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    酶促反應循環(huán)煙酰胺型輔酶研究進展

    2018-06-27 20:10:18鄭遠迪惠秀娟
    農民致富之友 2018年8期
    關鍵詞:蘇氨酸煙酰胺輔酶

    鄭遠迪 惠秀娟

    煙酰胺型輔酶作為最為常見的一種輔酶,參與到多種生物體的氧化還原反應中。在體外酶反應的過程中,輔酶的需求量很高,為了節(jié)省成本,輔酶循環(huán)路徑成為了眾多研究的焦點,本文選取近年來在這方面的研究進展進行總結。

    1 介紹

    輔酶是一種可以與酶蛋白松散結合的有機小分子,對于促進特定酶反應的過程有十分重要的意義。輔酶Ⅰ煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NAD)與輔酶Ⅱ煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADP)均為重要的核苷酸類輔酶。煙酰胺型輔酶NAD(P)H作為氧化劑或還原劑直接參與到含有氧化還原酶的酶促反應中,加快了反應速率。

    但煙酰胺型輔酶NAD(P)H價格昂貴,輔酶成本往往大于產物收益,因此如何將輔酶進行循環(huán)利用是十分重要的課題。NAD+和NADP+為氧化態(tài), NADH、NADPH為還原態(tài), 煙酰胺性輔酶循環(huán)再生的基本原理為氧化態(tài)輔酶和還原態(tài)輔酶通過加氫或脫氫的氧化還原反應相互轉化。

    輔酶循環(huán)研究目前有酶法,電化學法,光化學法等多種方法。根據(jù)分離難易程度,反應動力學以及反應成本等多方面考慮,在反應體系中構建多酶催化從而實現(xiàn)輔酶循環(huán)再生的方法最為經(jīng)濟實惠。

    2 煙酰胺型輔酶循環(huán)

    2.1 NAD+與NADH循環(huán)

    NAD+參與的氧化還原反應中,起到電子和氫傳遞作用的主要是分子中的煙酰胺單核苷酸(NMN),可結合的酶種類較多,研究意義重大。

    Francesco G. Mutti,等人在通過雙酶氫借用級聯(lián)將醇轉化為對映體純的胺的實驗中, 選擇了一種高度對映選擇性催化氫化的伯和仲醇,只需要兩個生物催化劑,即ADH和胺脫氫酶(AmDH)。氧化還原自足循環(huán)使用銨離子/氨作為氮源并僅產生水作為副產物。級聯(lián)僅需要催化量的煙酰胺輔酶,其將氫化物從氧化步驟轉移到還原步驟。該方法已成功地應用于具有反轉構型的光學活性仲醇的胺化,并且在第一步與第二步反應中間實現(xiàn)了輔酶循環(huán)。

    多酶反應步驟復雜,不局限于一組輔酶循環(huán)。Rongsheng Tao 通過由L-蘇氨酸脫氨酶催化的脫氨基后續(xù)氫化反應進行L-2-氨基丁酸的生物合成,然后由L-蘇氨酸由L-蘇氨酸與甲酸脫氫酶或葡萄糖脫氫酶作為NADH再生系統(tǒng)催化的氫化反應。劉珊等人在合成L-2-丁酸的研究中,就在一鍋反應的體系中用到了酮還原酶作為輔酶循環(huán)體系的關鍵酶,產物易分離,降低分離成本跟時間。

    全細胞催化反應中,也會設計加入輔酶循環(huán)系統(tǒng)來完成復雜轉化。W. Brian Whitaker構建重組大腸桿菌,使其可以利用甲醇作為碳源,轉化生成生物量成分和高價值特種化學品。該研究中并未組成完整的閉合環(huán)路來循環(huán)輔酶,而是在多個酶促反應中,構建多個輔酶利用途徑,從而達到整體輔酶總量的循環(huán)。全細胞催化反應不僅反應穩(wěn)定,而且輔酶跟酶可以附著在細胞器上達到最大利用效率。

    固定化酶技術也可用于輔酶循環(huán)研究。Jinglin Fu 設計和構建人工搖擺通道多酶復合物與NAD +修飾的分子臂,以轉移兩個脫氫酶之間的氫化物。搖擺臂不僅顯著增強酶活性,而且在復雜環(huán)境中提供高特異性。輔酶因子距離擺動臂的距離以及游離度對整個反應進程都有著影響。Muqing Zheng, Zhiguo Su 將谷氨酸脫氫酶(GluDH),葡萄糖脫氫酶(GDH)和輔因子NAD(H)的多酶系統(tǒng)固定在磁性納米顆粒上,在外加磁場中能提高輔酶循環(huán)效率和酶穩(wěn)定性。

    2.2 NADP+與NADPH循環(huán)

    相比于NAD(H),NADP(H)的價格更為昂貴,如果能夠實現(xiàn)高效的循環(huán)再生,則能顯著提高反應的經(jīng)濟效益。由于NAP(H)的應用廣泛程度不如NAD(H),因此研究進展相對較少。

    茅佳靈和許琳研究乳酸合成體外代謝途徑時,構建了輔酶ⅡNADP+與NADPH循環(huán)。利用反應體系中的乳酸脫氫酶和非磷酸化的3-磷酸甘油醛脫氫酶兩條路線中的酶反應來實現(xiàn)NADP(H)的循環(huán)。并且實驗得出結論提高反應體系中NADP+ 初始濃度有利于提高乳酸的產率。

    Alexander Dennig 等人研究單取代苯在與三種同時酶的一鍋反應中轉化為對映純的L-酪氨酸衍生物反應。這第一步反應是苯首先通過工程化的P450合酶羥基化。第二部反應中工程化酪氨酸苯酚裂解酶催化C-C-偶聯(lián)反應,隨后用丙酮酸和氨作為共底物的酚的不對稱胺化。NADPH輔因子再循環(huán)與葡萄糖脫氫酶同時進行。

    有的反應關鍵酶就需要用到輔酶促進反應,可在反應中引入第二種酶進行循環(huán)反應。Gao, C.Zhang, L的研究構建了由來自氧化葡糖桿菌的NADPH依賴性羰基還原酶(Gox0644)和葡萄糖脫氫酶(GDH)組成的雙酶循環(huán)系統(tǒng),更高效的生產了具有經(jīng)濟價值的手性化學品(3S)-乙酰膽堿。

    輔酶在酶促反應中起著不可忽視的作用,甚至決定了整個反應的引發(fā)和走向。在酶促反應中加入其它酶從而達成輔酶循環(huán)目的,既能調節(jié)反應平衡,達到最大產率,又能降低成本提高經(jīng)濟效益。但由于多酶反應體系復雜,選取合適的酶構建循環(huán)系統(tǒng)成為了今后研究的重點難點。

    (作者單位:110000遼寧大學環(huán)境學院)

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