枯草芽胞桿菌降解毒死蜱特性研究

陳 琳， 李祖明*， 劉彥霞， 倪 芳， 白志輝， 高麗萍

(1. 北京聯(lián)合大學(xué) 生物化學(xué)工程學(xué)院，北京 100191；2. 中國科學(xué)院 生態(tài)環(huán)境研究中心, 北京 100085)

枯草芽胞桿菌屬于革蘭陽性菌[1]，呈短桿狀，可以運(yùn)動(dòng)，沒有莢膜[2]。該菌生長快速，不具備致病性，所需營養(yǎng)簡(jiǎn)單，可產(chǎn)生耐熱性高、抗逆性強(qiáng)的芽胞，能在極端的外部環(huán)境條件下存活，易于保藏、儲(chǔ)存和繁殖，分布廣泛，不僅存在于植物體表、根際、土壤等外界環(huán)境中，也屬于常見的植物內(nèi)生細(xì)菌，發(fā)酵作用良好，可分泌多種抗生素和蛋白酶，已成為芽胞桿菌中應(yīng)用潛力較大的菌種，受到國內(nèi)外學(xué)者普遍關(guān)注[3-5]。Zouari等[6]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌SPB1可以產(chǎn)生生物表面活性劑；Norgaard等[7]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌可以產(chǎn)生氨基酸；Lee等[8]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌可以降解組胺；Seenivasan等[9]發(fā)現(xiàn)枯草芽胞桿菌可以被用作益生菌促進(jìn)羅氏沼蝦的生長發(fā)育和能量利用；宋聰?shù)萚10]以枯草芽胞桿菌J18進(jìn)行冬棗采后黑斑病的防治，濃度為1×108cfu/mL 的菌液對(duì)病害的防效為80.67%?？莶菅堪麠U菌3728制劑對(duì)小麥白粉病、玉米銹病的防治效果接近三唑酮，具有很好的應(yīng)用開發(fā)前景[11]。長期使用化學(xué)殺菌劑，會(huì)引起病原菌抗藥性增強(qiáng)、環(huán)境污染和果品農(nóng)藥殘留等嚴(yán)重問題[12-13]。毒死蜱即O,O-二乙基-O-(3,5,6-三氯-2-吡啶基)硫代磷酸酯[14]，作為一種廣譜性殺蟲劑，已廣泛應(yīng)用于全球農(nóng)業(yè)中，是中國和美國等國家使用最普遍的一類有機(jī)磷農(nóng)藥[15-16]。然而研究發(fā)現(xiàn)毒死蜱與神經(jīng)發(fā)育不良、自身免疫紊亂、氧化應(yīng)激和DNA損傷等有關(guān)[17-19]，它的大量使用對(duì)動(dòng)植物產(chǎn)生了許多不利的影響，因其產(chǎn)生的食品安全問題已經(jīng)引起了人們的廣泛關(guān)注[20]。大量研究證明微生物對(duì)土壤和水中的有機(jī)磷農(nóng)藥均有很好的降解作用，且不會(huì)造成二次污染[21]。微生物降解是解決食品農(nóng)藥殘留問題的有效措施之一[22]。對(duì)毒死蜱進(jìn)行微生物降解，因其生態(tài)友好性、底物特異性、成本低廉性[23]，成為去除食品和地表水中毒死蜱一種可靠有效的方法[15-24]。Harishankar等[25]發(fā)現(xiàn)腸道菌群能降解毒死蜱；孟慶林等[26]發(fā)現(xiàn)洋蔥伯克霍爾德菌能降解毒死蜱，降解率可達(dá)69.87%；李珣等[27]發(fā)現(xiàn)菌株CJC-3能使毒死蜱的降解率高達(dá)76.03%；Liu等[28]發(fā)現(xiàn)寡養(yǎng)單孢菌YC-1也能降解毒死蜱。芽胞桿菌也可以用來降解毒死蜱，已報(bào)道的芽胞桿菌有蠟樣芽胞桿菌[29-30]、側(cè)芽胞桿菌[31]和短小芽胞桿菌[32]，但鮮見有關(guān)枯草芽胞桿菌降解毒死蜱的文獻(xiàn)報(bào)告，僅羅鑫等[33]從水稻土壤中分離獲得1株降解毒死蜱的枯草芽胞桿菌，未見從蔬菜上分離可降解毒死蜱枯草芽胞桿菌的文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)。本文研究了1株從油菜葉面分離的枯草芽胞桿菌對(duì)毒死蜱的降解特性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 從油菜葉面上分離篩選出來的枯草芽胞桿菌(Bacillussubtilis)3374菌株，將其編號(hào)為GU086422，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏編號(hào)：CGMCC No. 3374。

