熱休克蛋白70在腎癌中的表達(dá)及臨床意義

黃春梅 盧童 周治軍 徐康 龔娟

腎癌(renal cell tumors, RCC)是腎臟最常見的實(shí)質(zhì)性腫瘤，其中腎透明細(xì)胞癌最為多見，據(jù)統(tǒng)計(jì)其發(fā)病率每年約增長2%～4%[1-3]。目前，外科手術(shù)(腎癌根治性切除或保留腎單位的腎部分切除)仍然是RCC最常用的治療手段。但是，RCC的發(fā)生和發(fā)展表現(xiàn)非常多樣化，不同患者的預(yù)后差異很大，由于缺乏預(yù)測患者預(yù)后的方法，給臨床工作中為患者制定個(gè)體化治療方案帶來諸多困難。因此，找到一種適用于評(píng)估RCC預(yù)后的生物學(xué)指標(biāo)顯得非常重要。

熱休克蛋白70(heat shock protein 70, HSP70)是一種鈣結(jié)合蛋白，在細(xì)胞質(zhì)功能蛋白的折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)和降解中發(fā)揮著重要作用。有研究表明，HSP70在腫瘤組織中的高表達(dá)往往提示此類腫瘤具有更強(qiáng)的增殖能力和侵襲性，可作為腫瘤預(yù)后判斷的指標(biāo)[4-5]。本研究中，我們采用免疫組化方法對(duì)腎透明細(xì)胞癌組織中HSP70的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測，并結(jié)合患者的臨床進(jìn)展情況初步探討HSP70在判斷RCC患者預(yù)后中的作用。

對(duì)象與方法

一、研究對(duì)象

選取天門市第一人民醫(yī)院2011年5月至2012年5月期間收治的51例RCC患者手術(shù)標(biāo)本，其中男39例，女12例；平均年齡(66.5±7.1)歲，臨床分期均為Ⅰ～Ⅱ期(AJCC分期)。所有患者均接受手術(shù)治療切除腫瘤病灶(腎癌根治或腎部分切除)，術(shù)后病檢均確診為腎透明細(xì)胞癌，其中Fuhrman分級(jí)Ⅰ～Ⅱ級(jí)17例，Ⅲ～Ⅳ級(jí)34例，術(shù)后均接受了規(guī)范的免疫治療(烏苯美司30 mg/次，每周2～3次，使用10個(gè)月；或重組人白細(xì)胞介素-2 50萬IU皮下注射，每周2次，共4周)。同時(shí)選取5例癌旁組織作為免疫組化對(duì)照組。

二、免疫組化檢測

采用SABC法對(duì)腫瘤標(biāo)本進(jìn)行免疫組化檢測，所用標(biāo)本經(jīng)固定、包埋、切片后，經(jīng)脫蠟入水并阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，隨后微波處理進(jìn)行抗原修復(fù)。所有切片經(jīng)兔抗人HSP70抗體(CST公司，美國)孵育過夜(1∶1 000)，再經(jīng)洗脫處理后，使用SABC試劑盒(博士德公司，武漢)按二抗孵育流程處理后顯色，并在顯微鏡下觀察HSP70表達(dá)情況，HSP70主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，以高倍鏡下呈中度到深度棕黃顯色，并且此類細(xì)胞在視野中超過25%定為HSP70高表達(dá)，其余定為低表達(dá)[6]。

三、隨訪

所有患者經(jīng)過5～60個(gè)月隨訪，每2～3個(gè)月復(fù)查泌尿系及肝臟B超，每6個(gè)月復(fù)查胸片及腹部CT，觀察并記錄患者無進(jìn)展生存時(shí)間(progress free survival, PFS)，然后統(tǒng)計(jì)患者的無進(jìn)展生存率。其中PFS為患者以接受手術(shù)時(shí)間為起點(diǎn)，直至發(fā)生腫瘤進(jìn)展(如復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、死亡等)的時(shí)間間隔。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

統(tǒng)計(jì)軟件采用SPSS 19.0，免疫組化表達(dá)率的比較采用卡方檢驗(yàn)，患者無進(jìn)展生存率的比較采用Kaplan-Meier生存分析法進(jìn)行比較，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、HSP70在RCC中的表達(dá)及其與病理分級(jí)的關(guān)系

