LRRFIP1在妊娠期高血壓疾病患者血清中的表達(dá)及臨床意義

吳 怡，代維棟，符喬珊

(西安市第四醫(yī)院婦產(chǎn)科，陜西 西安 710038)

妊娠期高血壓疾病(hypertensive disorders of pregnancy, HDP)是妊娠期特有而又常見的一種并發(fā)癥，主要包括妊娠期高血壓、子癇前期、子癇、原發(fā)高血壓并妊娠、繼發(fā)高血壓并妊娠等[1]。HDP以妊娠20周后出現(xiàn)高血壓、水腫及蛋白尿?yàn)橹饕卣?，且伴有全身多器官功能損害，嚴(yán)重者可出現(xiàn)抽搐、昏迷、腦出血、心腎功能衰竭，甚至造成母嬰死亡[2]。研究表明凝血與纖溶系統(tǒng)平衡紊亂在HDP的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要角色，且與產(chǎn)婦預(yù)后密切相關(guān)[3]。富亮氨酸重復(fù)序列相互作用蛋白1(leucine-rich repeat flightless-interacting protein 1, LRRFIP1)能與血小板細(xì)胞膜上的相關(guān)蛋白相互作用，進(jìn)而改變血小板細(xì)胞的骨架結(jié)構(gòu)，影響血小板的凝血功能[4]。本文通過檢測(cè)HDP患者和健康孕婦妊娠晚期血小板參數(shù)、凝血相關(guān)指標(biāo)、血漿LRRFIP1、α-顆粒膜蛋白(alpha-granule membrane protein, GMP-140)和D-二聚體(D-dimer)的改變，探討LRRFIP1表達(dá)與HDP患者凝血功能及血栓前狀態(tài)的相關(guān)性，以期為HDP的診斷、評(píng)估和治療提供新的科學(xué)依據(jù)和思路。

1資料與方法

1.1一般資料

選擇2014年5月至2016年5月西安市第四醫(yī)院婦產(chǎn)科收治的妊娠晚期HDP患者70例作為觀察組，正常孕婦30例作為對(duì)照組。按照第八版《婦產(chǎn)科學(xué)》診斷及分類標(biāo)準(zhǔn)[5]，將HDP患者分為妊娠高血壓組26例，平均(27.14±2.74)歲，孕(37.19±2.11)周；輕度子癇前期組24例，平均(27.33±2.91)歲，孕(36.33±1.99)周；重度子癇前期組20例，平均(27.45±2.65)歲，孕(35.25±1.87)周。正常妊娠組孕婦平均(26.30±2.31)歲，孕(37.60 ±1.63)周。各組孕婦年齡、孕周等一般資料的差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)，有可比性。所有研究對(duì)象均為單胎妊娠，均無其他合并癥，近期未使用影響凝血/纖溶系統(tǒng)及血小板功能的藥物。所有研究對(duì)象及家屬均知情同意。

1.2血小板參數(shù)及凝血指標(biāo)的檢測(cè)

抽取空腹安靜狀態(tài)下各組受試者的靜脈全血，部分注入檸檬酸鈉抗凝管，3000r/min離心10min，取血漿，采用STAGO全自動(dòng)血凝分析儀檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、凝血酶時(shí)間(TT)、纖維蛋白原(FIB)等凝血指標(biāo)；另一部分注入乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)血常規(guī)專用抗凝管，采用希森美康XS800i全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)血小板計(jì)數(shù)(PLT)、血小板平均體積(MPV)、血小板分布寬度(PDW)等血小板參數(shù)。

1.3血漿LRRFIP1、GMP-140和D-dimer的檢測(cè)

取各組受試者的新鮮抗凝靜脈全血，3 000r/min離心10min，分離血漿，采用 ELISA 法對(duì)檢測(cè)血漿LRRFIP1、GMP-140和D-dimer水平。ELISA試劑盒購自上?？道噬锟萍加邢薰?，所有操作均按照試劑盒說明書規(guī)范進(jìn)行。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2結(jié)果

2.1 HDP患者與正常妊娠孕婦凝血指標(biāo)比較

如表1所示，妊娠晚期HDP患者PT、APTT、TT值均低于正常妊娠婦女，4組PT、APTT、FIB比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P<0.05)。與正常妊娠組相比，輕度子癇前期組PT、APTT均顯著減少(t值分別為-2.264、-2.458，均P<0.05)；與輕度子癇前期組相比，重度子癇前期組PT、APTT亦顯著減少(t值分別為-2.026、-2.020，均P<0.05)；各組間TT值比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均P>0.05)。妊娠晚期HDP患者FIB水平隨病情加重呈遞增趨勢(shì)，輕度子癇前期組較正常妊娠組FIB值顯著增加(t=2.031，P<0.05)，而重度子癇前期組較輕度子癇前期組FIB值亦顯著增加(t=2.196，P<0.05)。

