H型高血壓患者M(jìn)THFR基因C677T多態(tài)性與頸動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性研究

陳良余，毛雨，周揚(yáng)，費(fèi)亮，王健，鄧炳輝，王懿靜，陳蒙蒙，虞路

作者單位：1 239000 滁州,安徽省滁州市第一人民醫(yī)院心血管內(nèi)科

伴有高同型半胱氨酸（HCY）血癥（HCY≥10 μmol/L）的高血壓被稱為H型高血壓[1]。中國腦卒中一級預(yù)防研究（CSPPT）基線數(shù)據(jù)表明[2]，H型高血壓約占我國成年高血壓患者的80.3%。亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）是HCY代謝的關(guān)鍵酶，是影響血同型半胱氨酸水平的重要因素。編碼MTHFR的基因具有多態(tài)性，以其677位點(diǎn)C突變與否，存在CC型（野生型），CT型（部分突變型）和TT型（突變型），突變型患者M(jìn)THFR活性下降[3,4]。中國人群高血壓與高HCY同時存在，腦梗死風(fēng)險(xiǎn)增加11.7倍[5]。頸動脈作為全身動脈的窗口，其內(nèi)膜中層厚度（IMT）增厚是反應(yīng)早期動脈粥樣硬化的可靠指標(biāo)，可預(yù)測腦梗死的發(fā)生[6,7]。諸多研究[4,8,9]表明MTHFR C677T基因多態(tài)性與H型高血壓患者腦梗死發(fā)病率有關(guān)，但鮮有MTHFR基因C677T多態(tài)性與H型高血壓患者頸動脈IMT的相關(guān)性研究。本試驗(yàn)旨在研究H型高血壓MTHFR C677T基因多態(tài)性與頸動脈IMT的關(guān)系，為早期發(fā)現(xiàn)H型高血壓患者可能存在的動脈粥樣硬化，從而甄別出H型高血壓患者中腦梗死高危人群提供思路。

1 資料與方法

1.1 研究對象及分組 收集2015年9月～2017年7月于滁州市第一人民醫(yī)院住院治療的H型高血壓病患者159例， 平均年齡（73.38±9.60）歲， 其中男性81例，女性78例，標(biāo)記為A組。同時隨機(jī)選取同期非H型高血壓住院患者156例，平均年齡（71.42±9.99）歲，其中男性90例，女性66例，標(biāo)記為B組。高血壓的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照2010年 《中國高血壓防治指南》[10]的診斷標(biāo)準(zhǔn)：收縮壓（SBP）≥140 mmHg 和（或）舒張壓（DBP）≥90 mmHg（1 mmHg=0.133kPa）。H型高血壓診斷標(biāo)準(zhǔn)[11]：伴有HCY＞10 μmol/L的原發(fā)性高血壓（HCY采用高效液相色譜法測定）。排除標(biāo)準(zhǔn)：①近6個月來服用葉酸及B族維生素者；②繼發(fā)性高血壓；③嚴(yán)重肝腎功能不全；④腫瘤晚期患者；⑤具有明確感染灶的急慢性感染；⑥入院前已服用他汀、貝特類、血脂康等影響血脂或膽固醇藥物；⑦貧血患者、孕婦等可能存在低葉酸狀態(tài)。

1.2 觀察指標(biāo) 收集研究對象的一般資料，包括年齡、性別、體質(zhì)指數(shù)（BMI）、吸煙史（既往吸煙已戒煙仍視為有吸煙史）、糖尿病史、入院收縮壓（SBP）和入院舒張壓（DBP）等。所有研究對象入院次日清晨空腹血測定肝腎功能、三酰甘油 （TG）、總膽固醇 （TC） 、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）。生化項(xiàng)目均采用酶比色法測定，由我院檢驗(yàn)科完成，儀器為型號為：貝克曼AU680全自動生化分析儀。

1.3 MTHFR基因C677T多態(tài)性檢測 由合肥金域醫(yī)學(xué)研究所完成。測定采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-單堿基延伸（PCR-SNE）法分析方法，PCR擴(kuò)增引物序列為：正向5’-CGAAGCAGGGAGCTTTGAG-3’和反向5’-CGGAAGAATGTGCAGCCTCA-3’。對擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行微測序（熒光標(biāo)記單堿基延長技術(shù)），行毛細(xì)管電泳，根據(jù)峰的移動位置確定延伸產(chǎn)物所對應(yīng)的單基因位點(diǎn)，根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿基種類，從而確定基因型為CC型、CT型和TT型。

