槲皮素通過影響Nrf2-Keap1信號(hào)通路減緩鎘中毒大鼠的生殖機(jī)能損傷

何 劉，李 慧，周厚繼，佟 翠，王佳美，李美琦，楊淑華*，何劍斌*

(1.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院，沈陽110866；2.四川省涼山州鹽源縣職業(yè)技術(shù)中學(xué)校，涼山615700)

鎘(Cd)是廣泛存在于環(huán)境中的一種重金屬污染物。自然界中，Cd主要以硫化鎘的形式與硫化鋅礦石伴生，是鋅礦石開采時(shí)的副產(chǎn)品。工業(yè)化重金屬污染，化石燃料等人類活動(dòng)都會(huì)影響Cd存在[1-2]。同時(shí)，Cd廣泛應(yīng)用于電鍍、油漆、防腐、塑料穩(wěn)定劑、電觸頭材料等。一旦被機(jī)體吸收，Cd將長期存在于人和動(dòng)物體內(nèi)，影響到多種器官，包括腎、心、肝、大腦等組織器官[3-5]。另有許多報(bào)道證實(shí)，雄性生殖系統(tǒng)對(duì)Cd極其敏感，睪丸內(nèi)低濃度的Cd就有可能引起雄性動(dòng)物生殖機(jī)能障礙。Cd能夠誘導(dǎo)成年雄性大鼠出現(xiàn)明顯的睪丸損傷、精子質(zhì)量下降、生殖細(xì)胞凋亡甚至不育，人類男性生殖機(jī)能同樣會(huì)受到Cd的影響。Cd致睪丸毒性是由氧化應(yīng)激和炎性作用引起的[6-7]。

槲皮素(QE)等一些天然黃酮類化合物對(duì)人和動(dòng)物健康的作用是近年來人們研究的熱點(diǎn)[8]。含有豐富QE的蔬菜有紫生菜、洋蔥、大蔥、藕、油豆角、西藍(lán)花等[9]。含QE的水果有蘋果、沙棘、柑橘等[10]。QE是一種抗氧化劑，已經(jīng)證明具有非常強(qiáng)大的抑制氧化應(yīng)激和細(xì)胞保護(hù)作用[11]，能夠有效清除體內(nèi)自由基，預(yù)防心血管疾病，保護(hù)肝免受損傷，而且QE可能直接跨越大腦-血液屏障對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)產(chǎn)生保護(hù)作用。Nrf2-Keap1信號(hào)通路是機(jī)體內(nèi)重要的抗氧化通路。Nrf2(Nu-clear erythroid related factor2)是調(diào)節(jié)Ⅱ相解毒酶和抗氧化相關(guān)的重要核轉(zhuǎn)錄因子，可通過與抗氧化反應(yīng)原件ARE(antioxidant response element)結(jié)合誘導(dǎo)相關(guān)抗氧化基因的表達(dá)，從而增強(qiáng)機(jī)體抗氧化應(yīng)激和抗氧化損傷的能力，而Kelch樣環(huán)氧氯丙烷相關(guān)蛋白Keap1(Kelch-like ECH-associated protein-1)與Nrf2結(jié)合時(shí)會(huì)抑制Nrf2的轉(zhuǎn)錄。已經(jīng)有研究表明在肝、肺等器官，QE能夠激活Nrf2信號(hào)通路并增加其表達(dá)發(fā)揮抗氧化作用[12-13]，但是對(duì)于QE在睪丸組織發(fā)揮抗氧化作用的研究有限。

因此，鑒于以上幾點(diǎn)原因，本研究探索QE是否可以減輕Cd致雄性大鼠生殖系統(tǒng)損傷及在此過程N(yùn)rf2-Keap1信號(hào)通路發(fā)揮的作用，為QE的優(yōu)化利用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

試驗(yàn)動(dòng)物為3月齡SPF級(jí)成年雄性Wistar大鼠32只，體重為(295±10)g，購于山東濟(jì)南朋悅實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育有限公司。大鼠在SPF級(jí)標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)舍內(nèi)分籠飼養(yǎng)，室內(nèi)溫度相對(duì)恒定，為(22±1) ℃，相對(duì)濕度為(50±1)%，每天12 h光照/黑暗交替。自由采食飼料，自由飲水。

