繭蜂病毒感染Hi5細(xì)胞與親環(huán)素A的相關(guān)性研究

胡 艷, 許翠仙, 張 潘, 俞 丹, 張斌月, 李 明

云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院, 云南省高校動物遺傳多樣性和進(jìn)化重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 昆明 650091

自然界中存在著廣泛的寄生與被寄生的關(guān)系。農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的害蟲——斜紋夜蛾，可被雙斑側(cè)溝繭蜂寄生，雙斑側(cè)溝繭蜂在其排卵時(shí)可特異性的尋找宿主(斜紋夜蛾幼蟲)，并將其攜帶的繭蜂病毒和卵一同注入宿主體內(nèi)[1]，利用病毒破壞宿主的免疫系統(tǒng)，以保護(hù)其卵和幼蟲在宿主體內(nèi)正常發(fā)育[2]。

截至目前，共獲得17個類似于環(huán)狀DNA分子的雙斑側(cè)溝繭蜂病毒基因組，經(jīng)進(jìn)一步分析，得到116個功能性基因，其中，28個是錨蛋白(Ankyrin)家族基因，28個是蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatase，PTP)家族基因[3]。通過比對本課題組得到的轉(zhuǎn)錄組及病毒基因組的測序數(shù)據(jù)，可確認(rèn)在被寄生的斜紋夜蛾的血淋巴轉(zhuǎn)錄組中有13個病毒基因，主要為可編碼PTP、病毒錨蛋白重復(fù)序列結(jié)構(gòu)(viral ankyrin repeat，vank)的基因[4]。本研究選取其中的4個病毒基因(PTP109、vank86、vank92和vank101)作為病毒感染的檢測指標(biāo)，而基因vank86同時(shí)還作為病毒感染細(xì)胞后的表達(dá)檢測指標(biāo)。