1.4 頸動脈IMT的測量 使用邁瑞DC8彩色多普勒超聲檢查高頻探頭（7.5～10 HZ）測定頸動脈IMT。檢查時患者取仰臥位，頭偏向檢查者對面約45°。超聲圖像可見相對較低回聲分隔得兩條平行亮線，測量兩線距離即為頸動脈IMT。分別測量左右頸總動脈分叉下1 cm及以此近遠(yuǎn)心端各1 cm共6個點(diǎn)頸動脈IMT，取其平均值代表頸動脈IMT。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。正態(tài)分布計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩組組間比較采用t檢驗(yàn)。計(jì)數(shù)資料以百分率（%）表示，比較采用χ2檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析評價頸動脈IMT與其他變量之間的相關(guān)性。使用多元線性逐步回歸分析探索IMT的危險(xiǎn)因素。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組間一般資料的比較 兩組患者在年齡、性別構(gòu)成、吸煙比率、體質(zhì)指數(shù)、糖尿病患病率、SBP、DBP、LDL-C、HDL-C和TG比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均＞0.05）。兩組資料具有可比性（表1）。

2.2 兩組間基因型及頸動脈IMT比較 A組中MTHFR突變型（CT型、TT型）頻率較B組高，而野生型（CC型）頻率較B組低（χ2＝20.42，P＜0.01）。以等位基因頻數(shù)統(tǒng)計(jì)（CC型計(jì)為0，CT型計(jì)為1，TT型計(jì)為2），A組等位基因T頻數(shù)顯著高于B組（P＜0.01）。A組頸動脈IMT顯著高于B組（P=0.016）（表2）。

表1 兩組間一般資料比較（±s）

表1 兩組間一般資料比較（±s）

注：BMI：體質(zhì)指數(shù)；SBP：收縮壓；DBP：舒張壓；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；TG：三酰甘油

項(xiàng)目 A組（n=159） B組（n=156） P值年齡（歲） 73.38±9.60 71.42±9.99 0.077性別（男/女） 81/78 90/66 0.229吸煙（n，%） 42（26.41） 36（23.10） 0.49 BMI（kg/m2） 24.07±3.43 24.15±2.31 0.805糖尿病（n，%） 51（32.07） 60（38.46） 0.236 SBP（mmHg） 151.53±11.29 151.27±11.29 0.839 DBP（mmHg） 88.85±13.00 86.96±12.04 0.182 LDL-C（mmol/L） 2.61±0.86 2.60±0.70 0.772 HDL-C（mmol/L） 1.12±0.24 1.16±0.31 0.169 TG（mmol/L） 1.68±1.42 1.61±0.55 0.555

2.3 頸動脈IMT與各指標(biāo)的相關(guān)分析 以頸動脈IMT為因變量，MTHFR C677T等位基因T頻數(shù)、LDL-C、HDL-C、TG、年齡、BMI為相關(guān)變量行Pearson相關(guān)分析，結(jié)果顯示IMT與T頻數(shù)、LDL-C正相關(guān)（P均＜0.01），與HDL-C負(fù)相關(guān)（P＜0.01）（表3）。

2.4 頸動脈IMT的多元線性回歸分析 以頸動脈IMT為因變量，以性別、糖尿病、吸煙史、MTHFR C677T等位基因T頻數(shù)、LDL-C、HDL-C、TG、年齡、BMI、SBP、DBP等為自變量，行多元線性逐步回歸分析。二分類變量賦值如下。性別：男=1，女=0；吸煙史：有吸煙史=1，無吸煙史=0；糖尿?。夯加刑悄虿?1，無糖尿病=0。結(jié)果顯示，判定系數(shù)R2=0.701，提示擬優(yōu)合度較高，因變量與自變量線性關(guān)系顯著，可建立線性回歸方程。T頻數(shù)、LDL-C、HDL-C是頸動脈IMT的獨(dú)立危險(xiǎn)系數(shù)（B分別為0.046、0.029和-0.067，P均＜0.01），提示MTHFR C677T基因突變型較野生型頸動脈IMT增厚，LDL-C每升高1 mmol/L或頸動脈IMT增厚0.029 mm；而HDL-C每降低1 mmol/L，頸動脈IMT增厚0.067 mm（表4）。

