幾種消毒劑對(duì)凡納濱對(duì)蝦致病性弧菌的殺滅作用*

劉志軒 王印庚① 張 正 王 凱蔡生力 包海巖 姚學(xué)良 張 振

(1. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院 上海 201306；2. 青島海洋科學(xué)與技術(shù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)室海洋漁業(yè)科學(xué)與食物產(chǎn)出過程功能實(shí)驗(yàn)室 農(nóng)業(yè)部海洋漁業(yè)可持續(xù)發(fā)展重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所 青島 266071；3. 天津市水產(chǎn)技術(shù)推廣站 天津 300321；4. 青島遠(yuǎn)大海洋生物科技有限公司 青島 266035)

近年來，在凡納濱對(duì)蝦(Litopenaeus vannamei)養(yǎng)殖中，流行一種新的疾病——統(tǒng)稱為急性肝胰腺壞死病(Acute Hepatopancreatic Necrosis Disease, AHPND)，其傳播速度快、致病力強(qiáng)、死亡率高。該病以肝胰腺壞死為主要特征，患病對(duì)蝦體色發(fā)紅，殼軟，肝胰腺變?yōu)榧t褐色、腫大后呈纖維化萎縮，空腸，空胃，3～5 d死亡率可達(dá) 90%以上(徐含穎等, 2015)。該病最初于2010年在我國(guó)海南省首次發(fā)現(xiàn)，隨后迅速傳播至全國(guó)大部分對(duì)蝦養(yǎng)殖區(qū)，排塘率高達(dá)80%，對(duì)凡納濱對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大損失(徐含穎等, 2015)。越南和馬來西亞分別在2010年和2011年相繼報(bào)道了該疾病的發(fā)生(Leano, 2012)。

目前，對(duì)于 AHPND病原尚存在不同的看法(Suebsing et al, 2013; 劉群等, 2014)。Lightner等(2012)首先報(bào)道了 AHPND的致病原是副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)，之后有學(xué)者指出副溶血弧菌分為致病株和非致病株，并非所有菌株具有致病性(Kondo et al, 2014; Yang et al, 2014)。隨后，又有多篇報(bào)道證明AHPND是由副溶血弧菌引起。雖然尚不清楚是否所有的AHPND都是由一個(gè)或多個(gè)特定的副溶血弧菌菌株引起，但通過控制弧菌可以大大減少AHPND暴發(fā)的風(fēng)險(xiǎn)(Gomez-Gill et al, 2014; De et al, 2014)。我國(guó)海岸線漫長(zhǎng)，養(yǎng)殖環(huán)境復(fù)雜，該病的致病原具有病原的多樣性，AHPND有多種細(xì)菌性致病原，其中，副溶血弧菌檢出率最高(黃志堅(jiān)等, 2016)。2013～2016年間，作者先后在山東、天津、河北、浙江、江蘇等地進(jìn)行了凡納濱對(duì)蝦AHPND流行病學(xué)調(diào)查和病原學(xué)研究。在多地患病對(duì)蝦樣品中，副溶血弧菌、哈維氏弧菌(Vibrio harveyi)、溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)和Vibrio sp. Ex25具有較高檢出率，分離的4株菌均可引起與AHPND相似的臨床癥狀。因此，副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp. Ex25都是AHPND的疑似致病菌(另文報(bào)道)。

目前，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中對(duì)蝦疾病防控的常規(guī)措施有：投放健康、無特定病原的苗種；養(yǎng)殖環(huán)境定期消毒；使用微生態(tài)制劑調(diào)控水質(zhì)和生態(tài)菌群結(jié)構(gòu)；投喂衛(wèi)生餌料以及口服專用藥物等(張水波, 2013; 趙永鋒等, 2014)。一般情況下，養(yǎng)殖者對(duì)養(yǎng)殖環(huán)境進(jìn)行定期消毒是最常見的防控手段。常用的消毒劑是聚維酮碘(PVPI)和二氧化氯(ClO2)(張繼平等, 2004; 吳崗等,2016)，聚維酮碘對(duì)病毒、細(xì)菌、真菌及霉菌孢子都有較強(qiáng)的殺滅作用，二氧化氯能高效率消滅原生動(dòng)物、孢子、霉菌、水藻和生物膜，但這兩種消毒劑在養(yǎng)殖生產(chǎn)上的應(yīng)用具有一定的缺點(diǎn)：碘是國(guó)家戰(zhàn)略物資，使用成本較高，同時(shí)它也具有著色和腐蝕作用；二氧化氯對(duì)大部分生物有藥害作用，同時(shí)，容易傷害單胞藻而形成倒藻。而雙氧水(H2O2)、聚六亞甲基胍(PHMG)作為新興消毒劑，具有價(jià)格適中、高效殺菌、安全、無殘留等優(yōu)點(diǎn)(李志富等, 2009; 張慧等, 2010)。

