取對照品溶液母液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml置于10ml容量瓶中，并用20%乙腈稀釋至刻度線，搖勻備用。按照‘2.1.1’項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，記錄頭孢克肟濃度（X）相應(yīng)的峰面積（Y），確定標(biāo)準(zhǔn)曲線：Y=2580.6X+202.14(R2=1.0000)，頭孢克肟在濃度為50-350mg/L之間線性關(guān)系良好。

2.2 頭孢克肟脂質(zhì)體制備工藝

2.2.1 頭孢克肟微囊評價(jià)指標(biāo) 頭孢克肟脂質(zhì)體評價(jià)指標(biāo)采用脂質(zhì)體包封率（EE%）和載藥量(LD%)進(jìn)行綜合評價(jià)。包封率測定方法采用葡聚糖凝膠層析法分離游離藥物和脂質(zhì)體，通過預(yù)實(shí)驗(yàn)確定收集含藥脂質(zhì)體洗脫液部位，精密量取4ml于10ml容量瓶中，用乙醇破乳后用20%乙腈定容，搖勻，按“2.1.1項(xiàng)下”進(jìn)樣測定峰面積，按“2.1.2項(xiàng)下”計(jì)算相應(yīng)濃度C1：(ug/mL)。另取制備好的頭孢克肟脂質(zhì)體5.0ml直接用20%乙腈定容至200ml，精密量取4ml于10ml容量中，用乙醇溶液破乳后定容。搖勻，同樣測定峰面積A，并計(jì)算藥物濃度C2：(ug/mL)。包封率EE%=C1/C2：×100%。載藥量取樣本適量，按上述方法測藥物濃度，載藥量DL%=WD/WP×100%，其中WD為脂質(zhì)體包裹的藥物量，WP為載體用量。

2.2.2 頭孢克肟脂質(zhì)體制備工藝 定量稱取膽固醇、卵磷脂、頭孢克肟于圓底燒瓶中，加入l0.0ml氯仿-甲醇(1：1)復(fù)合溶劑于混合儀上充分溶解后，于35℃恒溫水浴中旋轉(zhuǎn)減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，形成類脂薄膜，繼續(xù)用氮?dú)獯蹈蓺堄嗳軇?。再加入含有定量膽酸鈉的水和介質(zhì)溶液l0.0ml至燒瓶中，旋轉(zhuǎn)繼續(xù)洗膜l小時(shí)，使得脂質(zhì)膜充分溶脹水化，得到脂質(zhì)體混懸液。將混懸液分別置于冰水浴中探針式間斷超聲一段時(shí)間后，室溫靜置后用0.2um微孔濾膜濾過除去雜質(zhì)即得頭孢克肟脂質(zhì)體。

2.2.3 優(yōu)選頭孢克肟脂質(zhì)體制備工藝 根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，確定影響頭孢克肟脂質(zhì)體制備的主要因素為藥物：卵磷脂比、膽固醇：卵磷脂、膽酸鈉：卵磷脂、水和介質(zhì)pH值，針對4個(gè)主要因素選取主要水平，并以綜合評分評價(jià)頭孢克肟脂質(zhì)體質(zhì)量（綜合評分=包封率×50%+載藥量×50%）進(jìn)行評價(jià)，采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)進(jìn)行工藝優(yōu)選。結(jié)果如下：

表1 正交試驗(yàn)主要因素與水平表

表2 頭孢克肟脂質(zhì)體制備正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 頭孢克肟脂質(zhì)體綜合評分方差分析表

由表2結(jié)果直觀分析可得，以頭孢克肟脂質(zhì)體包封率和載藥量綜合評分為考察指標(biāo)，三個(gè)因素影響程度依次為C＞B＞A＞D，且A3＞A2＞A1，B1＞ B2＞B3，C1＞C2＞ C3，D3＞D1＞D2可得出最佳工藝條件為A3B1C1D3。

由表3方差分析可得：以頭孢克肟脂質(zhì)體包封率和載藥量綜合評分為考察指標(biāo)時(shí)，因素B和C對試驗(yàn)結(jié)果有顯著性影響，因素A和D對實(shí)驗(yàn)結(jié)果均無顯著性影響,因此最佳制備工藝為A3 B1C1D3，即藥物：卵磷脂比為1：45、膽固醇：卵磷脂為1∶4、膽酸鈉：卵磷脂為1∶1、水和介質(zhì)pH值為7.5。

