葛根素磷脂復合物干混懸劑的制備及質(zhì)量控制

王穎 許蕾

（中國醫(yī)科大學附屬第四醫(yī)院鑫康隆藥房，遼寧 沈陽 110032）

葛根素（puerarin）是從中藥葛根中提取得到的異黃酮類化學物質(zhì)，具有改善微循環(huán)、擴張血管、保護血管內(nèi)皮和神經(jīng)組織、抑制血小板聚集和血栓形成等作用，臨床上用于治療心絞痛、心律失常、心肌缺血、高血壓和腦梗死等癥，臨床效果顯著[1-3]。葛根素的水溶性和脂溶性均較差，口服生物利用度低，目前我國批準上市的葛根素制劑均為注射劑，但葛根素注射液的不良反應也較為嚴重，臨床有出現(xiàn)過溶血反應、發(fā)熱和丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶升高等現(xiàn)象，這可能由注射劑中加入的助溶劑丙二醇導致的。據(jù)報道，將葛根素制成磷脂復合物、固體分散體和微球等新劑型可有效提高口服生物利用度[4-8]。因此我們制備了葛根素磷脂復合物，并以常用的高分子材料作為助懸劑，制成葛根素磷脂復合物干混懸劑，提高葛根素的口服生物利用度、降低現(xiàn)有葛根素制劑的不良反應并增加吞咽困難患者的順應性。本文還建立了制劑質(zhì)控方法，對其混懸特點、再分散性、沉降體積比及穩(wěn)定性等方面進行了研究，為開發(fā)葛根素口服制劑提供一種新劑型。

1 儀器與試藥

紫外可見分光光度計（Lambda35型，美國PE公司）；電子分析天平（AL204型，梅特勒－托利多儀器有限公司）；激光散射儀（Hydro 2000型，英國馬爾文公司）；旋轉(zhuǎn)式黏度計（NDJ-1型，上海恒平科學儀器有限公司）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（RE-2000型，上海亞榮生化儀器廠）；葛根素原料藥（圣青生物科技有限公司，批號20151230，含量98.5%）；葛根素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號110752-201313，含量99.8%）；黃原膠、羥丙基甲基纖維素（HMPC）、聚乙烯吡咯烷酮（PVP K30）、泊洛沙姆188（Poloxamer188）、羧甲基纖維素鈉（CMC-Na） （上海卡樂康包衣技術(shù)有限公司），大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)股份有限公司），乳糖，甘露醇為藥用規(guī)格，水為重蒸水，其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 原料和輔料相容性試驗 參照預實驗結(jié)果，將葛根素、大豆卵磷脂、黃原膠、HMPC、PVP K30、Poloxamer188、CMC-Na和檸檬香精 （質(zhì)量比為10∶10∶2∶2∶20∶20∶1∶10∶1） 過80目篩混合均勻，分別置于高濕條件（RH75%）、高溫條件（60℃）和強光照射[（4500±500）lx]下放置10 d，考察原輔料的相容性。結(jié)果表明，葛根素和各輔料在高溫、高濕和光照條件下無影響，葛根素含量未降低。高濕條件對葛根素和輔料細粉的混合有一定影響，因此需要控制制劑室濕度。

2.2 葛根素磷脂復合物的制備 取葛根素50 g和大豆卵磷脂65 g溶于乙醇250 mL，在40℃恒溫攪拌2 h。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙醇，60℃干燥過夜，粉碎過100目篩，即得葛根素磷脂復合物。

2.3 單因素考察結(jié)合正交試驗優(yōu)化葛根素磷脂復合物干混懸劑處方 通過單因素試驗，確定了干混懸劑的處方組成，其中助懸劑采用黃原膠和HPMC，粘合劑為PVP K30，填充劑為乳糖和甘露醇。其中填充劑質(zhì)量變化對沉降體積無顯著影響，參照預實驗結(jié)果，乳糖和甘露醇按照6∶5比例加入。而助懸劑、粘合劑和葛根素磷脂復合物的含量對沉降體積比有顯著影響，每個因素設置3個水平，以沉降體積比為考察指標，采用L9(34)正交試驗篩選優(yōu)化處方。正交設計試驗的因素與水平見表1，正交實驗設計及結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 正交試驗的因素與水平