1.1.2 試劑 毒死蜱乳油，寶靈化工股份有限公司(江蘇)；毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)液，中國計(jì)量科學(xué)研究院；甲醇(HPLC級(jí))、OCEANPAK等。

1.1.3 培養(yǎng)基 菌種活化培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基、發(fā)酵培養(yǎng)基(質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%)：胰蛋白胨1，酵母提取物0.5，氯化鈉1，pH 6.8 ～ 7.2；菌種保藏培養(yǎng)基再加1.5 ～ 2的瓊脂；121 ℃滅菌30 min。

1.2 方法

1.2.1 菌株活化 將冰箱內(nèi)保存的枯草芽胞桿菌3374菌株劃線于固體培養(yǎng)基平板上，30 ℃活化1 d，挑選單菌落進(jìn)一步純化，最后再篩選出單菌落保存于斜面固體培養(yǎng)基上。

1.2.2 液體種子制備和發(fā)酵 將活化的枯草芽胞桿菌3374菌株依照5%接種量接種于裝有種子培養(yǎng)基的三角瓶中，30 ℃、180 r/min培養(yǎng)24 h，得液體種子。按照10%的接種量將液體種子接種到盛有發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，30 ℃、180 r/min培養(yǎng)24 h，得到菌體濃度達(dá)到109cfu/mL以上的發(fā)酵液。

1.2.3 生物量測(cè)定 以菌液在波長600 nm所測(cè)光密度值OD600表示[34]。

1.2.4 毒死蜱的降解 無菌條件下，配制含有一定濃度毒死蜱的枯草芽胞桿菌3374菌株發(fā)酵培養(yǎng)液若干，將枯草芽胞桿菌種子液按照5%接種量接種到該發(fā)酵培養(yǎng)液中，即實(shí)驗(yàn)組；以未接種發(fā)酵培養(yǎng)液為空白組。不同處理組同時(shí)置于搖床上震蕩培養(yǎng)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組有3個(gè)平行，分別采樣測(cè)定毒死蜱殘留量，考察pH、毒死蜱濃度和溫度等不同因素對(duì)水溶液中枯草芽胞桿菌3374降解毒死蜱的影響。培養(yǎng)白菜到幼苗期，在白菜幼苗上均勻噴灑240 mg/L毒死蜱后，再噴灑2×107cfu/mL枯草芽胞桿菌3374菌液，以無菌蒸餾水代替菌液作對(duì)照，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組有3個(gè)平行，在不同時(shí)間采樣測(cè)定毒死蜱殘留量。

1.2.5 菌液中毒死蜱提取[26]首先用20 mL二氯甲烷對(duì)20 mL菌液進(jìn)行初提取，再用15 mL的二氯甲烷分兩次進(jìn)行進(jìn)一步萃取。收集提取液，用氮吹儀吹干溶劑，再用85%甲醇溶液溶解，待測(cè)。

1.2.6 白菜上毒死蜱提取[35-36]精確稱取15 g勻漿好的試樣于50 mL聚乙烯離心管中，加入3 g NaCl、1.5 g無水CH3COONa及15 mL 1%乙酸乙腈溶液，漩渦1 min，5 000 r/min離心10 min。取2 mL上清液轉(zhuǎn)入裝有100 mg PSA(N-丙基乙二胺)、100 mg C18(C18烷基-硅膠)、300 mg無水MgSO4和30 mg GCB(石墨化炭黑)的5 mL離心管中，漩渦1 min使其混勻，5 000 r/min離心5 min，上清液過 0.22 μm濾膜，收集于自動(dòng)進(jìn)樣瓶中，供液相檢測(cè)。

1.2.7 毒死蜱含量測(cè)定 采取液相色譜法[37]。色譜條件：色譜柱為Hypersil ODS柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱溫為室溫；流動(dòng)相為甲醇-水(體積比85∶15)的混合溶液，流速為1 mL/min；紫外檢測(cè)波長289 nm；進(jìn)樣量為20 μL。HPLC法只針對(duì)目標(biāo)物毒死蜱進(jìn)行了定量的檢測(cè)以及繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線的R值>0.999,說明該曲線可以用來檢測(cè)毒死蜱含量。液相色譜法檢測(cè)毒死蜱標(biāo)準(zhǔn)液所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=aX+b，a=16 594.7，b=-837.083，R2=0.999 328 8，R= 0.999 664 3(見圖1)。

