甜菜堿對(duì)酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過(guò)氧化的影響

海秀玲 姜怡鄧（通訊作者） 張效敏 白曉林

（1寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院 寧夏 銀川 750004）

（2寧夏醫(yī)科大學(xué) 寧夏 銀川 750004）

（3寧夏回族自治區(qū)人民醫(yī)院 寧夏 銀川 750000）

隨著近年來(lái)人們物質(zhì)生活水平的提高，人們的生活方式和飲食習(xí)慣發(fā)生了較大程度的改變，人均攝入酒精量日益增加，過(guò)量的酒精攝入可以導(dǎo)致消化系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)等出現(xiàn)病變，其中肝臟作為代謝酒精的主要器官，其的損傷最為嚴(yán)重，在加之高脂飲食的影響，導(dǎo)致酒精性肝損傷的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)[1]。蛋氨酸循環(huán)障礙導(dǎo)致高同型半胱氨酸血癥的發(fā)生可能是酒精性脂肪肝炎發(fā)病的主要機(jī)制之一[2]。甜菜堿又名三甲基甘氨酸，是廣泛分布于動(dòng)物、植物、微生物體內(nèi)的季銨型水溶性生物堿，是人體內(nèi)唯一可替代葉酸的的甲基供體，參與蛋氨酸循環(huán)和卵磷脂合成。本文采用隨機(jī)平行對(duì)照的方法，以SD大鼠為研究對(duì)象，探究甜菜堿對(duì)酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過(guò)氧化的影響，具體如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

選取30只SPF級(jí)雄性大鼠作為分析對(duì)象。大鼠的體重在139～171g之間，平均體重為（150±9）g，由本市的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供。所用藥品：鹽酸甜菜堿，純度為99%，購(gòu)自浙江菊花集團(tuán)進(jìn)出口有限公司；注射用腺苷蛋氨酸（SAM），購(gòu)自德國(guó)基諾藥廠，規(guī)格為每支500mg，又名思美泰；各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)試劑購(gòu)自本市生物研究所。所有大鼠的自身?xiàng)l件和各個(gè)大鼠之間的比較條件均符合本次研究進(jìn)行的要求。

1.2 方法

將30只大鼠正常喂養(yǎng)一周后按照隨機(jī)數(shù)表的方法隨機(jī)分為3組，分別為模型組、甜菜堿組和SAM組，每組10只。每天給予三組大鼠酒精和0.5ml的魚(yú)油灌胃，酒精劑量的給予以大鼠的體重為準(zhǔn)。初始期為每千克7g酒精，隨后每周遞增每千克0.2g，酒精和魚(yú)油的供給共持續(xù)8周。與此同時(shí)給予本院自制的飼料，成分為普通飼料、豬油和全脂奶粉，比例為8∶1∶1，將適量的硫酸亞鐵加入每公斤飼料中。在造模后的第四周，甜菜堿組按照大鼠體重的標(biāo)準(zhǔn)給予每千克300mg的甜菜堿水劑灌胃；SAM組給予每千克100mg的SAM腹腔注射，模型組不給予任何治療，治療時(shí)長(zhǎng)為4周。在第8周處死全部大鼠，造模結(jié)束[3]。在造模結(jié)束后采集大鼠的血液和肝組織標(biāo)本，對(duì)血漿總同型半胱氨酸（tHcy）濃度、血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶（AST）、白蛋白（Alb）、白/球蛋白比值（A/G）、肝勻漿丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）及還原性谷胱甘肽（GSH）指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)對(duì)大鼠的肝臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢測(cè)。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察記錄造模結(jié)束、經(jīng)檢查后三組大鼠的tHcy、ALT、AST、Alb、A/G、MDA、SOD、GSH指標(biāo)和肝臟病理組織學(xué)的檢驗(yàn)結(jié)果。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

本次研究所得數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，計(jì)量資料用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

本次研究中共采用研究大鼠30只，30只大鼠在研究期間均表現(xiàn)正常，無(wú)意外情況發(fā)生或死亡狀況出現(xiàn)。

2.1 大鼠的血漿tHcy水平測(cè)定和肝勻漿MDA、SOD、GSH含量測(cè)定結(jié)果

模型組大鼠血漿tHcy水平顯著高于甜菜堿組（P＜0.05），但與SAM組相比無(wú)顯著差異（P＞0.05）；與模型組相比，甜菜堿組和SAM的MDA含量明顯降低（P＜0.05），甜菜堿組顯著增加了SOD的活性（P＜0.05），GSH含量雖然有提高的趨勢(shì)，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。SAM組的GSH含量顯著提高（P＜0.05），但對(duì)于SOD活性的提高無(wú)顯著差異（P＞0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表1。

表1 三組大鼠的各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)對(duì)比

2.2 大鼠的肝功能各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果

與模型組相比較，甜菜堿組和SAM組的ALT、AST水平顯著降低（P＜0.05）；甜菜堿組和SAM組之間的ALT、AST水平相較無(wú)顯著差異（P＞0.05），具體數(shù)據(jù)見(jiàn)表2。

