煎煮時(shí)間對(duì)葛根中葛根素含量的影響

黃曉巍，楊明慧，張丹丹，王晉冀，王紫薇，許佳明

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，長(zhǎng)春 130117）

葛根為豆科植物野葛Pueraria lobata Ohwi的干燥 根，性涼、味辛甘，具有生津止渴、發(fā)表透疹、解肌退熱等功效[1]。臨床用于治療表證發(fā)熱，常配伍柴胡、羌活、黃芩等藥；治療風(fēng)熱感冒等證，可與菊花、薄荷、蔓荊子等解表藥配伍使用[2-3]。本研究通過(guò)觀察不同煎煮時(shí)間對(duì)葛根煎煮液中葛根素含量變化的影響，為其臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)材料

LC-2030島津高效液相色譜儀（日本島津公司），MS205DU十萬(wàn)分之一天平（梅特勒-托利多集團(tuán)），HZT-A百分之一電子天平（杭州鼎鑫稱重設(shè)備有限公司），DHG-9245A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海一恒科技有限公司），KQ3200B 型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），HH-Ⅱ恒溫水浴鍋（上海致金儀器設(shè)備有限公司）及微孔濾膜（0.45 μm）。

葛根素對(duì)照品（貨號(hào)SP8690，北京索萊寶科技有限公司），葛根（批號(hào) 20151201，安徽新興中藥材飲片有限公司）經(jīng)長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)翁麗麗老師鑒定為合格品，無(wú)水乙醇（北京化工廠），甲醇（色譜純，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司），水（娃哈哈純凈水）。

2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

1.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取葛根素的標(biāo)準(zhǔn)品2.00 mg置于25 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀釋成含葛根素0.08 mg/mL的對(duì)照品溶液。

1.2 供試品溶液的制備[4-6]取約100 g葛根，加入1000 mL水浸泡30 min，分別煎煮20，25，30，35，40，45，50，55，60 min，把9個(gè)煎煮時(shí)間的葛根煎煮液濃縮干燥（80oC）至浸膏（出膏率約25%）研磨成粉末（過(guò)3號(hào)篩），取該粉末約0.1 g，精密稱定，置100 mL具塞錐形瓶中，加入30%乙醇50 mL，精密稱定重量，回流0.5 h，放冷至室溫，用30%乙醇補(bǔ)足損失的重量，先搖勻后濾過(guò)，用0.45 μm微孔濾膜過(guò)濾即得出9種不同煎煮時(shí)間的葛根供試品溶液。

2.3 色譜條件[7]色譜柱：Inertsil ODS-3液相色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：甲醇-水（25：75），柱溫30℃，流速1 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)250 nm，進(jìn)樣量10 μL。在選定的色譜條件下，葛根素色譜峰與相鄰色譜峰的分離度均大于1.5，理論塔板數(shù)不低于3000，拖尾因子符合要求。

2.4 線性考察[8]精密量取葛根素標(biāo)準(zhǔn)品5.00 mg置于5 mL容量瓶中，用30%乙醇溶解并定容，稀釋成含葛根素1 mg/mL的對(duì)照品溶液，以此液為母液，分別精密移取，制成濃度分別為0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 mg/mL的葛根素標(biāo)準(zhǔn)品溶液，按“2.4”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，以進(jìn)樣量X（μg） 為橫坐標(biāo)，峰面積Y為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葛根素的回歸方程為：Y= 412236X+ 9349.5，R2 = 0.9998。結(jié)果表明，葛根素進(jìn)樣量在1～5 μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)[9-10]精密吸取同一葛根對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。記錄峰面積積分值分別為5302105、5301946、5310027、5308579、5320473、5315724按峰面積計(jì)算葛根素的RSD（n= 6）為0.14%，表明儀器精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取煎煮35 min的葛根樣品溶液 10 μL，在 0，4，8，12，24，48 h 進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積積分值為指標(biāo)測(cè)定其穩(wěn)定性，依次為17163433、17307293、17214107、17196065、17232502、17297657，按峰面積計(jì)算葛根素的RSD（n= 6）為0.33%。表明葛根樣品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)[11]取按照“2.2”項(xiàng)下煎煮35 min的葛根樣品溶液6份，每份進(jìn)樣10 μL，以回歸方程計(jì)算葛根素的含量，上述含量平均值為52.904 mg/g，RSD（n= 6）為1.03%。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn)[12-13]精密稱取煎煮35 min已知含量為52.583 mg/g的葛根浸膏6份，每份約0.005 g，分別加入相當(dāng)于樣品中葛根素含有量100%的適量的對(duì)照品溶液。按“2.2”項(xiàng)下的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10 μL測(cè)定，計(jì)算葛根素的回收率和RSD（n= 6）為100.6%（RSD = 1.00）。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 樣品含量測(cè)定 樣品依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 加樣回收率實(shí)驗(yàn)

表2 不同煎煮時(shí)間葛根中葛根素含量

3 討論

《傷寒雜病論》[14]中張仲景善用葛根治療風(fēng)寒表證，“葛根湯，以水一斗，先煮葛根，減二升，去白沫，納諸藥。”現(xiàn)代研究表明，葛根中有效成分葛根素屬于異黃酮結(jié)構(gòu)，其脂溶性、水溶性以及生物利用度較低，將葛根“先煎”有宜于有效成分溶出[15-16]。而在中醫(yī)院實(shí)際煎煮過(guò)程中，對(duì)葛根飲片煎煮并沒(méi)有“先煎”要求。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明，葛根在煎煮35 min時(shí)葛根素溶出率最高，而解表類中藥煎煮時(shí)間要求20 min，故葛根應(yīng)以先煎15 min為宜。

在煎煮35 min后，葛根素含量降低，可能是因?yàn)榧逯髸r(shí)間對(duì)中藥某些成分含量的影響較大，在煎煮過(guò)程中，隨著煎煮時(shí)間的不同，單味藥的各組分之間也可能產(chǎn)生復(fù)雜的化學(xué)反應(yīng)，這些反應(yīng)最終影響中藥中某些成分的含量[17-18]。但有實(shí)驗(yàn)研究表明，“先煎”或與其他藥物同時(shí)煎煮對(duì)葛根素的溶出影響不大[19]，經(jīng)分析得出可能的原因是煎煮方法、飲片規(guī)格、炮制方法等，導(dǎo)致最終實(shí)驗(yàn)結(jié)果的差異。所以筆者認(rèn)為葛根飲片應(yīng)“先煎”，且“先煎”時(shí)間以15 min為宜。明確葛根飲片煎煮方法，能夠更好的指導(dǎo)中藥臨床用藥，從而提高臨床療效。

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