本研究擬從聚六亞甲基胍、雙氧水、聚維酮碘及二氧化氯對(duì)4株致性弧菌的殺滅效果分析入手，篩選出適合對(duì)蝦健康養(yǎng)殖的高效消毒劑，以期為AHPND防控和對(duì)蝦健康養(yǎng)殖提供技術(shù)支撐和理論參考。

1 材料與方法

1.1 菌種來源及菌懸液的制備

實(shí)驗(yàn)用的菌種為副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌和 Vibrio sp. Ex25(編號(hào)分別為 PV130903A、PV140731A、PV150526A和PV140821A)，該4株菌株均從患AHPND凡納濱對(duì)蝦肝胰腺組織內(nèi)分離，且經(jīng)人工感染實(shí)驗(yàn)證實(shí)可引起與AHPND相似的臨床癥狀和組織病理特征，證實(shí)為AHPND的致病菌(姜燕,2016)。

將4株細(xì)菌于TSB培養(yǎng)基在28℃下培養(yǎng)24 h，在無菌條件下挑到 1.5%的滅菌生理鹽水中混勻，用麥?zhǔn)媳葷峁艹鯗y(cè)菌懸液的濃度，然后將其稀釋到105CFU/ml左右；槍吸取0.1 ml菌懸液加入到0.9 ml滅菌生理鹽水中使其稀釋10倍，依次稀釋100倍、1000倍，取0.1 ml稀釋液涂布到TSB培養(yǎng)基上對(duì)菌懸液進(jìn)行準(zhǔn)確定量，每種菌懸液設(shè)3個(gè)平行組，菌懸液的濃度為3組數(shù)據(jù)的平均值。

1.2 消毒劑及培養(yǎng)基的制備

聚六亞甲基胍[(C7H16N3Cl)n]，淡琥珀色溶液，有效活性成分25%，由上海黛龍生物工程科技有限公司提供。雙氧水，過氧化氫(H2O2)有效含量為30%，無色透明液體，由國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司提供。聚維酮碘(C6H9I2NO)，棕黃色細(xì)滑粉末，為聚乙烯吡咯烷酮和碘的有機(jī)復(fù)合物，純度98%，由上海索橋生物有限公司提供。二氧化氯(ClO2)，白色顆粒，含有效氯 8%，由山東西亞化學(xué)股份有限公司提供。TSB和TCBS培養(yǎng)基均由南京美博生物科技有限公司提供。

1.3 初試殺菌實(shí)驗(yàn)

參考各種消毒劑在水產(chǎn)中實(shí)際應(yīng)用的潑灑濃度，適當(dāng)擴(kuò)大和縮小一定倍數(shù)后設(shè)計(jì)消毒實(shí)驗(yàn)濃度。將各種實(shí)驗(yàn)藥物分別用滅菌蒸餾水配制成一定濃度的消毒劑，定量加入到菌懸液中制成含有一定消毒劑濃度的菌懸液，按照實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)反應(yīng)一定時(shí)間后，分別從各個(gè)試管取0.1 ml混合液均勻涂布在TSB培養(yǎng)基上，28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48 h后，肉眼觀察菌落生長(zhǎng)情況以檢測(cè)滅菌效果，每個(gè)濃度梯度設(shè)2個(gè)平行組，同時(shí)，設(shè)定 1個(gè)空白對(duì)照組(施慧等, 2006)。通過初試殺菌實(shí)驗(yàn)，選取各消毒劑合適的殺菌濃度，分別設(shè)定如下：0、0.1、0.5、1.0 μl/L 的 PHMG；0、0.1、0.5、1.0 μl/L 的 H2O2；0、6.0、8.0、10.0 μl/L 的 PVPI；0、0.5、1.0、2.0 μl/L 的 ClO2。

1.4 對(duì)4種病原菌的殺滅實(shí)驗(yàn)