表1 HDP患者與正常孕婦凝血指標(biāo)的比較

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.2 HDP患者與正常妊娠孕婦血小板參數(shù)比較

如表2所示，與正常妊娠組相比，輕度子癇前期組PLT顯著減少(t=-2.206，P<0.05)，重度子癇前期組PLT值較輕度子癇前期組亦顯著減少(t=-2.037，P<0.05)。輕度子癇前期組MPV、PDW均較正常妊娠組顯著增加(t值分別為2.413、2.017，均P<0.05)，重度子癇前期組MPV、PDW較輕度子癇前期組亦顯著增加(t值分別為2.488、2.192，均P<0.05)。

Table 2 Comparison of platelet parameters in HDP patients and normal pregnant

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.3 HDP患者與正常妊娠晚期孕婦血清LRRFIP1、GMP-140、D-dimer的表達(dá)

與正常妊娠組相比，妊娠晚期HDP患者血漿LRRFIP1、GMP-140、D-dimer表達(dá)水平均隨病情加重呈遞增趨勢(shì)，見表3。輕度子癇前期組LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值較正常妊娠組顯著增加(t值分別為3.965、3.759、4.364，均P<0.05)，而重度子癇前期組LRRFIP1、GMP-140、D-dimer值較輕度子癇前期組亦顯著增加(t值分別為2.220、3.496、3.309，均P<0.05)。

Table 3 Expressions of LRRFIP1, GMP-140 and D-dimer in HDP patients and normal pregnant

注：*與正常妊娠組比較，P<0.05；#與輕度子癇前期組比較，P<0.05。

2.4 LRRFIP1表達(dá)與HDP患者凝血功能的相關(guān)分析

為探討LRRFIP1的表達(dá)上調(diào)是否與HDP患者凝血功能異常相關(guān)，分別對(duì)LRRFIP1表達(dá)與PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer水平作相關(guān)性分析，結(jié)果顯示LRRFIP1的表達(dá)與PLT呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.28，P<0.05)，與FIB呈顯著正相關(guān)(r=0.25，P<0.05)，與D-dimer呈顯著正相關(guān)(r=0.42，P<0.01)，與GMP-140呈顯著正相關(guān)(r=0.44，P<0.01)，見表4。

表4 HDP患者LRRFIP1表達(dá)與PLT 、FIB、GMP-140、D-dimer的相關(guān)性

Table 4 Correlation between LRRFIP1 expression and PLT, FIB, GMP-140 and D-dimer in HDP patients

3討論

3.1 LRRFIP1在HDP患者血清中的表達(dá)及其意義

LRRFIP1蛋白能與富含亮氨酸重復(fù)序列的蛋白相互作用，參與調(diào)控NF-κB活性，Wnt/β-catenin信號(hào)通路及細(xì)胞骨架重排等多種生物學(xué)過程[6]。作為血小板細(xì)胞骨架的組成部分，LRRFIP1可與肌動(dòng)蛋白重塑蛋白Flightless-1相互作用，影響血小板活化進(jìn)程，進(jìn)而影響血小板凝血功能，且敲除LRRFIP1可顯著減少血栓區(qū)域[4]。此外，干擾LRRFIP1基因的表達(dá)被證實(shí)能夠抑制小鼠下肢深靜脈血栓的形成[7]。這些研究提示LRRFIP1可能通過影響血小板的結(jié)構(gòu)與功能進(jìn)而影響機(jī)體凝血功能及血栓形成。

妊娠期間，尤其是妊娠晚期，孕婦體內(nèi)的凝血、抗凝和纖溶功能均會(huì)發(fā)生明顯的生理變化，以適應(yīng)胎兒的健康生長(zhǎng)和順利娩出[3]。因此，在正常孕婦妊娠晚期，其體內(nèi)的凝血與纖溶系統(tǒng)往往處于一種高水平的動(dòng)態(tài)平衡。當(dāng)患上HDP時(shí)，患者體內(nèi)的凝血因子及凝血系統(tǒng)活性增加，而抗凝因子活性減少，致使凝血和纖溶系統(tǒng)失衡，纖溶亢進(jìn)，使其與正常孕婦相比更具血栓形成或產(chǎn)后出血傾向[8]。在本研究中，與正常晚期妊娠孕婦相比，HDP患者，尤其是重度子癇前期患者的PT、APTT、PLT值均顯著低于正常孕婦，而表明其體內(nèi)凝血因子含量顯著增加，血小板顯著減少，凝血纖溶系統(tǒng)處于紊亂狀態(tài)。此外，HDP患者的FIB、MPV、PDW值均隨病情加重呈遞增趨勢(shì)，且輕度子癇和重度子癇前期患者FIB、MPV、PDW值均顯著高于正常孕婦，表明HDP患者凝血酶活性升高，血小板聚集加快，纖溶亢進(jìn)，血液處于高凝和血栓前狀態(tài)，并且機(jī)體內(nèi)存在血小板的異常活化和增生。

