薄層色譜法測定調(diào)味品中苯甲酸的研究

詹永能

薄層色譜法（簡稱：TLC）是一種快速、簡便的色譜分析方法。薄層色譜過程是混合終點(diǎn)將首先在薄的均勻的固定相涂層分離，然后端板浸入流動(dòng)相，在濕片樣品的流動(dòng)相的過程中，隨著流動(dòng)相進(jìn)行了不同成分的流動(dòng)相不同的速度，在板的不同位置，向前移動(dòng)，最終保留下來，從而達(dá)到使用不同成分的適當(dāng)分離目的的方法進(jìn)行檢測，可以是定性的或定量的樣本分析。由于它具有成本低、速度快、可在同一薄膜中測量多個(gè)樣品的優(yōu)點(diǎn)，因此本文采用聚酰胺聚酰胺膜代替國標(biāo)法有效地測定了苯甲酸中的含量，具體如下：

試驗(yàn)部分

儀器與試劑

儀器：層析展缸（23cm ×23cm ×10 cm），聚酰胺薄膜（12 cm ×22 cm）

展開劑：異丙醇+氨水+無水乙醇（8+1+1）

氯化鈉溶液： 30 g /L，加 HCl 10～15 滴。

氫氧化鈉，無水硫酸鈉，無水乙醚均為分析級(jí)

試劑配制根據(jù)國標(biāo)方法。

試驗(yàn)方法

1.樣品（標(biāo)準(zhǔn)樣品）的預(yù)處理。（1）樣品（如豆瓣醬）： 樣品磨細(xì)后，稱取10 g左右， 加入0. 1mol/ L氫氧化鈉溶液稀釋至15倍， 放置過夜， 過濾 ，吸取濾液25mL ，稀鹽酸調(diào)節(jié)至溶液為中性。（2）含油脂試樣（如方便面醬包）：稱取樣品10g，加0.08mol/L氫氧化鈉溶液至100g，40℃水浴，并不時(shí)攪拌浸泡2h以上，取出，用乙醚多次萃取油脂，棄去乙醚層，再經(jīng)40℃水浴揮去殘留的乙醚，過濾，取濾液適量，用鹽酸調(diào)pH至中性。

2.樣品提取及純化。經(jīng)上述處理后的樣液中加鹽酸酸化至約1mol/L，用適量乙醚分3～4次萃取，每次劇烈振搖1min，合并萃取后的乙醚液，用40g/L氯化鈉溶液洗滌兩次，靜置15min，醚層經(jīng)無水硫酸鈉過濾至容量瓶，定容，吸取適量乙醚提取液，在40℃水浴上小心揮干乙醚，殘?jiān)眠m量無水乙醇溶解。

3.定性檢出。取苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液分別2μl，點(diǎn)在2cm的基線在影片的下端。每一個(gè)點(diǎn)的時(shí)間間隔為1.5～2.0cm處在槽的內(nèi)壁貼有流動(dòng)相過濾，擴(kuò)展槽為50 ～ 100ml膨脹劑，將擴(kuò)展槽的傾斜位置，對(duì)好點(diǎn)位置，加蓋，放置10min，從溶劑到達(dá)10cm左右，取出。在空氣中搖擺或吹去剩下的展開劑。細(xì)水霧均勻地灑在薄膜表面，斑點(diǎn)呈黃色，背景為藍(lán)色。將樣品與標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行比較。比較了待測樣品中苯甲酸和苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的斑點(diǎn)。

4.定量。測量樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品以1.2.3相同，根據(jù)粗略的定量結(jié)果，選擇合適的加標(biāo)量，加入標(biāo)準(zhǔn)樣品的標(biāo)準(zhǔn)，根據(jù)1.2.3的方法，操作，在標(biāo)準(zhǔn)亮度相同的樣品和標(biāo)準(zhǔn)樣品點(diǎn)的比較，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)樣品和計(jì)算量的含量，樣品中苯甲酸含量的測定。

結(jié)果與討論

酸化程度影響。酸化程度不夠，苯甲酸轉(zhuǎn)化為苯甲酸，測定值較低。如果酸化過多，會(huì)引起干擾。研究表明，酸化程度控制在1mol/ L。

樣品中的干擾及排除。樣品中組分常會(huì)對(duì)苯甲酸的展開產(chǎn)生干擾，使樣品中苯甲酸和山梨酸的Rf值與標(biāo)準(zhǔn)溶液中的Rf值不一致。為此，常采用樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)溶液，如未加標(biāo)的樣品斑點(diǎn)與加標(biāo)后的樣品斑點(diǎn)Rf值一致，則為陽性。

方法的回收率試驗(yàn)。在10 g 辣椒醬樣品中加入 200 mg /L苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，經(jīng)高效液相色譜測定 ，進(jìn)行回收率測定。結(jié)果見表 1

方法檢出限及準(zhǔn)確性。聚酰胺薄膜在定量精度、檢測靈敏度和分離度方面優(yōu)于聚酰胺粉片。在聚酰胺膜，苯甲酸的檢測限為0.8mg/ L。該方法對(duì)苯甲酸的定量分析是非常直觀的。每次4～8人得出一致結(jié)論。與苯甲酸標(biāo)準(zhǔn)溶液相比，測定結(jié)果比較困難，標(biāo)準(zhǔn)樣品加標(biāo)法是有效的。當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)樣品中苯甲酸含量高于待測樣品時(shí)，樣品中加入標(biāo)準(zhǔn)，可計(jì)算出相同的標(biāo)準(zhǔn)。酸的含量。該方法的樣品提取和測定過程簡單，測定結(jié)果直觀，可比性強(qiáng)，測定誤差較大。