圖1 毒死蜱檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.1 Standard curve of detecting chlorpyrifos

1.2.8 降解率計(jì)算 計(jì)算公式：R(%)=((c0-c1)/c0)×100。其中，R代表菌株對(duì)農(nóng)藥的降解率；c1為實(shí)驗(yàn)組毒死蜱質(zhì)量濃度(mg/L)；c0為空白組毒死蜱質(zhì)量濃度(mg/L)。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌株的生長曲線

將枯草芽胞桿菌3374菌株接種到發(fā)酵培養(yǎng)基中培養(yǎng)一段時(shí)間，分別在不同培養(yǎng)時(shí)間取樣測(cè)定該發(fā)酵液的OD600值，測(cè)定該菌株的生長量，結(jié)果見圖2。

圖2 枯草芽胞桿菌生長曲線Fig.2 Growth Curve of Bacillus subtilis

由圖2可知，隨著培養(yǎng)時(shí)間逐漸增加，枯草芽胞桿菌3374菌株在培養(yǎng)基中生物量始終保持上升趨勢(shì)。培養(yǎng)8 h后進(jìn)入指數(shù)生長期，16 h后增加趨勢(shì)下降，24 h后生物量趨于穩(wěn)定，此時(shí)枯草芽胞桿菌3374菌株生物量達(dá)到相對(duì)穩(wěn)定。故選取培養(yǎng)24 h進(jìn)行毒死蜱降解實(shí)驗(yàn)，考察不同毒死蜱濃度、pH、溫度對(duì)毒死蜱降解規(guī)律的影響。

2.2 pH對(duì)生物量和降解率的影響

將枯草芽胞桿菌3374菌株接種到含有480 mg/L毒死蜱不同pH的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24 h后取樣測(cè)定毒死蜱含量，結(jié)果見圖3。

圖3 pH對(duì)枯草芽胞桿菌生物量和毒死蜱降解率的影響Fig.3 Biomass and chlorpyrifos degradation dynamic by Bacillus subtilis 3374 under different initial pH

由圖3可知，在pH 5.0～9.0范圍內(nèi)，枯草芽胞桿菌3374菌株生物量增長趨勢(shì)較平緩。然而枯草芽胞桿菌3374對(duì)毒死蜱的降解率隨著pH增加呈逐漸下降趨勢(shì)，尤其在酸性條件下明顯優(yōu)于堿性條件；然而毒死蜱降解率較高，均高于85%?？梢?，pH對(duì)枯草芽胞桿菌3374的生物量和毒死蜱降解率的影響并不呈正相關(guān)，可能是菌體生長與菌體中對(duì)毒死蜱起降解作用酶的活性受pH變化而變化，而且這兩因素所受到pH的影響不完全相同及吻合而導(dǎo)致的?？紤]到菌劑在實(shí)際應(yīng)用中常采用中性條件，而酸性條件可能會(huì)影響植物的正常生長，對(duì)毒死蜱在白菜上降解規(guī)律的研究帶來不便，故選取pH 7.0作為適宜pH。

2.3 毒死蜱濃度對(duì)生物量和降解率的影響

將枯草芽胞桿菌3374菌株接種到含不同濃度毒死蜱的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24 h后取樣測(cè)定毒死蜱含量，結(jié)果見圖4。

圖4 初始濃度對(duì)枯草芽胞桿菌生物量和毒死蜱降解率的影響Fig.4 Biomass and chlorpyrifos degradation dynamic by Bacillus subtilis 3374 under different initial concentration

由圖4可知，枯草芽胞桿菌3374菌株生物量在不同毒死蜱濃度下有差別。隨著毒死蜱濃度的增加，枯草芽胞桿菌3374菌株生物量呈先下降再上升趨勢(shì)；在毒死蜱質(zhì)量濃度為120 mg/L時(shí)，生物量最低；然后又逐步上升。隨著毒死蜱濃度的增加，枯草芽胞桿菌3374菌株對(duì)毒死蜱的降解率呈與生物量相反的趨勢(shì)，降解率逐步升高，在毒死蜱質(zhì)量濃度為240 mg/L時(shí)降解率達(dá)到最高，其后下降。在毒死蜱濃度為48 mg/L時(shí)，盡管降解率最低，但依舊高于80%，說明枯草芽胞桿菌3374菌株對(duì)高濃度毒死蜱依舊具有較高降解能力，所以研究該菌株對(duì)高濃度毒死蜱的果蔬殘留及廢水處理具有十分重要的意義。