1.2 試劑

CdCl2購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，QE購于美國Sigma公司。BCA蛋白定量試劑盒、丙二醛(MDA)檢測試劑盒、過氧化氫(H2O2)檢測試劑盒、還原型谷胱甘肽(GSH)檢測試劑盒、總超氧化物歧化酶(T-SOD)檢測試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)檢測試劑盒、過氧化氫酶(CAT)試劑盒、睪酮(T)酶聯(lián)免疫法吸附測定試劑盒均購于南京建成生物工程研究所?？俁NA提取試劑盒與反轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本TaKaRa公司，抗體全部購于美國Abcam公司。

1.3 儀器與設(shè)備

SW-CJ-1G超凈工作臺(tái)(江蘇凈通凈化設(shè)備有限公司)；海爾BCD-649WE雙開門冰箱(青島海爾集團(tuán))；AB104-S電子天平(瑞士METTLER TOLEDO)；PCR反應(yīng)擴(kuò)增儀(BIO公司)；FR980凝膠成像系統(tǒng)(上海復(fù)日科技有限公司)；DYY-6C型穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀(北京六一生物科技有限公司)；H6-1微型電泳槽(上海精益有機(jī)玻璃制品儀器廠)；DNR Bio Imaging Systems化學(xué)發(fā)光凝膠成像系統(tǒng)(以色列)。

1.4 動(dòng)物分組與處理

適應(yīng)環(huán)境1周后，將32只 Wistar大鼠隨機(jī)平均分為4組，每組8只。第Ⅰ組為對(duì)照組，每天以生理鹽水[0.5 mL·(kg·d)-1生理鹽水]灌胃；第Ⅱ組為Cd組，每天以CdCl2[5 mg·(kg·d)-1]溶液灌胃；第Ⅲ組為QE組，每天以QE[15 mg·(kg·d)-1]懸液灌胃；第Ⅳ組為Cd+QE[5 mg·(kg·d)-1CdCl2+15 mg·(kg·d)-1QE]，每天給予CdCl2溶液和QE懸液。CdCl2溶于生理鹽水成CdCl2溶液，QE溶于甘油∶生理鹽水=3∶2的溶液中成均勻懸液，連續(xù)灌胃1個(gè)月。鎘使用劑量參考A. Alkhedaide等[14]的研究結(jié)果，QE使用劑量參考C. Unsal等[15]的研究結(jié)果。

1.5 樣品采集與處理

對(duì)Wistar大鼠連續(xù)灌胃1個(gè)月，停止灌胃以后禁食禁水1 d，采集樣品進(jìn)行測定。首先記錄大鼠的體重，接下來使用乙醚對(duì)大鼠進(jìn)行麻醉，使用5 mL注射器進(jìn)行心臟采血，然后使用4 ℃離心機(jī)對(duì)血液進(jìn)行離心，獲得血清，用于睪酮檢測試驗(yàn)。大鼠脫頸處死，取出睪丸及附睪并稱重，雙側(cè)附睪立即放入3 mL 37 ℃預(yù)熱的生理鹽水中，將其剪碎，孵育20 min，用于檢測精液品質(zhì)。取大鼠一側(cè)睪丸放入4%多聚甲醛內(nèi)固定，另一側(cè)睪丸取一部分(300 mg左右)進(jìn)行精確稱重，加入適量預(yù)冷的生理鹽水[組織質(zhì)量(g)∶生理鹽水(mL)=1∶9 ]研磨成組織勻漿，3 000×g 4 ℃條件下離心10 min，取上清待用。其余睪丸立即放入液氮快速降溫，然后轉(zhuǎn)移到-80 ℃ 超低溫冰箱保存。

1.6 檢測指標(biāo)及方法

1.6.1 臟器系數(shù)測定 臟器系數(shù)=臟器質(zhì)量(mg)/大鼠體重(g)。

1.6.2 精液品質(zhì)的檢測 包括精子活率、精子總數(shù)和精子畸形率的檢測。

1.6.2.1 測定精子活率：將兩側(cè)附睪放入預(yù)熱好的的37 ℃生理鹽水中，剪碎。放入恒溫水浴鍋中孵育20 min，孵育好之后混勻，滴加到預(yù)熱過的細(xì)胞計(jì)數(shù)板上，調(diào)節(jié)顯微鏡，在高倍鏡下找到活動(dòng)的精子，計(jì)數(shù)其中200個(gè)精子中的活動(dòng)精子數(shù)，計(jì)算精子活率。

