液基細(xì)胞技術(shù)與常規(guī)糞便檢測(cè)技術(shù)在寵物犬腸道寄生蟲檢測(cè)中的比較

廖詩(shī)英

(湖北文理學(xué)院，湖北襄陽(yáng) 441053)

液基細(xì)胞技術(shù)由美國(guó)Cytyc公司在1987年研發(fā)成功，1991年獲得美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局(Food and Drug Administration，F(xiàn)DA)批準(zhǔn)，我國(guó)在2000年以后開始廣泛應(yīng)用于各醫(yī)療服務(wù)機(jī)構(gòu)，用于取代傳統(tǒng)的巴氏試驗(yàn)(Papanicolaou test)。液基細(xì)胞技術(shù)是利用細(xì)胞學(xué)原理，去除細(xì)胞樣品中諸如黏液等影響因素，將樣本細(xì)胞溶于固定液，染色后涂片鏡檢，可自動(dòng)化操作，節(jié)約檢測(cè)樣本的時(shí)間，極大地提高了涂片質(zhì)量及讀片結(jié)果，減少許多人為因素的影響。液基細(xì)胞技術(shù)已被全球醫(yī)療機(jī)構(gòu)證明是一項(xiàng)成熟的檢測(cè)方法，廣泛用于宮頸癌、口腔癌、肛門癌、甲狀腺癌等癌癥的篩查診斷。美國(guó)DK Diagnostics公司研發(fā)的PARATEST液基寄生蟲檢測(cè)試劑盒，采用液基細(xì)胞技術(shù)原理，在溶解糞便樣品時(shí)保持了蟲卵和寄生蟲的細(xì)胞活性，通過(guò)過(guò)濾和沉降體系提高蟲卵和寄生蟲檢出率。此技術(shù)操作快捷簡(jiǎn)便、結(jié)果可靠，目前已在全球20多個(gè)國(guó)家推廣使用[1-3]。為了探討PARATEST試劑盒在寵物腸道寄生蟲檢測(cè)中的作用，特設(shè)計(jì)本次試驗(yàn)。

1　材料與方法

1.1　材料

選擇2017年4月～10月的179只寵物犬，收集新鮮糞便作為檢查樣本。

1.2　方法

1.2.1直接涂片法滴1滴生理鹽水與潔凈的載玻片上，用竹簽挑取綠豆大小的糞便放入水中涂抹均勻，涂片厚度以透過(guò)玻片可看清書上的字跡為宜，加蓋玻片后鏡檢。為提高檢出率，每個(gè)檢樣連續(xù)做3次涂片[4-5]。

1.2.2飽和鹽水浮聚法自糞便不同處挑取蠶豆大小的糞塊加入適量飽和鹽水調(diào)成混懸液，用60目銅篩濾去粗渣，過(guò)濾后的糞液倒入于浮聚瓶中，再慢慢加入飽和鹽水至液面略高于瓶口，在瓶口上覆蓋一載玻片，靜置15 min后，將載玻片提起并迅速翻轉(zhuǎn)，鏡檢[6]。

1.2.3清水沉淀法取20 g糞便加水制成混懸液，用60目銅篩過(guò)濾，濾液倒入三角瓶中，加水500 mL，靜置30 mim，倒去上層液，重新加入清水500 mL，靜置20 min，此后重復(fù)換水2次～3次，直至上層液清亮為止。最后倒去上層液，取糞便沉渣做涂片鏡檢[7-8]。

1.2.4PARATEST液基過(guò)濾沉降法采用美國(guó)DK Diagnostics公司生產(chǎn)的PARATEST試劑盒對(duì)糞便樣本進(jìn)行檢查。PARATEST試劑盒中盛有液基保存液，具有保持糞便樣本新鮮的功效，使寄生蟲及蟲卵免遭破壞。其錐形的瓶蓋內(nèi)置高精度濾膜，可去除干擾檢測(cè)的殘?jiān)煞?。檢查時(shí)，取2 g糞便裝入PARATEST液基保存液瓶中，蓋上錐形瓶蓋，搖勻樣本瓶，將瓶倒置在托盤上，靜置15 min鐘后，輕擠壓試劑瓶，棄去最初的1滴，滴1滴樣品到載玻片上，蓋上蓋玻片鏡檢。

1.2.5統(tǒng)計(jì)處理本試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料對(duì)比采用2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，直接涂片法對(duì)各種腸道寄生蟲的檢出率最低，飽和鹽水浮聚法對(duì)犬鉤口線蟲、犬弓首蛔蟲和等孢球蟲的檢出率最高，但對(duì)華支睪吸蟲、犬賈第蟲和隱孢子蟲的檢出率為0。PARATEST液基過(guò)濾沉降法對(duì)犬鉤口線蟲、犬弓首蛔蟲和等孢球蟲的檢出率稍低于飽和鹽水浮聚法，二者差異不顯著；對(duì)華支睪吸蟲和犬賈第蟲、隱孢子蟲等原蟲的檢出率顯著高于其他3種方法(表1)。

3　討論

直接涂片法適用于檢查各種腸道寄生蟲，方法簡(jiǎn)便，但由于取材較少，檢出率較低，容易造成漏診，不適合作為低感染地區(qū)的檢測(cè)方法，只能配合其他方法使用[9]。飽和鹽水浮聚法主要用于檢查鉤蟲卵、絳蟲卵及球蟲卵囊等比重較小的蟲卵及卵囊，對(duì)比重較大的吸蟲卵效果不理想。清水沉淀法常用于檢查吸蟲卵，但是操作復(fù)雜、費(fèi)時(shí)、費(fèi)力，且蟲卵長(zhǎng)時(shí)間浸泡在低滲溶液中，易發(fā)生形態(tài)變化，使蟲卵不易辨認(rèn)[10]。PARATEST液基過(guò)濾沉降法，利用液基細(xì)胞學(xué)原理，有效地保持了樣本中蟲卵和原蟲的細(xì)胞活性，并通過(guò)過(guò)濾和沉淀體系分離糞便殘?jiān)c蟲卵，只需靜置沉淀15 min便可起到很好的集卵效果，大大提高了蟲卵和寄生蟲的檢出率。在本次試驗(yàn)中，對(duì)多種常見寵物犬腸道寄生蟲均有較高的檢出率，尤其對(duì)犬賈第蟲、隱孢子蟲等原蟲的檢出率優(yōu)勢(shì)明顯。

表1　4種檢測(cè)方法對(duì)179只寵物犬糞便樣本腸道寄生蟲檢出率比較

注：與PARATEST液基過(guò)濾沉降法比較，“a”P<0.05；“b”，P<0.01。

Note: Compared with PARATEST liquid-based filtration and sedimentation method,"a"P<0.05；"b"P<0.01.

此外，PARATEST液基細(xì)胞檢測(cè)技術(shù)具有操作簡(jiǎn)便，無(wú)需特殊儀器，只需一臺(tái)顯微鏡即可進(jìn)行檢測(cè)，特適宜基層診療機(jī)構(gòu)使用。采集的糞便樣品在PARATEST試劑盒中無(wú)需冷藏，可常溫保存15 d，方便運(yùn)輸及合理安排檢測(cè)時(shí)機(jī)，操作過(guò)程中，糞便始終隔離在試劑瓶中，無(wú)異味，更受檢驗(yàn)人員歡迎。