2.4 培養(yǎng)溫度對(duì)生物量和降解率的影響

將枯草芽胞桿菌3374菌株接種到含有240 mg/L毒死蜱的培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24 h后取樣測(cè)定毒死蜱含量，結(jié)果見圖5。由圖5可知，不同培養(yǎng)溫度下枯草芽胞桿菌3374菌株生物量不同。隨著培養(yǎng)溫度上升，枯草芽胞桿菌3374菌株生物量呈先升高再下降趨勢(shì)；溫度為30 ℃時(shí)，生物量達(dá)到最高；其后又逐漸降低。培養(yǎng)溫度對(duì)降解率的影響趨勢(shì)與其對(duì)生物量的影響相似，降解率隨著溫度的升高先增加，在30 ℃達(dá)到最高，之后又逐漸下降?？赡苁且?yàn)榕囵B(yǎng)溫度通過影響枯草芽胞桿菌生物量來影響其對(duì)毒死蜱的降解?？梢?，枯草芽胞桿菌3374菌株在20～40 ℃均有較高的降解力，均高于80%，能夠有效地用于對(duì)毒死蜱農(nóng)藥降解過程。

圖5 溫度對(duì)枯草芽胞桿菌生物量和毒死蜱降解率的影響Fig.5 Biomass and chlorpyrifos degradation dynamic by Bacillus subtilis 3374 under different temperature

2.5 枯草芽胞桿菌降解白菜葉面上殘留毒死蜱的特性

為驗(yàn)證枯草芽胞桿菌3374菌株在實(shí)際應(yīng)用中是否還能發(fā)揮高效降解毒死蜱的作用，本研究在白菜幼苗上均勻噴灑240 mg/L毒死蜱后，再噴灑2×107cfu/mL枯草芽胞桿菌菌液，以無菌蒸餾水代替菌液作對(duì)照，不同時(shí)間采樣測(cè)定毒死蜱殘留量，結(jié)果見圖6。

圖6 枯草芽胞桿菌降解白菜毒死蜱特性Fig.6 Degradation dynamic of chlorpyrifos by Bacillus subtilis 3374 onto chinese cabbage

由圖6可知，白菜表面殘留的毒死蜱在實(shí)驗(yàn)初期降解速度比較快，隨著時(shí)間延長，降解速度逐漸趨于平緩。毒死蜱+水處理組相較于毒死蜱處理組，降解曲線幾乎重合；而毒死蜱+高濃度菌液處理組相較于毒死蜱處理組，降解曲線下降比較明顯，2 d后毒死蜱殘留即可達(dá)國家安全標(biāo)準(zhǔn)1 mg/L，該組對(duì)毒死蜱的降解效果明顯優(yōu)于其他兩組；說明一定濃度的枯草芽胞桿菌3374菌液噴施到白菜上能加快殘留毒死蜱的降解。可見，枯草芽胞桿菌3374菌株在白菜上具有有效提高毒死蜱降解的能力。

3 討 論

近年來，毒死蜱作為一種中等毒性的廣譜殺蟲劑，已成為替代敵敵畏、甲胺磷等高等毒性有機(jī)磷農(nóng)藥的最佳選擇之一[38-39]。毒死蜱的微生物降解可有效解決毒死蜱殘留問題，我們現(xiàn)已分離篩選出多種降解毒死蜱的菌株。本研究從油菜葉際篩選出1株枯草芽胞桿菌3374菌株，通過控制不同的條件，揭示了該菌株在水溶液中對(duì)毒死蜱的降解規(guī)律，結(jié)果表明在毒死蜱質(zhì)量濃度為240 mg/L、pH 7.0、溫度30 ℃的較優(yōu)條件下，枯草芽胞桿菌3374菌株對(duì)毒死蜱的降解率達(dá)到92.48%，說明該菌株在水溶液中具有高效降解毒死蜱能力。同時(shí)將該菌株以及一定濃度的毒死蜱噴施到白菜上，分析白菜上毒死蜱殘留的降解速度，結(jié)果表明枯草芽胞桿菌3374能夠有效提高白菜葉面上毒死蜱殘留的降解速度，說明其在白菜上具有有效降解毒死蜱的能力，顯示出其在無公害農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)中具有廣闊的應(yīng)用潛力。

參考文獻(xiàn):

[1] Van Dij J, Hecker M.Bacillussubtilis: from soil bacterium to super-secreting cell factory[J]. Microb. Cell Factories, 2013, 12(2):1-6.