3 討論

表2 兩組間MTHFR C677T基因型構(gòu)成、等位基因T頻數(shù)及頸動脈IMT比較

表3 頸動脈IMT與各指標(biāo)的相關(guān)分析

表4 頸動脈IMT的多元線性逐步回歸分析

我國具有龐大的高血壓病群體，據(jù)《中國心血管健康指數(shù)（2017）》數(shù)據(jù)顯示，全國有心血管病患者2.9億，其中高血壓2.7億。我國心腦血管疾病中腦梗死/急性心肌梗死比例高達(dá)6.6%～13%，而歐美此比例＜2%[12]，這是由于與國外高血壓多合并膽固醇增高（C型高血壓）不同，我國的高血壓人群中有75%以上的人群合并HCY增高，稱為H型高血壓[1]。高HCY血癥與高血壓具有協(xié)同作用，HCY不僅可產(chǎn)生氧自由基，產(chǎn)生內(nèi)皮毒性作用，刺激血管平滑肌細(xì)胞增生，促進(jìn)血小板粘附聚集[13]，還可以抑制內(nèi)源性硫化氫的生成，活化血管緊張素轉(zhuǎn)換酶，使血管緊張素Ⅱ生成增多[14]，從而導(dǎo)致血管增生、動脈粥樣硬化及腦梗死的發(fā)生。據(jù)第三次中國死因報(bào)告結(jié)果顯示，腦梗死是我國首要死因，且患病率仍以每年8.7%速度增長[15]，高血壓尤其是H型高血壓的重點(diǎn)防治工作是預(yù)防腦梗死，因而甄別出高血壓中腦梗死高?；颊?，在發(fā)生腦梗死前發(fā)現(xiàn)可能存在動脈硬化并早期干預(yù)至關(guān)重要。頸動脈為全身動脈粥樣硬化的窗口，IMT的增加往往意味著早期動脈硬化病變[6]。IMT每增高0.1 mm，患者腦梗死風(fēng)險(xiǎn)增加11%[7]。本研究發(fā)現(xiàn)H型高血壓患者頸動脈IMT值明顯大于非H型高血壓者（P＝0.016），這與之前研究結(jié)果相符[16]。

脂質(zhì)代謝紊亂與動脈粥樣硬化的關(guān)系已得到公認(rèn)。其中，LDL-C是發(fā)生動脈粥樣硬化的最重要危險(xiǎn)因素。LDL經(jīng)化學(xué)修飾作用形成氧化的LDL，和清道夫受體結(jié)合，被巨噬細(xì)胞攝取，形成泡沫細(xì)胞，并停留在血管壁內(nèi)，從而沉積了大量的膽固醇，尤其是膽固醇酯，促使動脈壁形成粥樣硬化斑塊[17]。另外，有研究認(rèn)為[18]動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，而LDL-C可能是這種慢性炎癥啟動和維持的基本要素。HDL-C主要生理功能是轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂和膽固醇，是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，能促進(jìn)外周組織中膽固醇的消除，還可能通過抗炎、抗氧化等作用，防止動脈粥樣硬化的形成[19]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)IMT與LDL-C呈正相關(guān)（r=0.355，P＜0.01），與HDL-C呈負(fù)相關(guān)（r=-0.27，P＜0.01），且多元回歸分析提示LDL-C和低HDL-C是頸動脈IMT的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（B=0.029和-0.067，P均＜0.01）。我們的試驗(yàn)再次驗(yàn)證了LDL-C的致動脈粥樣硬化作用及HDL-C的血管保護(hù)作用。

HCY水平涉及因素較多，其中遺傳因素起重要作用。MTHFR基因編碼的亞甲基四氫葉酸還原酶，在葉酸代謝過程中可為HCY提供甲基，從而影響HCY水平。MTHFR基因C677T突變型MTHFR活性下降，HCY濃度上升，其中TT型MTHFR活性下降60%[3]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)H型高血壓人群中MTHFR基因C677T突變型（CT+TT型）比例較非H型高血壓人群為高（χ2＝20.42，P＜0.01），這與既往試驗(yàn)[20]結(jié)果相當(dāng)。既往研究[14]提示HCY增高是動脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素，而如上所述造成HCY增高的重要原因是MTHFR基因的突變。我們的回顧性研究試圖探索MTHFR基因C677T多態(tài)性與動脈粥樣硬化的關(guān)系。多元線性回顧分析MTHFR基因C677T等位基因T頻數(shù)提示頸動脈IMT增厚的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（B＝0.046，P＜0.01），提示MTHFR基因C677T突變型是頸動脈粥樣硬化的危險(xiǎn)因素。以此推測MTHFR基因677位點(diǎn)突變致MTHFR活性減低，代謝中間產(chǎn)物HCY增高，最終導(dǎo)致動脈粥樣硬化及腦梗死等發(fā)生。

H型高血壓患者的預(yù)后主要取決于是否發(fā)生腦梗死。H型高血壓的早期干預(yù)措施包括補(bǔ)充葉酸或依那普利葉酸合劑，相關(guān)研究[2,21]已證實(shí)這些措施能降低腦梗死風(fēng)險(xiǎn)，近期依那普利葉酸合劑（商品名依葉）已在我國被批準(zhǔn)上市。以本研究結(jié)果提示，H型高血壓患者常規(guī)行MTHFR基因C677T多態(tài)性及血脂檢測可能有助于發(fā)現(xiàn)動脈粥樣硬化早期危險(xiǎn)因素和腦梗死高危患者，以便為早期干預(yù)或提前預(yù)警提供重要信息。