在51例RCC標(biāo)本中，有30例HSP70呈高表達(dá)，21例呈低表達(dá)，高表達(dá)率為58.8%。其中Fuhrman Ⅰ～Ⅱ級(jí)RCC組織中有6例呈高表達(dá)(35.3%)，F(xiàn)uhrman Ⅲ～Ⅳ級(jí)RCC組織中有24例呈高表達(dá)(70.6%)，兩組間高表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.016，表1)，而所有癌旁組織中HSP70均為低表達(dá)(圖1)。

表1 HSP70表達(dá)與RCC病理分級(jí)的關(guān)系[例(%)]

二、RCC中HSP70表達(dá)水平與患者無進(jìn)展生存率的關(guān)系

經(jīng)過5～60個(gè)月隨訪，所有患者的中位PFS為35個(gè)月，至隨訪結(jié)束時(shí)，HSP70高表達(dá)患者的無進(jìn)展生存率為22.6%，HSP70低表達(dá)患者的無進(jìn)展生存率為55.0%，兩組患者的無進(jìn)展生存率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004，圖2)。

A：部分RCC組織中呈低表達(dá)；B：多數(shù)RCC組織中呈高表達(dá)；C：在所有對(duì)照組癌旁組織中呈低表達(dá)

圖1 HSP70在RCC組織及癌旁組織中的表達(dá)(SABC法，×100)

圖2 HSP70高表達(dá)與低表達(dá)患者無進(jìn)展生存率對(duì)比

討 論

當(dāng)前，RCC的首選治療是手術(shù)切除病灶，由于腎透明細(xì)胞癌對(duì)于放療及化療并不敏感，因此術(shù)后多采用免疫治療。但是，RCC的預(yù)后在不同的患者表現(xiàn)差異很大，在臨床工作中缺乏合適的預(yù)后判斷指標(biāo)，為制定合理的治療方案帶來許多困難，本研究中我們以HSP70為指標(biāo)初步探討其與腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的關(guān)系。

HSP70是一類主要存在于胞質(zhì)內(nèi)的可溶性蛋白，是一類結(jié)構(gòu)高度保守的蛋白質(zhì)分子，基于表達(dá)情況可分為結(jié)構(gòu)型HSP70和應(yīng)激型HSP70，細(xì)胞內(nèi)所表達(dá)的主要為結(jié)構(gòu)型HSP70，亦稱為葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78[7]。HSP70的N端結(jié)構(gòu)域具有ATP酶活性，C端的疏水結(jié)構(gòu)可結(jié)合多種新合成肽鏈，可幫助蛋白分子完成折疊及轉(zhuǎn)運(yùn)[8]。HSP70在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮著分子伴侶、抗氧化、抗細(xì)胞凋亡等重要作用，在很多腫瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，并常常對(duì)腫瘤的進(jìn)展和增殖起促進(jìn)作用[9-10]。

本研究中，我們首先采用免疫組化染色對(duì)腎透明細(xì)胞癌組織中HSP70的表達(dá)進(jìn)行了檢測，結(jié)果顯示，多數(shù)RCC組織中HSP70呈高表達(dá)，而且，較高病理分級(jí)的RCC組織中HSP70的高表達(dá)率(70.6%)明顯高于較低病理分級(jí)的RCC組織(35.3%)，表明腫瘤細(xì)胞的分化越差、惡性度越高，其HSP70表達(dá)越強(qiáng)。同時(shí)，我們研究了HSP70表達(dá)水平與患者無進(jìn)展生存率之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，HSP70高表達(dá)的患者，其無進(jìn)展生存率明顯低于HSP70低表達(dá)患者。上述結(jié)果說明，HSP70高表達(dá)提示患者細(xì)胞分化程度較低，而其預(yù)后則較差，因此，HSP70可以作為判斷腎透明細(xì)胞癌預(yù)后的一項(xiàng)生物指標(biāo)。

綜上所述，HSP70與RCC的預(yù)后密切相關(guān)，且具備成為RCC治療靶點(diǎn)潛在價(jià)值，可在今后的研究中進(jìn)一步加以探索。