[2] 陳尚智, 胡勇有. 枯草芽胞桿菌對(duì)微污染水體的凈化作用[J]. 環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào), 2011,31(8): 1594-1601.

[3] 趙新林, 趙思峰. 枯草芽胞桿菌對(duì)植物病害生物防治的作用機(jī)理[J]. 湖南農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2011, 50(15): 3025-3028.

[4] 王曉閣. 枯草芽胞桿菌研究進(jìn)展與展望[J]. 中山大學(xué)研究生學(xué)刊, 2012, 33(3): 14-23.

[5] 李春鳳, 林顯華, 谷巍. 枯草芽胞桿菌在飼料生產(chǎn)及環(huán)境防治中的應(yīng)用[J]. 中國飼料, 2013,(1):10-17.

[6] Zouari R, Ellouze-Chaabouni S, Ghribi-Aydi D. Optimization ofBacillussubtilisSPB1 biosurfactant production under solid-state fermentation using by-products of a traditional olive mill factory[J]. Achievements in the Life Sciences，2014, 8(2):162-169.

[7] Nφrgaard JV, Canibe N, Nielsen B, et al. First studies on a new concept for amino acid provision throughB.subtilisin situ valine production in young pigs[J]. Livestock Science，2012, 147(1-3): 33-39.

[8] Lee YC, Lin CS, Liu FL, et al. Degradation of histamine byBacilluspolymyxaisolated from salted fish products[J]. Journal of Food and Drug Analysis，2015, 23(4): 836-844.

[9] Seenivasan C, Radhakrishnan S, Muralisankar T, et al.Bacillussubtilison survival, growth,biochemical constituents and energy utilization of the freshwater prawn.Macrobrachiumrosenbergiipost larvae[J]. Egyptian Journal of Aquatic Research，2012, 38(3): 195-203.

[10] 宋聰, 黃亞麗, 謝晨星, 等. 河北省冬棗黑斑病病原菌的分離鑒定及生物防治初探[J]. 微生物學(xué)雜志, 2016, 36(5): 85-89.

[11] 胡江春, 王楠, 潘華奇, 等. 海洋微生物抗菌脂肽及新生物農(nóng)藥研發(fā)[J]. 微生物學(xué)雜志, 2013, 33(6): 1-5.

[12] 鄧振山, 陳苗, 張偉民, 等. 蘋果樹內(nèi)生真菌抗腐爛病和炭疽病活性菌株的篩選[J]. 微生物學(xué)雜志, 2015, 35(5): 61-66.

[13] 張亞, 王凌宇, 劉雙清, 等. 湖南省草莓灰霉病的發(fā)生與防治[J].微生物學(xué)雜志, 2015, 35(1): 79-84.

[14] Liu J, Tan LM, Wang J. Complete biodegradation of chlorpyrifos by engineeredPseudomonasputidacells expressing surface-immobilized laccases[J]. Chemosphere，2016,157: 200-207.

[15] Chishti Z, Hussain S, Arshad KR, et al. Microbial degradation of chlorpyrifos in liquid media and soil[J]. Journal of Environmental Management，2013,114：372-380.

[16] Fu Y, Liu FF, Zhao CL, et al. Distribution of chlorpyrifos in rice paddy environment and its potential dietary risk[J]. Journal of Environmental Sciences，2015,35：101-107.

[17] Ostwal P, Dabadghao VS, Sharma SK, et al. Chlorpyrifos toxicity causing delayed myeloneuropathy[J]. Ann.Indian Acad. Neurol，2013,16 (4):736.

[18] Rauh V, Arunajadai S, Horton M, et al. Seven-year neurodevelopmental scores and prenatal exposure to chlorpyrifos, a common agricultural Pesticide[J]. Environmental Health Perspectives，2011,119 (8): 1196-1201.

[19] Khalil AM. Toxicological effects and oxidative stress responses in fresh waters nail, Laniste scarinatus, following exposure to chlorpyrifos[J]. Ecotoxicol Environ Saf，2015, 116:137-142.