親環(huán)素A(cyclophilin A，CypA)是一種具有順反異構(gòu)酶活性的功能性蛋白，屬于親環(huán)素蛋白家族的一種，是免疫抑制劑環(huán)孢霉素A(cyclosporin A，CsA)的主要靶分子[5,6]。親環(huán)素A可催化脯氨酸殘基N端肽鍵的順反式異構(gòu)化[7]，從而加速蛋白質(zhì)的折疊和重組。目前，對哺乳動物中CypA的生物學(xué)活性已有一定的研究。其作為自分泌和旁分泌因子，可以介導(dǎo)細(xì)胞通訊[8～10]，并且在細(xì)胞凋亡、免疫調(diào)節(jié)、T細(xì)胞活化以及蛋白質(zhì)的折疊、轉(zhuǎn)運(yùn)、重組等方面具有重要作用[11,12]。研究表明，親環(huán)蛋白(cyclophilin，CyP)可協(xié)助外源病毒感染機(jī)體，如CypA可與人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)中基因所編碼的衣殼蛋白結(jié)合，促使病毒感染人體，通過其順反異構(gòu)酶活性，促進(jìn)HIV衣殼蛋白復(fù)合物的分解[13～15]。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)雙斑側(cè)溝繭蜂寄生于斜紋夜蛾幼蟲后，斜紋夜蛾幼蟲血細(xì)胞中親環(huán)素A的基因轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)水平都有上調(diào)(未發(fā)表數(shù)據(jù))，但繭蜂病毒感染昆蟲細(xì)胞的生物學(xué)機(jī)制尚不清楚；同時(shí)，成功構(gòu)建到pIZT/V5-His-CypA質(zhì)粒，其能在昆蟲細(xì)胞中穩(wěn)定表達(dá)，并可用于細(xì)胞內(nèi)CypA功能的研究[16]。在本研究中，分別利用cypa沉默序列FAM CypA-SiRNA-22[16]、CsA處理Hi5細(xì)胞，以達(dá)到沉默cypa基因的表達(dá)、抑制CypA活性的目的，并利用pIZT/V5-His-CypA轉(zhuǎn)染Hi5細(xì)胞以過表達(dá)cypa基因，從而，探討CypA對繭蜂病毒侵染昆蟲細(xì)胞的影響，確定兩者之間是否存在一定的相關(guān)性，以期為進(jìn)一步了解繭蜂病毒感染昆蟲細(xì)胞的分子機(jī)制提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料 實(shí)驗(yàn)中所用昆蟲為斜紋夜蛾，斜紋夜蛾卵片及其飼料配制方法均由中山大學(xué)有害生物控制與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供，實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)環(huán)境為27℃，相對濕度為60%～80%；雙斑側(cè)溝繭蜂(Microplitisbicoloratus)通過中山大學(xué)有害生物控制與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室獲得，實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)環(huán)境為27℃，相對濕度為60%～80%；Hi5細(xì)胞系為粉紋夜蛾(TrichoplusianiHübner)卵細(xì)胞系，由中山大學(xué)有害生物控制與資源利用國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)室提供。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑 PrimescriptTMRT reagent Kit with Gdna Eraser(RR047A)、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTMⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)、SYBR?Premix ExTaqTMII(Tli RNaseH Plus)(RR820A)、RNA提取試劑盒(RNAisoTMPlus)均購于大連寶生物有限公司；無內(nèi)毒素小量質(zhì)粒提取試劑盒Endo-free Plasmid Mini Kit Ⅱ(D6950-01B)來自美國Omega Bio-Tek公司；X-tremegene HP DNA Transfection Reagent(06366236001)來自瑞士Roche公司；PDVF膜購于美國Millipore公司；Tubulin抗體、蛋白Marker以及辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP)偶聯(lián)的山羊抗鼠、抗兔二抗均購于上海碧云天生物技術(shù)有限公司；環(huán)孢霉素A購于美國Cayman Chemical公司；1×磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)、脫脂奶粉均購于昆明培根生物科技有限公司；氯仿、乙醇、焦碳酸二乙酯(DEPC)、30%丙烯酰胺混合液、1.5 mol/L三羥甲基氨基甲烷(Tris)(pH 8.8)、1.0 mol/L Tris(pH 6.8)、十二烷基硫酸鈉(SDS)、四甲基乙二胺(TEMED)、過硫酸銨、微量注射器、0.45 μm濾膜、BCA蛋白濃度測定試劑盒均購于昆明鼎國生物科技有限公司；昆蟲培養(yǎng)基Hyclone TNM-FH(AWA93766)、胎牛血清、超敏化學(xué)發(fā)光試劑盒均購于美國賽默飛世爾科技公司；NEST細(xì)胞培養(yǎng)板購于無錫耐思生物科技有限公司；CypA的特異性抗體由云南滇工科技有限公司制備；FAM CypA-siRNA-22由蘇州吉瑪基因股份有限公司合成。

1.1.3引物設(shè)計(jì)與合成 實(shí)驗(yàn)所用引物均通過Primer 5設(shè)計(jì)完成后(引物序列見表1),交至昆明碩擎生物科技有限公司合成，用于病毒基因克隆和qRT-PCR。其中，基因vank86、vank92、vank101、PTP109的引物均由云南大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院劉樾彤設(shè)計(jì)和惠贈。

表1 實(shí)驗(yàn)所用引物序列Table 1 Sequences of primers used in the experiment.

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)

從-80℃冰箱中取出Hi5細(xì)胞凍存管，迅速放入37℃水浴融化；在超凈工作臺中將存有Hi5細(xì)胞的凍存液(含二甲基亞砜(DMSO)100 μL、胎牛血清400 μL、完全培養(yǎng)基500 μL)轉(zhuǎn)入已滅菌的1.5 mL EP管中，1 000 r/min離心5 min，棄上清；再加入1 mL完全培養(yǎng)基(含10%胎牛血清)稀釋，并轉(zhuǎn)入25 mL密封型細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第2天移去完全培養(yǎng)基，再加入新鮮的完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)，隨后每3天更換1次。