表2 正交試驗設計與結(jié)果

表3 正交試驗結(jié)果方差分析表

由正交試驗結(jié)果可見，各因素對沉降體積比的影響順序為C>B>A>D，即HPMC對沉降體積比的影響最大，方差分析表明各因素對沉降體積比的影響差異無統(tǒng)計學意義，根據(jù)以上結(jié)果，最優(yōu)化的搭配為A3B2C2D2，即最優(yōu)處方為含有15%葛根素磷脂復合物、8%黃原膠、2%HPMC和4%PVPK30。

2.4 驗證試驗 按照正交試驗優(yōu)化的處方，稱取8%黃原膠、2%HPMC、25%甘露醇和30%乳糖過篩混合均勻后，將葛根素磷脂復合物按等量遞加法加入其中，噴入10%PVP K30制成軟材，使得PVP K30的加入量為4%。18目篩制粒，置60℃烘箱中干燥，18目篩整粒同時噴灑0.5%檸檬香精，即得葛根素磷脂復合物干混懸劑。同法制備5批樣品進行制劑的質(zhì)量控制檢查。

3 質(zhì)量控制

本品為淡黃色顆粒，氣芳香，味甜。取5批葛根素磷脂復合物干混懸劑 （批號20170322、20170323、20170324、20170325、20170326），參照《中國藥典》2015年版第四部0123口服混懸劑的檢查項目和文獻方法[9-10]進行質(zhì)量檢查。

3.1 裝量與裝量差異 參照《中國藥典》2015年版第四部0942最低裝量檢查法檢查制劑的裝量，5批樣品的平均裝量為（3.96±0.15）g，高于標示裝量的93%，符合要求。裝量差異控制在平均裝量的3.79%，低于10%，符合要求。

3.2 干燥失重 參照《中國藥典》2015年版第四部0831干燥失重測定法進行，5批樣品的平均干燥失重為（0.91±0.07）%，未超過2.0%，符合要求。

3.3 沉降體積比 參照《中國藥典》2015年版第四部0123口服混懸劑進行沉降體積比的檢查，取葛根素磷脂復合物干混懸劑1.0 g，加水50 mL置于具塞量筒中，充分振搖1 min，記錄開始高度H0，靜置3 h，記錄混懸物的最終高度H，沉降體積比F=H/H0?！吨袊幍洹分幸驠應不低于0.90，F(xiàn)越大，表明混懸劑越穩(wěn)定。結(jié)果，自制5批樣品的平均沉降體積比為（0.93±0.01），符合要求。

3.4 再分散性 取葛根素磷脂復合物干混懸劑1.0 g，加水50 mL置于具塞量筒中，充分振搖后放置1周，得到沉降混懸液。將量筒倒置停留3 s再恢復豎直計為振搖1次。記錄樣品再分散需要振搖的次數(shù)來考察樣品的再分散性能。其中以不超過10次可均勻分散的為“好”，需要10～60次可均勻分散的為“良好”，超過60次仍可均勻分散的為“一般”，無法均勻分散者為“差”。結(jié)果，測得自制5批干混懸劑的再分散性能均為“好”?！吨袊幍洹肺磳⒈卷椓腥霗z查項目，為考察干混懸劑特性，體現(xiàn)可再分散的特點，參考文獻方法進行本項目檢查。

3.5 制劑形態(tài)和粒徑分布 以顯微鏡觀察制劑形態(tài)，粒度測定儀測定制劑的粒度分布。顯微鏡下可見干混懸劑呈顆粒狀，大小均勻，葛根素干混懸劑的粒度見圖1，制劑中粒徑4～8μm的顆粒相對體積約為80%。

圖1 葛根素磷脂復合物干混懸劑粒度分布圖

3.5 黏度及流變性能 用旋轉(zhuǎn)式黏度計測定葛根素磷脂復合物干混懸劑的剪切應力，制劑黏度為67 mPa·s，流動曲線見圖2，葛根素干混懸劑為假塑性流體，流動性良好。