1.6.2.2 精子總數(shù)的檢測：完成精子活率測定后，將剩余上述精子懸液迅速轉(zhuǎn)移到60 ℃水浴鍋中5～10 min誘導(dǎo)精子失活，然后滴加到計(jì)數(shù)板上，調(diào)節(jié)顯微鏡，用紅細(xì)胞計(jì)數(shù)法計(jì)算精子數(shù)。

1.6.2.3 精子畸形率的檢測：使用蘇木素染色法制備精子圖片，在高倍鏡下觀察1 000個(gè)精子中精子的畸形數(shù)量，計(jì)算精子畸形率?；尉又饕譃轭^部畸形和尾部畸形，有無頭精子、雙頭精子、無尾精子、雙尾精子等。

1.6.3 睪丸組織病理學(xué)檢測 將大鼠的一側(cè)睪丸固定在4%多聚甲醛中，24 h后常規(guī)制片，HE染色。染色后，覆蓋載玻片，在恒溫培養(yǎng)箱干燥后于光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。

1.6.4 抗氧化功能變化檢測 使用BCA蛋白檢測法對(duì)新鮮10%組織勻漿樣品進(jìn)行蛋白質(zhì)定量?？寡趸癄顟B(tài)的檢測基于大鼠睪丸組織MDA、H2O2和GSH的含量變化及T-SOD、GSH-Px和CAT的活性變化，以上指標(biāo)的測定均使用商業(yè)試劑盒，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6.5 血清睪酮水平檢測 使用睪酮ELISA試劑盒檢測血清中睪酮水平的變化，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.6.6 基因轉(zhuǎn)錄檢測 根據(jù)總RNA提取試劑盒商業(yè)說明書提取睪丸組織總RNA。通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測睪丸組織Nrf2、GSH-Px、NQO1、Keap1、γ-GCS和HO-1基因轉(zhuǎn)錄情況。以260/280 nm的OD值確定總RNA的純度。β-actin為內(nèi)參基因。使用2-ΔΔCt法計(jì)算數(shù)據(jù)。PCR引物如表1所示。這些引物由中國上海生工研究所有限公司合成。

1.6.7 Weatern blot檢測 稱重睪丸組織100 mg，與0.99 mL RIPA裂解物、0.01 mL蛋白酶抑制劑PMSF混合。4 ℃，12 000×g離心5 min取上清液轉(zhuǎn)移到新的無酶離心管中。蛋白質(zhì)濃度使用BCA試劑盒定量。使用12%SDS-PAGE分離蛋白質(zhì)(每個(gè)樣品50 μg)，通過電泳轉(zhuǎn)移到PVDF膜上。將膜浸泡在5%脫脂奶粉中，在37 ℃恒溫振蕩器中封閉2 h后，將膜分別浸泡于Nrf-2(1∶1 000稀釋)，HO-1(1∶2 000稀釋)，Keap-1(1∶1 000稀釋)，GSH-Px(1∶1 000稀釋)，NQO-1(1∶1 000稀釋)和β-actin(1∶2 000稀釋)稀釋過的一抗中進(jìn)行孵育，4 ℃過夜。第2天，膜用PBST沖洗3次后，使用辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的二抗(1∶4 000稀釋)在常溫下孵育1 h。最后，用PBST沖洗3次后，使用ECL化學(xué)發(fā)光溶液曝光這些膜。 使用DNR生物成像系統(tǒng)顯示條帶的相對(duì)強(qiáng)度。

表1 各目的基因引物序列Table 1 The primers seqence of the target genes

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

2 結(jié) 果

2.1 大鼠睪丸及附睪臟器系數(shù)

由表2可知，與對(duì)照組相比，Cd組大鼠的睪丸與附睪的臟器系數(shù)極顯著降低(P<0.01)，QE組大鼠睪丸及附睪的臟器系數(shù)顯著升高(P<0.05)。Cd+QE組臟器系數(shù)高于Cd組，差異極顯著(P<0.01)。

