柴晶美,周麗雅,李 欣
(長春中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院,長春 130117)
參景固本方由紅景天、人參、山楂等中藥組成,補(bǔ)中寓清,具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力及抗氧化作用,適用于亞健康人群扶正固本、延緩衰老的治療作用[1-2]。本研究采用D -半乳糖誘導(dǎo)致亞急性衰老模型大鼠,觀察其體質(zhì)量變化、胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、腦組織中MDA、SOD值及血脂含量,進(jìn)一步分析參景固本方抗氧化、延緩衰老的作用機(jī)制,為其臨床應(yīng)用提供實(shí)驗依據(jù)。
1.1 動物 SD雌性大鼠60只,體質(zhì)量180~220 g,許可證號:SCXK(遼)2015-0001。
1.2 試劑與藥品 參景固本方:紅景天、人參、山楂(安徽易元堂中藥飲片有限公司)。按照常規(guī)煎煮藥材方法制成1 g生藥/mL的藥液,4 ℃冷藏備用。D -半乳糖(源葉生物);金匱腎氣丸(北京同仁堂),MOD、T-SOD、TG、T-CHO、HDL-C試劑盒(南京建成生物)。
1.3 分組、造模與給藥 將60只大鼠隨機(jī)分為6組,即正常對照組、模型組、參景固本方低(4 g/kg)、中(8 g/kg)、高(16 g/kg)劑量組及金匱腎氣丸(1 g/kg)組,各10只,自由飲食飲水。適應(yīng)性喂養(yǎng)2 d后進(jìn)行實(shí)驗,實(shí)驗前記錄大鼠初始體質(zhì)量。正常對照組和模型組灌胃等量生理鹽水,參景固本方組灌胃給藥,1次/d;同時全部大鼠(除正常對照組外)按125 mg/kg劑量頸背部皮下注射D -半乳糖,正常對照組以等體積生理鹽水注射,灌胃與注射同時進(jìn)行,連續(xù)42 d。
1.4 大鼠胸腺和脾臟指數(shù)的測定 末次給藥后稱量各大鼠體質(zhì)量。大鼠麻醉后,完整剝離胸腺與脾臟,用生理鹽水沖洗2次后濾紙吸干水分,進(jìn)行稱重。計算脾臟指數(shù)及胸腺指數(shù)。
1.5 大鼠腦組織中MDA和SOD值的測定 大鼠麻醉后迅速取腦組織,用冰冷的生理鹽水沖洗后,取部分腦組織低溫環(huán)境下勻漿取上清液備用。按照試劑盒說明書的操作步驟,測定MDA和SOD值。
1.6 大鼠體質(zhì)量變化及血脂的測定 大鼠麻醉后,腹腔動脈取血,1 500 r/min離心15 min。取上清液,按照試劑盒說明書的操作步驟,測定TG、TC及HDL-C值。
1.7 統(tǒng)計學(xué)方法 數(shù)據(jù)采用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS 19.0進(jìn)行分析,結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,2組間比較進(jìn)行t檢驗,多組均數(shù)間比較采用方差分析,以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2.1 6組大鼠體質(zhì)量變化及增重比率變化比較 見表1。
表1 6組大鼠體質(zhì)量變化及增重比率變化比較( ,n = 10) g
表1 6組大鼠體質(zhì)量變化及增重比率變化比較( ,n = 10) g
注:與正常對照組比較,## P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與金匱組比較,▲P<0.05
組 別 第1天體質(zhì)量 第42天體質(zhì)量 增重比率正常對照組 197.6±4.7 295.3±17.5 0.49±0.11模型組 196.3±5.1 259.4±13.9 0.31±0.08##低劑量組 197.6±7.7 267.1±9.8 0.35±0.07△△▲中劑量組 198.7±5.2 276.3±19.6 0.40±0.11△△高劑量組 197.3±4.2 284.9±22.8 0.44±0.13△△金匱組 196.3±5.1 291.1±25.0 0.48±0.13△
2.2 6組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)變化比較 見表2。與金匱組比較,參景固本方低劑量組和中劑量組胸腺指數(shù)降低(P<0.01,P<0.05),高劑量組變化不明顯,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
表2 6組大鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)變化比較(x± ,n = 10) mg/g s