進(jìn)一步研究顯示，與正常孕婦相比，HDP患者血漿LRRFIP1水平隨病情加重呈遞增趨勢(shì)，且輕度子癇和重度子癇前期患者LRRFIP1值較正常孕婦顯著增加，表明HDP患者體內(nèi)存在LRRFIP1的異常表達(dá)，提示LRRFIP1可能通過影響HDP患者的血小板結(jié)構(gòu)和功能破壞其凝血與纖溶系統(tǒng)的平衡，進(jìn)而導(dǎo)致其凝血功能障礙。

3.2 LRRFIP1與HDP患者凝血指標(biāo)的相關(guān)性

有效的血小板質(zhì)量和數(shù)量在人體生理性和病理性凝血、止血過程中均發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[3]。FIB是凝血途徑的重要環(huán)節(jié)之一，它能與活化的血小板相互作用，介導(dǎo)血栓的形成[8]。在本研究中，HDP患者PLT值顯著低于正常妊娠婦女，而FIB顯著高于正常孕婦，且相關(guān)性分析表明HDP患者血漿LRRFIP1水平與PLT呈顯著負(fù)相關(guān)，而與FIB顯著正相關(guān)。這些結(jié)果提示LRRFIP1可能參與HDP患者血小板的數(shù)量與功能的改變，進(jìn)而影響機(jī)體凝血與纖溶系統(tǒng)的平衡。

特異性纖維蛋白降解產(chǎn)物D-dimer表達(dá)增加，提示機(jī)體纖溶功能亢進(jìn)[9]；血小板α顆粒膜蛋白GMP-140表達(dá)增加，標(biāo)志著血小板的活化[10]。本研究中，HDP患者血漿D-dimer和GMP-140均表達(dá)上調(diào)，且隨病情加重呈遞增趨勢(shì)，進(jìn)一步表明HDP患者機(jī)體中存在血小板的異?；罨焊吣屠w溶亢進(jìn)現(xiàn)象。相關(guān)性分析表明，HDP患者血漿LRRFIP1水平與GMP-140、D-dimer顯著正相關(guān)，提示LRRFIP1可能通過影響血小板活化參與了HDP患者凝血纖溶系統(tǒng)的生理變化，致使HDP患者處于血液高凝狀態(tài)，血栓形成危險(xiǎn)增加。

綜上所述，LRRFIP1在妊娠高血壓疾病中存在表達(dá)上調(diào)，可能通過促進(jìn)血小板的異?；罨够颊咛幱谘焊吣脱ㄇ盃顟B(tài)。因此，本研究將為臨床檢測(cè)和預(yù)防血栓形成提供新的監(jiān)測(cè)指標(biāo)和判斷、治療依據(jù)。然而，LRRFIP1影響妊娠高血壓疾病患者凝血功能的具體靶標(biāo)和機(jī)制尚不清楚，還需要后續(xù)探討。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Ohkuchi A,Hirashima C,Takahashi K,etal.Prediction and prevention of hypertensive disorders of pregnancy[J].Hypertens Res,2017,40(1):5-14.

[2]Ye C,Ruan Y,Zou L,etal.The 2011 survey on hypertensive disorders of pregnancy (HDP) in China: prevalence, risk factors, complications, pregnancy and perinatal outcomes[J].PLoS One, 2014,9(6):e100180.

[3]Han L,Liu X,Li H,etal.Blood coagulation parameters and platelet indices: changes in normal and preeclamptic pregnancies and predictive values for preeclampsia[J].PLoS One,2014,9(12):e114488.

[4]Goodall A H,Burns P,Salles I,etal.Transcription profiling in human platelets reveals LRRFIP1 as a novel protein regulating platelet function[J].Blood,2010,116(22):4646-4656.

[5]謝幸,茍文麗.婦產(chǎn)科學(xué)[M].8版,北京:人民衛(wèi)生出版社,2013:64-71.

[6]Gubern C,Camós S,Hurtado O,etal.Characterization of Gcf2/Lrrfip1 in experimental cerebral ischemia and its role as a modulator of Akt, mTOR and β-catenin signaling pathways[J].Neuroscience,2014,268:48-65.

[7]Yin X,Wu S,Wang Z,etal.Anti-thrombosis effect of LRRFIP1 shRNA lentivirus in a mouse model of deep vein thrombosis[J].Thromb Res,2013,132(1):127-131.

[8]周三琴.妊娠高血壓疾病纖溶及凝血指標(biāo)的變化及臨床意義[J].中國(guó)婦幼健康研究, 2016,27(8):1009-1011.

[9]何雪儀,王晨虹.外周血sFlt-1、PlGF、25-羥基維生素D、D-二聚體、vWF及P-選擇素等指標(biāo)預(yù)測(cè)子癇前期的價(jià)值[J].國(guó)際婦產(chǎn)科學(xué)雜志,2016,43(3):308-311.

[10]石磊,顧漢平.HDCP與子癇各期外周血D-二聚體及單側(cè)子宮動(dòng)脈血流比較[J].中國(guó)婦幼健康研究,2017,28(7):871-873.