1.3 病毒感染細(xì)胞

取20只羽化后3～4 d的雙斑側(cè)溝繭蜂雌蜂，借助解剖鏡取出其卵巢，放于500 μL的1×磷酸鹽緩沖液(phosphate buffered saline，PBS，pH 7.4)中。在超凈工作臺中，通過用注射器反復(fù)抽吸，將卵巢破碎，12 000 r/min、4℃離心3 min后，收集上清液。再使用0.45 μm濾膜過濾上清液中的卵及其他細(xì)胞碎片，收集濾液于已滅菌的1.5 mL EP管中，置于-20℃保存，并在后續(xù)實(shí)驗(yàn)中用于感染細(xì)胞。

在六孔板上每孔鋪2×105個Hi5細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)40 min；根據(jù)初始細(xì)胞量加入適量的病毒粒子，一般按照1只成熟雌蜂(即1 Wasp)卵巢的病毒粒子可以感染1×105個Hi5細(xì)胞的劑量加入[17,18]。以未感染病毒的Hi5細(xì)胞作為對照組。

1.4 病毒基因的PCR鑒定

①RNA提?。涸诹装迳厦靠卒?×105個細(xì)胞。當(dāng)六孔板中細(xì)胞的生長密度達(dá)到80%～90%時(shí)，用1×磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)輕輕洗滌貼壁細(xì)胞2次，按照RNAisoTMPlus試劑盒說明書提取總RNA。

②PCR鑒定：按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTMⅡ1st Strand cDNA Synthesis Kit(6210A)說明書操作，合成PCR所需的模板cDNA。PCR反應(yīng)體系(15 μL)：ExTaq7.5 μL，上、下游引物各0.5 μL，模板1.0 μL，滅菌水5.5 μL。PCR反應(yīng)條件：95℃ 5 min；95℃ 1 min，58℃(由引物Tm決定)30 s，72℃ 1 min，共35個循環(huán)；72℃ 10 min。

1.5 沉默、過表達(dá)cypa以及抑制CypA活性對病毒基因表達(dá)的影響

1.5.1RNA干擾(RNA interference，RNAi)實(shí)驗(yàn) 在六孔板上每孔鋪2×105個細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)30 min，棄培養(yǎng)基，加入新鮮的完全培養(yǎng)基。取8 μL羅氏轉(zhuǎn)染試劑加至100 μL雙無培養(yǎng)基中，混勻后室溫靜置30 min；取8 μL FAM CypA-SiRNA-22，用100 μL雙無培養(yǎng)基稀釋，混勻；再將上述2種試劑混勻，室溫靜置20 min，用于細(xì)胞轉(zhuǎn)染。隨后，將轉(zhuǎn)染混合物逐滴加入六孔板相應(yīng)的細(xì)胞中，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

1.5.2CsA處理細(xì)胞 在六孔板上每孔鋪2×105個細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)40 min；向每孔細(xì)胞中逐滴加入1 mmoL CsA(終濃度為1 μmoL)，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。

1.5.3pIZT/V5-His-CypA轉(zhuǎn)染細(xì)胞 取50 μL pIZT/V5-His-CypA甘油菌[16]加入LB培養(yǎng)基中，于37℃恒溫空氣搖床中過夜培養(yǎng)。然后，8 000 r/min離心5 min，收集菌體。在超凈工作臺中按照試劑盒Endo-free Plasmid Mini Kit Ⅱ(D6920-01B)說明書操作，提取轉(zhuǎn)染使用的無內(nèi)毒素質(zhì)粒pIZT/V5-His-CypA。轉(zhuǎn)染方法同1.5.1。