1.4.1 含消毒劑菌懸液配制 配制菌懸液，按照初試結(jié)果加入消毒劑，配制含有一定消毒劑的菌懸液。

1.4.2 消毒劑殺滅病原菌效果的檢測(cè) 從加入消毒劑開始計(jì)時(shí)，在10 min、1 h、2 h、3 h、6 h、12 h和 24 h分別從每個(gè)試管中取 0.1 ml混合液加入到0.9 ml滅菌的生理鹽水中，混勻后從中取0.1 ml涂布到 TSB固體培養(yǎng)基上，在 28℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24～48 h，觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況，每個(gè)濃度梯度設(shè) 2個(gè)平行組。

1.5 聚六亞甲基胍對(duì)對(duì)蝦養(yǎng)殖池水的殺菌作用觀察

1.5.1 對(duì)蝦養(yǎng)殖池水水質(zhì)指標(biāo) 養(yǎng)殖水源為自然海水，經(jīng)過送水渠引入蓄水池，再經(jīng)消毒、沉淀后以 60目篩絹過濾進(jìn)入養(yǎng)殖池。投苗密度為約3～3.3萬尾/池，投放消毒劑時(shí)，池塘內(nèi)養(yǎng)殖對(duì)蝦規(guī)格約為180尾/kg。養(yǎng)殖期間，水溫為28℃～29℃，鹽度為29～30，pH為7.3～7.8，溶解氧保持在4.5 mg/L以上。

1.5.2 聚六亞甲基胍使用劑量與殺滅弧菌效果檢測(cè)

養(yǎng)殖池 1～3號(hào)、4～6號(hào)、7～9號(hào)全池潑灑 PHMG，終濃度分別為0.5、1和2 μl/L；10～12號(hào)池為對(duì)照組，不采取消毒措施。投苗后第55天開始潑灑PHMG，1～9號(hào)養(yǎng)殖池實(shí)驗(yàn)期間每15 d全池潑灑PHMG一次。

潑灑 PHMG進(jìn)行消毒前，取水樣進(jìn)行弧菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，統(tǒng)計(jì)初始弧菌總量；潑灑PHMG后，每日16:00取水樣進(jìn)行弧菌培養(yǎng)計(jì)數(shù)，追蹤每日弧菌總量的變化。水樣的采集和弧菌計(jì)數(shù)方法：使用2 L有機(jī)玻璃采水器，取水面以下50 cm的水樣，每池塘固定4個(gè)取樣點(diǎn)，然后用滅菌的三角燒瓶各收集水樣 200 ml均勻混合在一起；將采集的水樣用 1.5%的滅菌生理鹽水稀釋10倍、100倍、1000倍，每個(gè)濃度取100 μl液涂布于選擇性弧菌培養(yǎng)基TCBS平板上，每個(gè)濃度2個(gè)平行，28℃倒置培養(yǎng)24～48 h，計(jì)數(shù)，取平均值，計(jì)算出每毫升水中的總弧菌數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 空白對(duì)照組菌懸液濃度隨時(shí)間的變化

從空白對(duì)照曲線發(fā)現(xiàn)，在 1.5%的生理鹽水中，最初10 min內(nèi)，4株病原菌的濃度均有小幅度增長(zhǎng)，增幅為0.18%～0.59%；其中，Vibrio sp. Ex25濃度增長(zhǎng)最少，溶藻弧菌濃度增長(zhǎng)最高，這可能和細(xì)菌的初始濃度不同有關(guān)；隨著時(shí)間的推移，4株病原菌的濃度有所下降，但下降趨勢(shì)比較平緩，在 24 h后仍然保持較高的濃度，細(xì)菌濃度降低 4.77%～13.58%；其中，溶藻弧菌濃度下降最小，而Vibrio sp. Ex25細(xì)菌濃度下降最大；4種細(xì)菌濃度下降幅度不大，說明生理鹽水對(duì)細(xì)菌的存活與繁殖影響不大。

圖1 空白對(duì)照組菌懸液濃度隨時(shí)間的變化Fig.1 The variation of bacterial concentration in the control

2.2 4種消毒劑對(duì)4種病原菌的殺滅

在殺菌濃度及殺菌時(shí)間的關(guān)系上，0.5 μl/L PHMG作用3 h、1 μl/L PHMG作用10 min均可完全殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25三種細(xì)菌；1 μl/L PHMG作用2 h可完全殺滅溶藻弧菌。