[20] Sotomayor V, Lascano C, deD′Angelo, et al. Developmental and polyamine metabolism alterations inRhinellaarenarumembryos exposed to the organophosphate chlorpyrifos[J]. Environmental Toxicology Chemistry，2012, 31(9): 2052-2058.

[21] 明惠青, 李莉. 甲胺磷降解菌的篩選及降解特性研究[J]. 微生物學(xué)雜志, 2006, 26(2): 60-62.

[22] 陳琳, 李祖明. 類球紅細(xì)菌應(yīng)用進(jìn)展[J]. 微生物學(xué)雜志, 2016, 36(3): 105-108.

[23] Shen YJ, Lu P, Mei H, et al. Isolation of a methyl parathion-degrading strainStenotrophomonassp. SMSP-1 and cloning of theophc2 gene[J]. Biodegradation, 2010, 21(5): 785-792.

[24] Abraham J, Shanker A, Silambarasan S. Role of Gordonia sp JAAS1 in biodegradation of chlorpyrifos and its hydrolyzing metabolite 3,5,6-trichloro-2-pyridinol[J]. Letters In Applied Microbiology, 2013, 57(6): 510-516.

[25] Harishankar MK, Sasikala C, Ramya M. Efficiency of the intestinal bacteria in the degradation of the toxic pesticide, chlorpyrifos[J]. 3 biotech, 2013, 3(2):137-142.

[26] 孟慶林, 梁金鐘, 王風(fēng)青. 果蔬中殘留毒死蜱農(nóng)藥降解菌的選育及鑒定[J]. 食品與發(fā)酵工業(yè), 2016,42(4): 108-113.

[27] 李珣, 尚建超, 藍(lán)瀟, 等. 毒死蜱降解菌的篩選及降解特性[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué), 2016, 44(9): 479-481．

[28] Liu RH, Jiang H, Xu P, et al. Engineering chlorpyrifos-degradingStenotrophomonassp. YC-1 for heavy metal accumulation and enhancedchlorpyrifos degradation[J]. Biodegradation, 2014, 25(6): 903-910.

[29] Lakshmi CV, Kumar M, Khanna S. Biodegradation of chlorpyrifos in soil by enriched cultures[J]. Current Microbiology, 2009, 58(1):35-38.

[30] 段海明. 一株蠟狀芽胞桿菌降解毒死蜱的影響因素研究[J]. 安全與環(huán)境學(xué)報(bào), 2015, 15(2): 174-177.

[31] 王曉, 楚小強(qiáng), 虞云龍, 等. 毒死蜱降解菌株BacilluslatersprorusDSP 的降解特性及其功能定位[J]. 土壤學(xué)報(bào)，2006, 43(4): 648-654.

[32] Anwar S, Liaquat F, Khan QM, et al. Biodegradation of chlorpyrifos and its hydrolysis product3,5,6-tricholoro-2-pyridinol byBacilluspumilusstrain C2A1[J]. J Hazard Mater, 2009, 168 (1): 400-405.

[33] 羅鑫,張海燕,邵彪,等.毒死蜱降解菌的篩選·鑒定·降解特性[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2017,45(19):56-57.

[34] 李淑英, 蘇亞麗, 周元清, 等.重金屬脅迫培養(yǎng)對(duì)2種枯草芽胞桿菌生長曲線的影響[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 39(1): 443-446.

[35] 王連珠, 周昱, 陳泳, 等. QuEChERS樣品前處理-液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中66 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量方法評(píng)估[J]. 色譜, 2012, 30(2): 146-153.

[36] Cao XL, Liu SH, Yang XQ, et al. A modified QuEChERS sample preparation method for simultaneous determination of 62 pesticide residues in edible fungi using gas chromatography-triple quadrupole mass spectrometry[J]. Food Analytic Methods, 2016, 9:263-274.

[37] 賀江, 龍海波. 分散液相微萃取-高效液相色譜法測(cè)定水體中毒死蜱殘留[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2015, 31(5):1179-1183．

[38] Jing Ge, Mengxiao Lu, DonglanWang, et al. Dissipation and distribution of chlorpyrifos in selected vegetables through foliage and root uptake[J]. Chemosphere, 2016, 144:201-206.

[39] 李亞楠, 劉晶晶, 陳少華. 毒死蜱的應(yīng)用現(xiàn)狀及降解研究進(jìn)展[J]. 廣東農(nóng)業(yè)科學(xué), 2011, 6(46):92-96.