1.6 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

①胞內(nèi)總RNA的提取方法同1.4①；②按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒PrimeScriptTMRT reagent Kit with gDNA Eraser(RR047A)說明書操作，合成進(jìn)行qRT-PCR所需的模板cDNA；③以②中的cDNA為模板，按照試劑盒SYBR? Premix ExTaqTMⅡ (Tli RNaseH Plus)配制qRT-PCR反應(yīng)體系(10 μL)：2×SYBR Premix ExTaq5 μL，上、下游引物各0.4 μL，ROX Reference Dye 0.2 μL，cDNA 1 μL，滅菌水3 μL。將樣品分裝到96孔板中，每個樣品重復(fù)3次，置于Biosystems 7500 Real-Time PCR System中反應(yīng)。采用兩步法進(jìn)行PCR擴(kuò)增：第一步，95℃ 30 s；第二步，95℃ 5 s；60℃ 34 s，共40個循環(huán);④反應(yīng)結(jié)束后，將每個樣品3次重復(fù)的Ct值求出平均值，以18S rRNA作為內(nèi)參，計(jì)算RQ=2-ΔΔCt值，其中涉及到的其他參數(shù)計(jì)算如下：ΔCt=Ct(目的基因)-Ct(內(nèi)參基因)；ΔΔCt=ΔCt(實(shí)驗(yàn)組)-ΔCt(對照組)，3次重復(fù)。

1.7 Western blot檢測

將六孔板中的細(xì)胞培養(yǎng)基倒掉，用PBS清洗2次，再用細(xì)胞刮刀刮下，置于已滅菌的1.5 mL EP管中，3 000 r/min離心5 min。加80～100 μL的細(xì)胞裂解液，提取細(xì)胞總蛋白，測定蛋白濃度。并配制SDS-PAGE膠(分離膠10%，積層膠5%)，進(jìn)行蛋白電泳(80 V，40 min；100 V，90 min)后，經(jīng)濕轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)至PDVF膜(100 V，100 min)，用PBST緩沖液(含吐溫-20的PBS)沖洗，再放入5%脫脂牛奶中，于室溫條件下封閉1 h。隨后，用PBST溶液清洗2次，每次10 min，再分別采用CypA抗體、Tubulin抗體進(jìn)行孵育，4℃過夜。然后，用PBST緩沖液清洗3次，每次10 min，再分別用HRP山羊抗兔IgG、HRP山羊抗鼠IgG抗體孵育，37℃ 1 h。最后，用PBST緩沖液清洗3次，第1次10 min，第2次5 min，第3次5 min。發(fā)光前將PierceTMECL Western blotting Substrate A、B液等體積混勻滴在PVDF膜上，與膜接觸1 min，隨后置于Tanon-4100中曝光成像。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

所有的數(shù)據(jù)結(jié)果均采用GraphPad Prism 6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用t檢驗(yàn)進(jìn)行2個樣本間均數(shù)差異顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 繭蜂病毒感染Hi5細(xì)胞

在Hi5細(xì)胞培養(yǎng)基中加入繭蜂病毒50 μL(25 μL=1 Wasp)24 h后，以逆轉(zhuǎn)錄合成的cDNA為模板，利用PCR擴(kuò)增鑒定繭蜂病毒基因vank86、vank92、vank101和PTP109的表達(dá)情況。結(jié)果顯示，在未感染細(xì)胞中，均未檢測到4個病毒基因，而在感染了24 h的Hi5細(xì)胞中，均擴(kuò)增到4個病毒基因(圖1)，表明繭蜂病毒成功侵染了Hi5細(xì)胞，并進(jìn)行了擴(kuò)增。

同時(shí)，經(jīng)qRT-PCR檢測，結(jié)果顯示，繭蜂病毒侵染Hi5細(xì)胞后，cypa基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著上升(圖2A)，而Western blot分析結(jié)果也表明CypA的蛋白表達(dá)水平有所提高(圖2B)。