0.5 μl/L的 H2O2作用 2 h可完全殺滅 Vibrio sp.Ex25；1 μl/L的H2O2作用10 min可完全殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25；1 μl/L的H2O2作用2 h可完全殺滅溶藻弧菌；

6 μl/L 的 PVPI作用 2 h、8 μl/L 的 PVPI作用 1 h均可完全殺滅副溶血弧菌和 Vibrio sp. Ex25；8 μl/L的PVPI作用6 h可完全殺滅哈維氏弧菌和溶藻弧菌；10 μl/L的PVPI作用10 min即可完全殺滅4種細(xì)菌。

2 μl/L的ClO2作用10 min可完全殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25三種細(xì)菌；2 μl/L的ClO2作用1 h可完全殺滅溶藻弧菌。

低濃度實(shí)驗(yàn)中，0.1 μl/L PHMG作用24 h，對(duì)4種細(xì)菌的殺滅率分別為10.24%～38.84%、15.43%～41.36%、7.24%～35.95%和 12.36%～44.42%；0.5 μl/L PHMG 作用3 h，對(duì)副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25三種細(xì)菌的殺滅率分別從 50.95%、67.55%、64.67%增長(zhǎng)到100%；0.5 μl/L PHMG作用24 h，對(duì)溶藻弧菌的殺滅率為34.14%～75.94%。

0.1 μl/L的H2O2對(duì)副溶血弧菌作用2 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率為 37.48%；0.1 μl/L的 H2O2對(duì)哈維氏弧菌、溶藻弧菌、Vibrio sp. Ex25作用3 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率分別為 47.73%、39.78%和 40.21%；0.5 μl/L的H2O2對(duì)副溶血弧菌作用1 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率為 89.95%；0.5 μl/L的 H2O2對(duì)哈維氏弧菌、溶藻弧菌作用 2 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率分別為89.98%和 72.46%；各濃度組在殺菌峰值之后殺滅率逐步降低。

0.5 μl/L的 ClO2對(duì)副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25作用3 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率分別為75.53%、80.49%和78.99%；1 μl/L的ClO2對(duì)副溶血弧菌作用 2 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率為 81.68%；1 μl/L的ClO2對(duì)哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25作用3 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率分別為 86.54%和 85.98%；0.5 μl/L 的 ClO2、1 μl/L 的 ClO2對(duì)溶藻弧菌作用 6 h達(dá)到殺菌峰值，殺滅率分別為66.01%和75.72%；各濃度組在殺菌峰值之后殺滅率逐步降低。

2.3 聚六亞甲基胍對(duì)養(yǎng)殖池水的殺菌作用

養(yǎng)殖池塘中PHMG在0.5 μl/L濃度作用下第1、2、3和4天，弧菌的下降總量分別為48.32%、67.29%、75.98%和79.14%，第4天下降到最低值；PHMG在1 μl/L濃度下第 1、2、3天弧菌的下降總量分別為56.20%、74.51%和82.48%，第3天達(dá)到最低值。PHMG在2 μl/L濃度下第1、2、3天弧菌的下降總量分別為63.92%、81.24%和87.30%，第3天達(dá)到最低值。各實(shí)驗(yàn)組弧菌總量達(dá)到最低值后，其對(duì)蝦池水中的弧菌總量緩慢回升；在第11天，上述3個(gè)實(shí)驗(yàn)組弧菌總量仍然低于初始值的3.58%、5.53%和6.10%(圖1)。