表2 三組大鼠的肝功能各項(xiàng)指標(biāo)檢測(cè)結(jié)果數(shù)據(jù)對(duì)比

2.3 大鼠肝組織病理組織學(xué)檢測(cè)結(jié)果

模型組存在肝小葉結(jié)構(gòu)，肝細(xì)胞索排列紊亂，肝細(xì)胞呈現(xiàn)明顯腫脹的跡象，胞漿疏松，呈現(xiàn)顆粒狀變化，出現(xiàn)不同程度的彌漫性肝細(xì)胞脂肪變性，脂變肝細(xì)胞的體積增大，胞漿內(nèi)可見(jiàn)大小不一、數(shù)量不等的脂肪空泡，胞核處于周邊位置。肝組織內(nèi)存在小葉內(nèi)炎癥，在少部分組織內(nèi)可以見(jiàn)到匯管區(qū)炎癥，沒(méi)有見(jiàn)到肝細(xì)胞點(diǎn)、片狀壞死。甜菜堿組和SAM組脂肪變性肝細(xì)胞較模型組明顯減少，有少量脂肪空泡出現(xiàn)，小葉內(nèi)和匯管區(qū)的炎癥明顯減輕。

3.討論

近年來(lái)我國(guó)的經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展，人們物質(zhì)生活水平的提高帶來(lái)了生活方式和飲食習(xí)慣的改變。據(jù)相關(guān)調(diào)查顯示，近年來(lái)我國(guó)的人均酒精攝入量呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。長(zhǎng)期飲酒或飲酒過(guò)度會(huì)對(duì)肝造成損傷，但是酒精性肝損傷的發(fā)病機(jī)制至今還不明了，相關(guān)研究表明，甲硫氨酸代謝障礙可導(dǎo)致的血漿高同型半胱氨酸血癥可能與其發(fā)病機(jī)制有關(guān)。人體飲酒過(guò)后，酒精子在體內(nèi)首先被轉(zhuǎn)化為乙醛，然后被轉(zhuǎn)化為乙酸。乙醇主要在人體的肝細(xì)胞中代謝，在代謝的過(guò)程中會(huì)引起某些代謝酶的變化，從而促進(jìn)脂肪酸的合成，最終引起甘油三酯在肝細(xì)胞內(nèi)聚集[4]。甜菜堿廣泛存在于人體內(nèi)，它可以來(lái)源于如甜菜、小麥等的食物，也可以由人體內(nèi)的膽堿逐漸發(fā)生氧化而生成。甜菜堿主要作為滲透壓調(diào)節(jié)劑和甲基供體產(chǎn)生生物學(xué)作用，有維持細(xì)胞內(nèi)滲透壓、防止蛋白質(zhì)變性和通過(guò)蛋氨酸循環(huán)參與蛋白質(zhì)、脂肪代謝的功能。本文的研究中以平行對(duì)照的方式，比較甜菜堿和腺苷蛋氨酸（SAM）作為甲基供體在改善甲硫氨酸循環(huán)和肝脂質(zhì)過(guò)氧化方面的作用。在改善甲硫氨酸循環(huán)障礙方面，甜菜堿組與模型組比較，血漿tHcy水平顯著降低（P＜0.05），說(shuō)明甜菜堿對(duì)HHcy有很明顯的改善作用，同時(shí)對(duì)肝過(guò)量釋放tHcy有顯著的抑制作用。其參與BHMT的合成，在tHcy向甲硫氨酸的轉(zhuǎn)化中起到很強(qiáng)的催化作用，是甲硫氨酸循環(huán)的重要途徑之一，可以有效防止tHcy出現(xiàn)堆積[5]。同時(shí)甲硫氨酸循環(huán)的正常進(jìn)行可以有效維持血液中S-腺苷蛋氨酸（SAM）的濃度，從而代替SAM在人體肝臟和其他疾病中的治療作用。另一方面，甜菜堿通過(guò)增強(qiáng)SOD活性，抑制脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)，減少自由基的損傷，對(duì)肝細(xì)胞有很好的保護(hù)作用。從本文的研究結(jié)果可知，甜菜堿可以通過(guò)治療高同型半胱氨酸血癥、改善肝脂質(zhì)過(guò)氧化來(lái)防治酒精肝損傷；同時(shí)甜菜堿的作用效果顯著好于腺苷蛋氨酸，對(duì)人體有更好的相容性，通過(guò)種種作用機(jī)制直接或間接作用于發(fā)病體，有很好的效果。

綜上所述，甜菜堿對(duì)酒精性肝損傷大鼠高同型半胱氨酸血癥和肝脂質(zhì)過(guò)氧化有非常好的治療作用與積極影響，值得進(jìn)行深入研究。

[1]田旭東，孫平，李彥龍，等.甜菜堿對(duì)酒精性肝病大鼠肝細(xì)胞色素P4502E1基因和蛋白表達(dá)的影響[J].西部中醫(yī)藥，2014(7):8-12.

[2]趙雪珂，程明亮.茅臺(tái)酒對(duì)大鼠肝組織中CYP2E1基因及蛋白質(zhì)表達(dá)的影響[J].貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，38(6):573-577.

[3]張春，壽璽，李志強(qiáng)，等.CYP2E1在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷時(shí)的表達(dá)及意義[J].新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2016，39(10):1272-1276.

[4]魏琴.PD-1/PD-L1和ICOS/ICOSL共刺激分子在HBV轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷中的動(dòng)態(tài)變化研究[D].新疆醫(yī)科大學(xué)，2014.

[5]孟子愉，尹芝南.GammadeltaT細(xì)胞在HBsAg轉(zhuǎn)基因小鼠急性肝損傷中的作用[C]//全國(guó)免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì).2015.