馬桑水提取物對大鼠深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面微循環(huán)和氧化應(yīng)激的影響*

胡澤華，余昭芬，黃 謹，陳薛妃，黃德斌

（湖北民族學院醫(yī)學院，恩施445000）

深Ⅱ度燒傷是傷及皮膚真皮深層而臨界Ⅲ度的燒傷，創(chuàng)面殘留的真皮、毛囊、汗腺和皮脂腺等皮膚附件可增殖形成創(chuàng)面修復的上皮島［1］。若及時處理且方法適宜，上皮島形成快，創(chuàng)面愈合快，瘢痕少，全身并發(fā)癥也少。反之，則創(chuàng)面損傷加重，影響上皮島的形成，瘢痕多，甚至攣縮畸形。因此，深Ⅱ度燒傷創(chuàng)面的早期處理對燒傷的轉(zhuǎn)歸與愈后有重要意義。研究表明，深Ⅱ度燒傷的快速愈合與創(chuàng)面早期微循環(huán)狀況和后期微血管密度密切相關(guān)［2］。燒傷后創(chuàng)面氧自由基以加重水腫、休克、炎癥反應(yīng)，阻礙修復細胞遷移與增殖等一系列氧化應(yīng)激過程而影響創(chuàng)面愈合［2］。因此，尋找抑制燒傷創(chuàng)面早期氧化應(yīng)激和促進創(chuàng)面愈合的外用藥物，是當今醫(yī)學研究的熱點。馬桑水提取物（Coriaria Sinica Maxim’s extract，CSME）能促進燒傷創(chuàng)面的修復，同時抑制其病理性瘢痕的過度增生［3］。本實驗進一步探討其作用機制與改善燒傷創(chuàng)面微循環(huán)和抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)有關(guān)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物、試劑與器材

1.1.1 CSME的制備［3］兩年生鮮原生植物枝條，九月采集，經(jīng)植物學鑒別晾干粉碎備用。取1 kg馬桑粉為樣品，將其用1 000 ml蒸餾水浸泡30 min，煎煮90 min分別提取3次，3次提取物合并、過濾和水浴鍋濃縮成100%的馬桑提取浸膏（1 ml相當于1 g生藥）備用［3］。隨后，按CSME與普通醫(yī)用白凡士林1∶10、5∶10、10∶10比例混合成低劑量、中劑量和高劑量三種外用燒傷軟膏。

1.1.2 實驗動物 SD大鼠180只（6周，180～220 g），雌雄各半，購于三峽大學實驗動物中心（中國宜昌，No.42010200000304）。

1.1.3 實驗器材與試劑 CUT 4050-旋轉(zhuǎn)切片機（德國，Leica），BX53倒置顯微鏡和 JEM-1200EX透射電鏡（日本，OLYMPUS），微量移液器（德國 Eppendorf艾本德股份公司），Multiskan FC-51119000酶標儀（美國，Ameritech），ZS83-1型內(nèi)切式組織勻漿器（無錫德譜儀器制造有限公司），722S分光光度計（杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司），Optima MAX-XP低溫離心機（美國，Beckman Coulter），YLS-5Q燙傷儀（天津科技發(fā)展有限公司）。SP、ELISA試劑盒 B＆D（美國，Sigma），血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）試劑盒（上海微蒙生物科技有限公司），DAB顯色試劑盒、SP一抗和SABC二抗試劑盒（北京索萊寶科技有限公司），超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（malondialdehyde，MDA）、羥脯氨酸（hydroxyproline，HYP）測定試劑盒及考馬斯亮藍蛋白定量試劑盒（北京雷根生物技術(shù)有限公司）。內(nèi)皮素（endothelin，ET）和一氧化氮（nitric oxide，NO）試劑盒（北京杰輝博高生物技術(shù)有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 實驗分組、造模及給藥［3］陽光與陰影的晝夜節(jié)律1周（溫度24℃±3℃，濕度50%±5%）。隨機將動物分成6組（n＝30）：對照組（NS）、凡士林組（WPL）、磺胺嘧啶銀組（SSD）、馬桑提取物組低劑量組（CSME-L）、中劑量組（CSME-M）和高劑量組（CSME-H）。常規(guī)配方飼料喂養(yǎng)和自來水飲水。所有動物都保持在晝夜周期（12 h光照，12 h黑暗）的標準實驗室條件下的動物房內(nèi)。自由攝取食物和水。動物治療嚴格按照國家衛(wèi)生實驗動物護理和使用指南進行。在學院實驗動物管理委員會的監(jiān)督下進行實驗。造模前禁食12 h，10%水合氯醛麻醉（0.3 ml／100 g，ip），背部剪毛3 cm×3 cm，8%Na2S脫毛，溫熱水沖洗，75%乙醇消毒處理脫毛區(qū)。除NS組外，其他各組均以燙傷儀2.5×2.5 cm探頭燙傷脫毛區(qū)（壓力 500 g，時間 15 s）［3］。傷后創(chuàng)面分別涂擦NS、WPL、SSD和 CSME燒傷軟膏（低劑量、中劑量、高劑量），腹腔注射乳酸林格氏液5 ml抗休克。每天上午9：00換藥1次，直至21 d。