圖2 PHMG對(duì)養(yǎng)殖池塘池水的殺菌效果Fig.2 Efficacy of PHMG in killing Vibrio

3 分析與討論

從殺滅實(shí)驗(yàn)的結(jié)果發(fā)現(xiàn)，隨著藥物濃度的升高，總體殺滅細(xì)菌的時(shí)間都呈現(xiàn)了縮短的趨勢(shì)，說明合適的消毒劑在適當(dāng)?shù)臐舛确秶鷥?nèi)可以有效地控制和殺滅4株病原菌。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，較低濃度的PHMG和雙氧水具有較好的殺菌效果，而二氧化氯及聚維酮碘殺滅4株病原菌需較高的濃度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，溶藻弧菌對(duì)本次選用消毒劑的耐受力都稍微高于其他 3種致病菌，這或許與起始時(shí)溶藻弧菌的濃度稍微較高以及溶藻弧菌特殊的適應(yīng)機(jī)制和存活策略的多樣性和有效性有關(guān)(姚剛等, 2012)，其中的作用機(jī)理有待于進(jìn)一步研究。由于各種消毒劑的消解及穩(wěn)定性不同，在殺菌時(shí)間上，10 min內(nèi)PHMG和雙氧水殺滅副溶血弧菌、哈維氏弧菌、Vibrio sp. Ex25三種細(xì)菌的最低濃度均為1 μl/L，而二氧化氯殺滅這3種細(xì)菌的最低濃度為 2 μl/L，聚維酮碘則需高達(dá) 10 μl/L才能完全殺滅4種病原菌；在1 h內(nèi)，2 μl/L二氧化氯可完全殺滅4株病原菌；在2 h內(nèi)，1 μl/L聚六亞甲基胍和雙氧水可完全殺滅4種病原菌；隨著時(shí)間的推移，聚六亞甲基胍和聚維酮碘顯示出持續(xù)殺菌的能力，殺菌率隨時(shí)間的推移逐漸升高，雙氧水和二氧化氯的殺菌率在達(dá)到峰值之后均有不同程度的下降，濃度越高，達(dá)到峰值殺菌率的時(shí)間越短，這可能與雙氧水和二氧化氯自身的消解作用有關(guān)。在本研究結(jié)果中，PHMG使用較小濃度可以在短時(shí)間內(nèi)完全殺滅4株病原菌，且在一定時(shí)間范圍內(nèi)隨著時(shí)間的推移對(duì) 4種細(xì)菌的殺滅率逐漸增高，顯示出高效且持續(xù)殺菌的能力。綜上所述，這4種消毒劑殺菌能力強(qiáng)弱的排序?yàn)榫哿鶃喖谆遥倦p氧水＞二氧化氯＞聚維酮碘。

表1 4種消毒劑對(duì)副溶血弧菌的殺滅實(shí)驗(yàn)Tab.1 Efficacy of four disinfectants in killing Vibrio parahemolyticus

表2 4種消毒劑對(duì)哈維氏弧菌的殺滅實(shí)驗(yàn)Tab.2 Efficacy of four disinfectants in killing Vibrio harveyi

表3 4種消毒劑對(duì)溶藻弧菌的殺滅實(shí)驗(yàn)Tab.3 Efficacy of four disinfectants in killing Vibrio alginolyticus

表4 4種消毒劑對(duì)Vibrio sp. Ex25的殺滅實(shí)驗(yàn)Tab.4 Efficacy of four disinfectants in killing Vibrio sp. Ex25

在養(yǎng)殖池塘池水的弧菌殺滅實(shí)驗(yàn)中，0.5 μl/L PHMG可使水體中弧菌總量第4天下降到最低值，下降總量為79.14%；1 μl/L PHMG可使水體中弧菌總量第 3天下降到最低值，下降總量為 82.48%；2 μl/L PHMG可使水體中弧菌總量第3天下降到最低值，下降總量為 87.30%；各實(shí)驗(yàn)組弧菌總量達(dá)到最低值后緩慢回升，第 11天時(shí)，3個(gè)實(shí)驗(yàn)組弧菌總量仍然低于初始值的 3.58%、5.53%和 6.10%。結(jié)果表明，使用PHMG全池消毒后可在第3～4天將養(yǎng)殖池水體內(nèi)的弧菌總量殺滅到最低值，有效持續(xù)控制養(yǎng)殖水體內(nèi)弧菌總量處于較低水平，顯示出長(zhǎng)久的持續(xù)抑菌和殺菌能力；根據(jù)PHMG對(duì)4株病原菌和池塘養(yǎng)殖水體內(nèi)弧菌的殺滅效果來看，使用0.5、1、2 μl/L三種濃度的 PHMG進(jìn)行養(yǎng)殖水體消毒，均可維持弧菌總量處于較低水平上，PHMG三種濃度下弧菌下降總量分別為79.14%、82.48%和87.30%，效果相差不大。考慮到成本，在養(yǎng)殖生產(chǎn)中建議使用 PHMG濃度為0.5～1 μl/L，每 15 d使用 1次，可有效預(yù)防 AHPND的發(fā)生。在潑灑 0.5、1.0、2.0 μl/L 三種濃度下，PHMG消毒劑未引發(fā)養(yǎng)殖對(duì)蝦的應(yīng)激反應(yīng)，整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間，對(duì)蝦體色正常、活力強(qiáng)、攝食狀態(tài)良好，保持健康的生理狀態(tài)。需要指出的是，本次實(shí)驗(yàn)在水色較濃的養(yǎng)殖水體內(nèi)進(jìn)行應(yīng)用，獲得了高效的殺菌效果，關(guān)于不同養(yǎng)殖水體內(nèi)有機(jī)物總量對(duì) PHMG的作用以及PHMG對(duì)單胞藻、水質(zhì)因子、浮游動(dòng)物的影響，今后尚需要進(jìn)一步精細(xì)化研究和追蹤分析。