2.2 大鼠精液品質(zhì)

由表3可知，與對(duì)照組相比，Cd組大鼠的精子總數(shù)、精子活率明顯降低，精子畸形率升高趨勢明顯，差異極顯著(P<0.01)；QE組與對(duì)照組相比，大鼠的精子總數(shù)、精子活率及精子畸形率無顯著差異。Cd+QE組大鼠的精子活率、精子總數(shù)與Cd組相比較，極顯著升高(P<0.01)，畸形率極顯著下降(P<0.01)。

表2 大鼠睪丸和附睪的臟器系數(shù)Table 2 The testis and epididymis coefficients in rats mg·g-1

*表示與對(duì)照組相比差異顯著P<0.05，**表示與對(duì)照組相比差異極顯著P<0.01；#代表與Cd組相比差異顯著P<0.05，##表示與Cd組比較差異極顯著P<0.01，下同
*represents significant difference compared with the control group atP<0.05,**represents significant difference compared with the control group atP<0.01;#represents significant difference compared with the Cd group atP<0.05,##represents significant difference compared with the Cd group atP<0.01, the same as below

表3 大鼠精液品質(zhì)Table 3 The semen quality in rats

2.3 組織病理學(xué)變化

圖1展示的是Wistar大鼠睪丸組織HE染色的結(jié)果，圖1A為對(duì)照組，大鼠睪丸組織中無明顯脫落的生殖細(xì)胞，生精上皮生殖細(xì)胞排列規(guī)則有序；圖1B為Cd組，生精小管結(jié)構(gòu)較紊亂、不規(guī)則，生精上皮細(xì)胞脫落情況嚴(yán)重且分層不明顯，如黑色箭頭所示。圖1C為QE組，大鼠睪丸生精小管結(jié)構(gòu)清晰，生精上皮生殖細(xì)胞排列有序，無脫落的生精細(xì)胞。圖1D為Cd+QE組，有部分生精上皮細(xì)胞損傷脫落，如黑色箭頭所示，生精小管結(jié)構(gòu)清晰，各級(jí)生精細(xì)胞排列基本整齊。

A.對(duì)照組；B. Cd組；C. QE組；D. Cd+QE組A. Testicular tissue of rats in the control group; B. Testicular tissue of rats in the Cd group; C. Testicular tissue of rats in the QE group; D. Testicular tissue of rats in the Cd+QE group圖1 大鼠睪丸組織顯微結(jié)構(gòu)(200×)Fig.1 Photomicrographs of testicular tissue(200×)

2.4 睪酮含量測定

與對(duì)照組血清中睪酮含量[(9.38±0.77)ng·mL-1]相比，Cd組血清中睪酮含量[(8.49±0.60)ng·mL-1]明顯降低(P<0.01),QE組睪酮含量[(11.45±0.70)ng·mL-1]極顯著增多(P<0.01)，Cd+QE組與Cd組相比，睪酮含量[(9.30±0.83)ng·mL-1]明顯增加，差異顯著(P<0.05)。

2.5 大鼠睪丸組織抗氧化功能變化

由表4可知，與對(duì)照組相比，Cd組MDA和H2O2含量極顯著升高(P<0.01)，且GSH含量極顯著降低(P<0.01)；QE組MDA和H2O2含量極顯著降低(P<0.01)，且GSH含量極顯著升高(P<0.01)。與Cd相比，Cd+QE組MDA和H2O2含量極顯著降低(P<0.01)，GSH含量顯著升高(P<0.05)。

與對(duì)照組相比，Cd組T-SOD、CAT、GSH-Px活性極顯著降低(P<0.01)，QE組T-SOD、CAT酶活性極顯著升高(P<0.01)，GSH-Px酶活性顯著升高(P<0.05)；與Cd組相比，Cd+QE組T-SOD、CAT、GSH-Px酶活性極顯著升高(P<0.01)。

表4 大鼠睪丸組織抗氧化功能的變化Table 4 Changes of antioxidant function of testicular tissue in rats