2.2 沉默cypa基因與抑制CypA活性對病毒基因vank86表達(dá)的影響

FAM CypA-SiRNA-22轉(zhuǎn)染Hi5細(xì)胞24 h后，提取RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，經(jīng)qRT-PCR檢測，結(jié)果(圖3A)顯示cypa基因的轉(zhuǎn)錄水平顯著下降，而Western blot分析結(jié)果(圖3B)表明，CypA蛋白表達(dá)水平也有所下降，但不明顯(其中SiRNA-Control[16]為陰性對照)。這證明FAM CypA-SiRNA-22可以起到沉默cypa的作用。在此基礎(chǔ)上，加入繭蜂病毒感染細(xì)胞24 h，提取RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，經(jīng)qRT-PCR檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞中的病毒基因vank86基因轉(zhuǎn)錄水平極顯著下降(圖3C)。

圖2 繭蜂病毒感染的Hi5細(xì)胞中CypA的表達(dá)情況Fig.2 The expression of CypA in MbBV-treated Hi5 cells.A：qRT-PCR檢測cypa基因轉(zhuǎn)錄水平；B.Western blot檢測CypA蛋白表達(dá)水平。注：Mock：未感染病毒組；MbBV：感染病毒組；**表示處理組數(shù)據(jù)與對照組相比差異極顯著(P<0.01)。

而在病毒侵染的細(xì)胞培養(yǎng)基中加入CsA以抑制CypA活性，24 h后，經(jīng)qRT-PCR檢測，vank86基因轉(zhuǎn)錄水平也顯著下降(圖3D)。

2.3 過表達(dá)cypa對病毒基因vank86表達(dá)的影響

pIZT/V5-His-CypA轉(zhuǎn)染Hi5細(xì)胞24 h后，qRT-PCR與Western blot的分析結(jié)果(圖4A、B)均表明，pIZT/V5-His-CypA可起到過表達(dá)cypa的作用(其中pIZT/V5-His為陰性對照)。在此基礎(chǔ)上，加入繭蜂病毒感染細(xì)胞24 h后，提取RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，繭蜂病毒中的vank86基因轉(zhuǎn)錄水平極顯著上升(圖4D)。

3 討論

雙斑側(cè)溝繭蜂病毒與普通病毒類似，都是由核衣殼包裹核酸，再由單層或者多層蛋白囊膜包裹1個或者多個核衣殼[18]。每個繭蜂病毒粒子所含的病毒量并不一樣，病毒只存在于寄生蜂雌蜂輸卵管萼上皮細(xì)胞中。在寄生過程中，病毒粒子伴隨著1?；蛘叨嗔Ｂ岩约拜嘁阂煌蛔⑷爰闹餮恢?，進(jìn)入血腔的病毒感染血細(xì)胞后，通過各種病毒基因的表達(dá)來抑制和破壞寄主的免疫反應(yīng)[19～21]。目前，繭蜂病毒侵染血細(xì)胞的分子機(jī)理尚不清楚，但有報(bào)道顯示CypA參與了多種病毒的感染和復(fù)制[14,22]。

圖3 cypa沉默與抑制后相關(guān)基因的表達(dá)情況Fig.3 The expression of related genes when cypa was silenced and CypA was suppressed.A：qRT-PCR檢測cypa基因轉(zhuǎn)錄水平；B：Western blot檢測CypA蛋白表達(dá)水平；C：qRT-PCR檢測cypa沉默后vank86基因轉(zhuǎn)錄水平；D：qRT-PCR檢測CypA活性被抑制后vank86基因轉(zhuǎn)錄水平。注：Mock：未感染病毒組；MbBV：感染病毒組。*和**分別表示處理組數(shù)據(jù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。

圖4 過表達(dá)cypa后相關(guān)基因的表達(dá)情況Fig.4 The expression of related genes when cypa was overexpressed in Hi5 cells.A：qRT-PCR檢測cypa基因轉(zhuǎn)錄水平；B：Western blot檢測CypA蛋白表達(dá)水平；C：qRT-PCR檢測感染細(xì)胞中過表達(dá)cypa后cypa基因轉(zhuǎn)錄水平；D：qRT-PCR檢測感染細(xì)胞中過表達(dá)cypa后vank86基因轉(zhuǎn)錄水平。注：Mock：未感染病毒組；MbBV：感染病毒組。*和**分別表示處理組數(shù)據(jù)與對照組相比差異顯著(P<0.05)和極顯著(P<0.01)。