目前，研究表明，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中使用二氧化氯作為消毒劑殺滅養(yǎng)殖水體中病原菌的同時(shí)，也能夠殺死大量藻類，因此，過量使用二氧化氯易引發(fā)養(yǎng)殖水體中藻類大量死亡(賈瑞寶等, 2003; 李紹秀等,2012)；大量的死亡藻體分解，不僅會(huì)增加氧氣的消耗，還會(huì)產(chǎn)生大量的氨氮和亞硝酸鹽，導(dǎo)致對(duì)蝦缺氧、中毒死亡。

聚維酮碘對(duì)多種細(xì)菌、芽孢、病毒、真菌等有殺滅作用。其作用機(jī)制是釋放游離碘，起到一種緩釋作用，以保持較長(zhǎng)時(shí)間的殺菌力，具有較好的殺菌效果。本研究中，聚維酮碘完全殺滅 4株病原菌，需要較高濃度(6～8 μl/L)，低濃度的聚維酮碘對(duì)副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌和Vibrio sp. Ex25的殺菌效果并不理想。相關(guān)研究表明，聚維酮碘對(duì)不同菌株的殺菌效果存在很大差異，高曉華等(2013)通過聚維酮碘對(duì)30種病原菌的殺菌力研究，得出聚維酮碘對(duì)副溶血弧菌、哈維氏弧菌、溶藻弧菌的敏感性較差。因此，聚維酮碘在養(yǎng)殖生產(chǎn)上預(yù)防AHPND的效果不理想。

雙氧水是一種公認(rèn)的環(huán)境友好型水產(chǎn)用藥，在本研究中，雙氧水對(duì)4株病原菌的殺滅作用在峰值殺菌率之后有所降低，這可能和雙氧水本身的快速消解作用有關(guān)(張清等, 2010; 劉志偉等, 2011)。在室外池塘的養(yǎng)殖生產(chǎn)過程中，養(yǎng)殖環(huán)境復(fù)雜多變，底泥、糞便及殘餌中含有大量有機(jī)物會(huì)降低雙氧水的殺菌作用。細(xì)菌等微生物在底泥的作用下可不斷繁殖并擴(kuò)散到池水中，因此，在室外池塘選用一種具有持續(xù)殺菌能力的消毒劑顯得格外重要。相比較而言，室內(nèi)工廠化養(yǎng)殖水體小、換水快，殘餌和糞便等排除率高，更適于應(yīng)用雙氧水進(jìn)行消毒。

PHMG是一種環(huán)保型高分子聚合物，在工業(yè)、農(nóng)業(yè)、醫(yī)用和日常生活中有廣泛的用途，而且價(jià)格低廉，無污染(黃新宇, 2015)，用于水產(chǎn)類消毒不會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌、病毒的耐藥性，且不會(huì)對(duì)單胞藻造成傷害，是一種高效、安全的新型消毒劑(李妮妮等, 2015)。

綜上所述，PHMG殺菌濃度低、殺菌速度快、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，對(duì)致病性弧菌具有良好殺菌效果。雙氧水次之，具有較好的殺菌速度和低濃度殺菌效果，但殺菌的持續(xù)時(shí)間不長(zhǎng)。比較而言，前二者優(yōu)于二氧化氯和聚維酮碘。上述結(jié)果對(duì)正確選擇和使用消毒劑，有效開展AHPND防控，實(shí)施對(duì)蝦健康養(yǎng)殖具有重要的現(xiàn)實(shí)意義和指導(dǎo)作用。

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