2.3 6組對大鼠腦組織中MDA含量和SOD活性比較 見表3。與模型組相比,參景固本方中劑量組SOD活性明顯升高(P<0.05),高劑量組SOD活性顯著升高,MDA含量顯著降低(P<0.01),金匱組SOD活性也顯著升高(P<0.01)。
表3 6組大鼠腦組織中MDA含量和SOD活性比較(,n = 10) mg/mL
表3 6組大鼠腦組織中MDA含量和SOD活性比較(,n = 10) mg/mL
注:與正常對照組比較,# P<0.05;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01
組 別 MDA SOD正常對照組 3.41±0.14 170.57±26.97模型組 4.46±0.93# 130.23±45.98#低劑量組 4.03±0.16 151.25±56.90中劑量組 3.87±0.31△ 174.28±29.23△高劑量組 3.12±0.56△△ 194.13±49.44△△金匱組 3.76±0.20△ 180.63±12.94△△
2.4 6組大鼠血清中TG、T-CHO及HDL-C含量比較 見表4。與金匱組比較,高劑量組TG和T-CHO含量升高(P<0.01,P<0.05),HDL-C含量明顯降低(P<0.05)。
表4 6組大鼠血清中TG、T-CHO及HDL-C含量比較( ,n = 10) mmol/L
表4 6組大鼠血清中TG、T-CHO及HDL-C含量比較( ,n = 10) mmol/L
注:與正常對照組比較,# P<0.05,## P<0.01;與模型組比較,△ P<0.05,△△P<0.01;與金匱組比較,▲ P<0.05,▲▲ P<0.01
組 別 TG T-CHO HDL-C正常對照組 1.55±0.36 1.71±0.21 0.73±0.31模型組 1.31±0.19# 1.57±0.33 1.29±0.34##低劑量組 1.17±0.20## 1.69±0.12 1.25±0.43##中劑量組 1.20±0.27## 1.79±0.18△△ 0.83±0.19△△高劑量組 1.44±0.17▲▲ 1.84±0.36△△▲ 0.61±0.17△△▲金匱組 1.12±0.13## 1.51±0.26 0.96±0.29#
研究[3-6]表明,參景固本方中紅景天、人參、山楂均具有抗氧化、抗衰老作用,同時山楂也有改善血脂的作用。免疫衰老是機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生的一系列極其復(fù)雜的反應(yīng)過程,通常會伴有免疫指標(biāo)的退行性改變[7]。胸腺和脾臟作為重要的免疫器官對 T 淋巴細(xì)胞和 B 淋巴細(xì)胞的分化、發(fā)育、免疫有重要作用,因此胸腺、脾臟指數(shù)常用來評價機(jī)體的免疫功能[8-9]。MDA是常用的膜脂過氧化指標(biāo),其含量可間接反映機(jī)體衰老的程度[10]。SOD 是機(jī)體中重要的抗氧化酶,可清除機(jī)體內(nèi)超氧陰離子自由基,從而保護(hù)細(xì)胞膜免受氧自由基的損傷[11]。
本實(shí)驗研究發(fā)現(xiàn),在連續(xù)42 d的藥物注射后D -半乳糖致亞急性衰老模型的大鼠的增重率、胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)明顯低于正常對照組,同時腦組織中MDA含量顯著增加,SOD、T-AOC活性明顯減低。實(shí)驗結(jié)果表明,經(jīng)參景固本方治療后,增重率有所提高,說明參景固本方可改善衰老模型大鼠的營養(yǎng)不良及形體消瘦情況。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的增加表明參景固本方對衰老大鼠的胸腺、脾臟的萎縮有一定的延緩作用。用參景固本方干預(yù)后可提高腦組織中SOD活性,進(jìn)而減少M(fèi)DA含量。結(jié)果提示,參景固本方可通過提高抗氧化酶的活力來減少脂質(zhì)過氧化物的生成,從而提升機(jī)體抗氧化、抗衰老的作用。在血脂調(diào)節(jié)方面,模型組TG、HDL-C含量明顯低于正常對照組,這與D -半乳糖干預(yù)致衰老大鼠五臟功能下降,功能障礙導(dǎo)致的營養(yǎng)不良有關(guān),實(shí)驗結(jié)果表明,參景固本方高劑量組與正常對照組TG、T-CHO及HDL-C含量均無顯著性差異,說明參景固本方具有一定的改善血脂平衡的作用,為參景固本方的臨床應(yīng)用提供了藥理學(xué)依據(jù)。
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