本研究為了探討繭蜂病毒在侵染昆蟲組織的過程中，CypA是否協(xié)助或參與了這一過程，采用1株粉紋夜蛾Hi5細(xì)胞作為研究對象，首先利用繭蜂病毒感染該細(xì)胞，經(jīng)PCR擴(kuò)增鑒定，結(jié)果(圖1)顯示在病毒感染的Hi5細(xì)胞中檢測到了4個作為檢測指標(biāo)的病毒基因(PTP109、vank86、vank92和vank101)；而在未感染細(xì)胞中并未檢測到這4個病毒基因，表明該細(xì)胞可以被雙斑側(cè)溝繭蜂病毒感染，而且進(jìn)行了轉(zhuǎn)錄。vank86基因?qū)儆陔p斑側(cè)溝繭蜂病毒中編碼錨蛋白結(jié)構(gòu)域的成員之一，這一類基因在病毒基因組中所占比例較高，與果蠅中的IκB基因高度同源，研究顯示vank86可能與核轉(zhuǎn)錄因子NF-κB的抑制有關(guān)，從而參與了繭蜂病毒對寄主免疫系統(tǒng)的抑制[3]。由于繭蜂病毒基因數(shù)量眾多，很難做到對每一個繭蜂病毒基因感染昆蟲細(xì)胞的過程進(jìn)行檢測。因此，為了確定繭蜂病毒在感染Hi5細(xì)胞時(shí)是否與CypA有關(guān)，本研究選取繭蜂病毒基因中的典型基因vank86，作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)中繭蜂病毒的檢測指標(biāo)。研究發(fā)現(xiàn)，在繭蜂病毒感染的細(xì)胞中，在cypa被沉默或CypA活性被CsA抑制時(shí)，vank86基因轉(zhuǎn)錄水平顯著下降(圖3C、D)；而在過表達(dá)cypa時(shí)，vank86基因轉(zhuǎn)錄水平則明顯升高(圖4)。這些現(xiàn)象表明繭蜂病毒在感染Hi5細(xì)胞的過程中，以vank86為代表的繭蜂病毒基因的轉(zhuǎn)錄水平，會隨著CypA活性及其基因轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)水平的變化而產(chǎn)生同樣的變化趨勢，兩者之間可能存在一定的正相關(guān)。

目前，大量的研究主要集中于繭蜂病毒是如何抑制寄主的免疫反應(yīng)和發(fā)育的[23,24]，而其侵染機(jī)制的研究尚未見報(bào)道。本研究首次試圖去探討繭蜂病毒侵染昆蟲細(xì)胞的機(jī)制，但由于尚未獲得各種繭蜂病毒蛋白的相關(guān)特異性抗體，因此在研究過程中主要檢測了當(dāng)宿主細(xì)胞內(nèi)CypA發(fā)生變化時(shí)繭蜂病毒基因vank86的轉(zhuǎn)錄水平，但其翻譯水平的變化尚不可知。由此可見，本研究的研究結(jié)果存在一定的局限性。此外，還需進(jìn)一步研究繭蜂病毒中其他基因的變化情況，特別是CypA是否與繭蜂病毒中的一些蛋白存在相互作用，從而幫助繭蜂病毒的侵染。

總而言之，通過本研究發(fā)現(xiàn)CypA可能參與了繭蜂病毒侵染昆蟲細(xì)胞的過程，但其如何協(xié)助或參與繭蜂病毒的侵染過程及具體分子機(jī)理等還需進(jìn)一步探究。而闡明繭蜂病毒侵染昆蟲的分子機(jī)理，一方面可以完善寄生蜂對宿主的寄生機(jī)制，另一方面為尋找和開發(fā)新的生物防治資源提供一定的依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)

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