2.2.4 驗(yàn)證最優(yōu)條件 采用正交試驗(yàn)結(jié)果最佳工藝制備6份頭孢克肟脂質(zhì)體進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果得到頭孢克肟脂質(zhì)體包封率、載藥量和綜合評分，見表4。驗(yàn)證試驗(yàn)中制備的頭孢克肟脂質(zhì)體包封率平均值為89.63%，其載藥量為1.93%，綜合評分為45.78%。

表4 頭孢克肟脂質(zhì)體工藝驗(yàn)證

3.討論

通過正交試驗(yàn)[7-9]對頭孢克肟脂質(zhì)體工藝進(jìn)行篩選，其綜合評分為45.78%，而脂質(zhì)體包封率平均值為89.63%，其載藥量為1.93%，得到較為可靠的質(zhì)量。包封率是脂質(zhì)體質(zhì)量控制的重要指標(biāo)，反應(yīng)藥物被載體包封的程度及藥物和載體的濃度，由于脂質(zhì)體比藥物粒子在體積上差異較大，故考慮用葡聚糖如Sephadex G-50柱層析作為區(qū)分和富集方法。經(jīng)皮給藥是藥物通過皮膚吸收的一種給藥方法，藥物應(yīng)用于皮膚上后，通過皮膚擴(kuò)散，由毛細(xì)血管吸收進(jìn)入體循環(huán)的過程稱經(jīng)皮吸收或透皮吸收。脂質(zhì)體具有雙重特性一親水性和疏水性，因此可改善藥物對皮膚的通透性，并可促進(jìn)表皮及真皮組織的吸收，增加藥物對角質(zhì)層的穿透性。將頭孢克肟制成脂質(zhì)體，經(jīng)皮給藥可避免肝臟首過效應(yīng)，且藥物吸收不經(jīng)胃腸道，同時(shí)能長時(shí)間持續(xù)擴(kuò)散進(jìn)入血液循環(huán)，減少用藥次數(shù)，改善患者用藥順應(yīng)性，提高治療效果，是一種理想的劑型選擇。本文制備的頭孢克肟脂質(zhì)體質(zhì)量可靠，擴(kuò)展了臨床應(yīng)用劑型，具有良好的前景。

[1]張明發(fā)，季珉.國內(nèi)對頭孢克肟的臨床研究與評價(jià)[J].抗感染藥學(xué)，2010，7(1):1-9.

[2]邊磊，宋敏，杭太俊，等.乙腈輔助電噴霧LC-MS/MS法分析頭孢克肟中的有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志，2010，30(5):872-878.

[3]Yu RX,Yin Y,Wang GQ,et al.Worldwide susceptibility rates of Neisseria gonorrhoeae isolates to cefixime and cefpodoxime: a systematic review and meta-analysis.PLoS One.2014 Jan 31;9(1):e87849.

[4]李賽侯，冬枝，孫敏捷，等.殼聚糖包覆左旋多巴脂質(zhì)體凍干制劑的制備及大鼠口服藥動(dòng)學(xué)[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，40(5):406-411.

[5]鄭杭生，黃繩武，李范珠，等.鹽酸青藤堿脂質(zhì)體的制備工藝研究[J].中草藥，2013，44(4):408-413.

[6]劉夢嬌，符華林，付強(qiáng)，等.硫酸頭孢喹肟脂質(zhì)體的制備工藝[J].過程工程學(xué)報(bào)，2013，13(5):877-881.

[7]于蓮，張傳美，李愛臣，等.參芎明膠微球的制備工藝研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2010，21(3):667-668.

[8]杜旭，馮涌，曹曉云.高效液相色譜法測定頭孢克肟及其片劑和膠囊劑的含量和有關(guān)物質(zhì)[J].天津藥學(xué)，2009，21(3):27-29.

[9]Raj R,Raj PM,Ram A.Nanosized ethanol based malleable liposomes of cytarabine to accentuate transdermal delivery:formulation optimization, in vitro skin permeation and in vivo bioavailability[J].Artif Cells Nanomed Biotechnol,2018.