2.6 相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄情況

Nrf2-Keap1信號(hào)通路相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄情況如圖2所示。與對(duì)照組相比，Cd組Nrf2和γ-GCS基因轉(zhuǎn)錄量極顯著下降(P<0.01)，HO-1、NQO1、GSH-Px下降趨勢顯著(P<0.05)，而Keap1基因轉(zhuǎn)錄量明顯上升(P<0.01)；與對(duì)照組相比，QE組Nrf2、HO-1、NQO1、GSH-Px基因轉(zhuǎn)錄量顯著上升(P<0.05)，γ-GCS轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，而Keap1基因轉(zhuǎn)錄量顯著下降(P<0.05)。與Cd組相比，Cd+QE組Nrf2基因轉(zhuǎn)錄量極顯著上升(P<0.01)，HO-1、NQO1、γ-GCS、GSH-Px轉(zhuǎn)錄量顯著上升(P<0.05)，而Keap1基因轉(zhuǎn)錄量顯著下降(P<0.05)。

圖2 大鼠睪丸組織中Nrf2-Keap1信號(hào)通路相關(guān)基因相對(duì)轉(zhuǎn)錄量Fig.2 Relative transcription of genes of Nrf2-Keap1 signaling pathway in testis

2.7 相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)情況

各組大鼠睪丸組織中Nrf2相關(guān)基因的蛋白表達(dá)量如圖3所示。與對(duì)照組相比，Cd組Nrf2、NQO1、GSH-Px蛋白表達(dá)量極顯著下降(P<0.01)，γ-GCS、HO-1蛋白表達(dá)量顯著下降(P<0.05)、而Keap1蛋白表達(dá)量極顯著上升(P<0.01)；與對(duì)照組相比，QE組Nrf2和GSH-Px表達(dá)量顯著上升(P<0.05)，HO-1、NQO1、γ-GCS蛋白量極顯著上升(P<0.01)，而Keap1蛋白表達(dá)量極顯著下降(P<0.01)。與Cd組相比，Cd+QE組Nrf2和NQO1蛋白表達(dá)量極顯著上升(P<0.01)、HO-1、γ-GCS、GSH-Px表達(dá)量顯著上升(P<0.05)，而Keap1蛋白表達(dá)量顯著下降(P<0.05)。

圖3 大鼠睪丸組織中Nrf2-Keap1信號(hào)通路相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)量Fig.3 Relative expression of Nrf2-Keap1 signal pathway-related protein in testis of rats

3 討 論

Cd可以抑制細(xì)胞線粒體呼吸鏈的功能并產(chǎn)生O2-和H2O2等物質(zhì)，這些產(chǎn)物可以與質(zhì)膜上不飽和脂肪酸的雙鍵進(jìn)行反應(yīng)，導(dǎo)致細(xì)胞脂質(zhì)過氧化損傷和氧化應(yīng)激損傷，這是Cd致睪丸產(chǎn)生毒性的重要原因。MDA是脂質(zhì)過氧化的產(chǎn)物，是氧化損傷常用的指標(biāo)之一[16-18]。在本研究中，Cd組大鼠睪丸組織中H2O2和MDA的表達(dá)增加顯著，表明Cd引起大鼠睪丸組織過氧化損傷，這與S. H. Yang等[19]的研究結(jié)果一致。觀察到Cd暴露后大鼠睪丸及附睪臟器系數(shù)顯著降低，這可能是Cd引起睪丸萎縮的結(jié)果。精子質(zhì)量下降，正常生精結(jié)構(gòu)遭到破壞，生殖細(xì)胞脫落嚴(yán)重，睪酮分泌量明顯下降，這些表明Cd已經(jīng)對(duì)睪丸的生殖功能造成了嚴(yán)重的損傷。QE可以保護(hù)細(xì)胞免受氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)的損傷[20]，本研究中聯(lián)合應(yīng)用QE的大鼠與Cd暴露的大鼠相比睪丸組織中H2O2和MDA的含量顯著降低，睪丸及附睪臟器系數(shù)顯著增加，精子質(zhì)量及睪酮分泌量明顯得到改善，這表明QE對(duì)Cd致大鼠睪丸的氧化損傷起到了一定的保護(hù)作用。