圖2 流變性能曲線

3.6 含量測定

3.6.1 供試品溶液的制備方法 精密量取0.1 g干混懸劑置于100 mL容量瓶中加入75%乙醇超聲15 min，放冷定容至刻度。取出5 mL置于10 mL容量瓶中加入75%乙醇定容至刻度，取續(xù)濾液在250 nm處測定吸光度（A），隨行空白，以外標法計算干混懸劑中的葛根素含量。

3.6.2 專屬性考察 葛根素在250 nm處有最大吸收，因此在250 nm處測定葛根素含量。按照處方比例制備不含葛根素的空白干混懸劑供試液，紫外分光光度計分析，測定吸光度值（A），空白干混懸劑供試液在250 nm無吸收，不干擾葛根素的含量測定。

3.6.3 線性范圍考察 精密量取葛根素對照品10.4 mg以乙醇溶解定容，制成濃度為1.04 mg/mL的葛根素對照品儲備液。精密量取1.0、2.0、4.0、8.0、16.0 mL分別置于100 mL量瓶中，以乙醇定容至刻度。以吸光度（A）對濃度（C）繪制標準曲線，回歸方程為A=15.905C-1.649（r=0.9998）。結(jié)果表明，葛根素濃度在4.16～66.56μg/mL范圍內(nèi)線性關系良好。

3.6.4 精密度試驗 取16.64 mg/L的對照品溶液于同日內(nèi)重復測定6次，另外連續(xù)測定6 d，計算RSD。結(jié)果日內(nèi)、日間的相對標準偏差（RSD） 為0.64%、1.28%，表明本法精密度良好。

3.6.5 回收率考察 精密稱取已知含量的樣品（批號20170326） 0.1 g共9份，分別加入相當于樣品含量80%、100%、120%的葛根素對照品各3份，依法測定，計算含量，結(jié)果見表4，平均加樣回收率為98.76%，RSD為1.81%，符合分析方法要求。

表4 葛根素回收率試驗結(jié)果

3.6.6 樣品含量測定 取5批樣品 （批號20170322、20170323、20170324、20170325、20170326），按照樣品測定項下測定，樣品含量均在標示量的90%～110%范圍內(nèi)，符合要求。

3.6.7 穩(wěn)定性試驗 取5批樣品于40℃、75%濕度的條件下放置6個月，干混懸劑的平均含量（標示量%）、粒徑分布以及沉降體積比和再分散性見表5。穩(wěn)定性試驗結(jié)果表明，干混懸劑含量無明顯變化，粒徑未顯著增加，粒徑分布無明顯變化，干混懸劑穩(wěn)定性良好。

表5 葛根素干混懸劑穩(wěn)定性加速試驗結(jié)果

4 討論

本文參照文獻[9]方法建立了葛根素磷脂復合物干混懸劑的含量測定方法，結(jié)果表明，本法專屬性強，操作簡單快速，結(jié)果準確，可用于制劑的質(zhì)量控制。

干混懸劑是在混懸劑基礎上發(fā)展起來的劑型，使用時加入水即可迅速分散成混懸劑，可達到增強藥物穩(wěn)定性，提高制劑使用有效期的目的。制劑儲存運輸方便，患者服藥順應性好。干混懸劑處方中助懸劑的選擇是決定制劑的沉降體積比是否合格的關鍵，本文對制劑處方中影響沉降體積比的關鍵因素進行考察，通過正交實驗設計優(yōu)化，制得的干混懸劑符合要求，沉降體積比和再分散性好。

2015版《中國藥典》中將干混懸劑收載在口服混懸劑項下，對制劑的裝量及裝量差異、干燥失重和沉降體積比進行了規(guī)定，但對于干混懸劑的再分散性未做規(guī)定。結(jié)合已發(fā)表文獻和本文研究結(jié)果，建議將干混懸劑的再分散性列入干混懸劑制劑通則要求中，干混懸劑應至少達到良好的程度。

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