當(dāng)機(jī)體受到病原體、重金屬、氮氧化合物或其他內(nèi)外環(huán)境因素刺激時(shí)，會(huì)產(chǎn)生大量活性氧自由基，從而發(fā)生氧化應(yīng)激[21-22]。機(jī)體生成氧化物的速度大于其清除速度時(shí)，氧化系統(tǒng)和抗氧化劑體系之間的平衡遭到破壞。體內(nèi)抗氧化系統(tǒng)包括抗氧化酶系統(tǒng)[23-24]，如SOD、CAT和GSH-Px等，以及非酶系統(tǒng)如GSH等。GSH-Px催化GSH和H2O2還原反應(yīng)，以防止細(xì)胞內(nèi)的脂質(zhì)過氧化和氧化應(yīng)激。GSH是一種重要的抗氧化劑和自由基清除劑，可直接結(jié)合重金屬或氧自由基，或間接結(jié)合GSH-Px，從而將有害物質(zhì)轉(zhuǎn)化為無害物質(zhì)保護(hù)身體。本研究發(fā)現(xiàn)，Cd組SOD、CAT和GSH-Px活性以及GSH含量明顯下降，說明Cd致大鼠睪丸抗氧化體系失衡，降低其正常抗氧化能力。QE可通過抗氧化應(yīng)激和抗凋亡對(duì)機(jī)體的Cd毒性發(fā)揮多功能保護(hù)作用[25]，本試驗(yàn)中QE干預(yù)后，SOD、CAT和GSH-Px活性和GSH含量與Cd組相比均顯著升高，此時(shí)機(jī)體抗氧化系統(tǒng)能力增強(qiáng)，發(fā)揮強(qiáng)大的抗氧化作用。

Nrf2是調(diào)節(jié)Ⅱ相解毒酶和抗氧化相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子，可抵抗細(xì)胞氧化應(yīng)激[26-27]。在生理?xiàng)l件下，細(xì)胞質(zhì)中結(jié)合蛋白Keap1與Nrf2結(jié)合在一起并抑制Nrf2的激活[28]。當(dāng)發(fā)生氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2和Keap1分離，隨后，Nrf2與抗氧化反應(yīng)元件ARE結(jié)合，Nrf2被激活，進(jìn)而調(diào)節(jié)與細(xì)胞保護(hù)相關(guān)抗氧化等基因的表達(dá)，包括HO-1、GSH-Px、γ-GCS和NQO1等[19]，促進(jìn)機(jī)體發(fā)揮抗氧化功能。本研究結(jié)果表明Cd減少了Nrf2的表達(dá)，抑制其激活，并降低HO-1、GSH-Px、γ-GCS和NQO1基因mRNA和蛋白質(zhì)的相對(duì)表達(dá)，從而加重機(jī)體的氧化損傷，這與Nazimabashir等[29]的研究結(jié)果相同，而睪丸組織中的Keap1 mRNA和蛋白質(zhì)表達(dá)增加同樣也是Cd抑制Nrf2激活的表現(xiàn)。應(yīng)用QE后，睪丸中Nrf2及相關(guān)基因表達(dá)水平明顯升高，而Keap1水平顯著降低，這與Cd產(chǎn)生的作用相反，表明QE能促進(jìn)Nrf2的激活，上調(diào)抗氧化基因的表達(dá)，通過Nrf2-Keap1這條抗氧化通路有效保護(hù)機(jī)體免受Cd引起的睪丸損傷和氧化應(yīng)激。綜上，QE可以調(diào)節(jié)Nrf2-Keap1途徑對(duì)Cd誘導(dǎo)的大鼠睪丸損傷起保護(hù)作用。然而，QE通過激活Nrf2途徑抗氧化的具體機(jī)制尚不清楚，需要進(jìn)一步研究。

4 結(jié) 論

Cd暴露使睪丸組織抗氧化能力減弱，氧化應(yīng)激產(chǎn)生增加，引起雄性生殖機(jī)能障礙，QE保護(hù)睪丸組織維持正常的結(jié)構(gòu)和功能，提高抗氧化酶的活性且通過激活Nrf2-Keap1信號(hào)通路增強(qiáng)抗氧化物質(zhì)抗氧化的能力從而對(duì)Cd中毒大鼠的生殖機(jī)能起強(qiáng)大的保護(hù)作用。

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