1.2.2 觀察指標及內(nèi)容 愈合率［3］：分別于傷后48 h、7 d、14 d、21 d上午 9：00計算創(chuàng)面愈合率（創(chuàng)面大小用透明膜描記法）后各組大鼠分別各取6只，以10%水合氯醛麻醉（0.3 ml／100 g，ip）開胸暴露心臟，插管至升主動脈，快速灌注NS 150 ml，再灌注多聚甲醛（4%，200 ml）后，分別以創(chuàng)面中心直徑 2.5 cm取圓形創(chuàng)面全層皮膚組織修塊后，一部分用于組織學觀察，另一部分保存于-80℃冰箱備用于血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF），MDA、SOD、HYP等檢測。創(chuàng)面愈合率數(shù)據(jù)用 Image-Pro Plus結(jié)合Excel 2000處理，測量創(chuàng)面愈合率（healing rate，HR），其與原始創(chuàng)面面積（primordial area，PA）和未愈創(chuàng)面面積（no healing area，NHA）關(guān)系為：HR＝完全愈合時間：記錄創(chuàng)面完全愈合的時間，其標準為：創(chuàng)面完全被上皮覆蓋，無殘余缺損，創(chuàng)面色均一而光滑。

1.2.3 創(chuàng)面微血管密度的檢測 通過免疫熒光、免疫酶標或免疫電鏡法顯示血管內(nèi)皮細胞。先以石蠟切片脫蠟，干燥箱干燥（60℃，10 min），二甲苯Ⅰ和Ⅱ分別浸泡5 min，梯度乙醇各洗脫5 min，PBS洗脫5 min后，分別以0.25%胰蛋白酶消化行抗原修復、3%H2O2除內(nèi)源過氧化酶、一抗、二抗、辣根酶標記鏈霉卵白素、DAB顯色劑顯色、蘇木素復染、氨水返藍等，鏡下觀察并拍照。以Pareek法計算微血管密度（microvessel density，MVD）［4］（200倍鏡下計數(shù)真皮血管豐富處10個連續(xù)而不重疊微血管數(shù)的平均值）。各個標準品和樣品的OD值均以零孔調(diào)零，使用SPSS10.0軟件處理，分別以標準品濃度、OD值為橫坐標和縱坐標畫出標準曲線，相應(yīng)曲線方程，計算樣品含量。

1.2.4 創(chuàng)面組織含水量（tissue moisture，TM）的測定［5］用電子天平精確稱取創(chuàng)面組織200 mg，置于烤箱烘烤24 h（80℃），取出稱重，干濕法計算組織含水量。計算方法為［5］：

1.2.5 創(chuàng)面組織學觀察 實驗時取出備用創(chuàng)面全層皮膚組織進行修塊，用于HE染色。先以多聚甲醛固定2 h，梯度酒精脫水，石蠟包埋切片（厚 5 μm），最后行HE染色，鏡下觀察組織變化情況。

1.2.6 創(chuàng)面組織 VEGF、MDA、SOD、HYP、膠原蛋白、ET和NO的測定 取創(chuàng)面全層皮膚組織500 mg左右，去痂，以NS漂洗去血液，濾紙拭干稱重。冰浴中剪碎組織，加9倍4℃NS，勻漿機勻漿后低溫離心（3 000 r／min，10 min），取上清置于液氮中保存?zhèn)溆?。相關(guān)成分檢測方法均按試劑盒說明書步驟逐一進行檢測。消化法測定HYP，NO測定用Griess比色法測定（mol／g），按試劑盒說明書設(shè)標17準孔，分光光度計波長為550 nm讀取OD值，繪制標準曲線［5，6］。

1.3 統(tǒng)計方法

數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，所有數(shù)據(jù)用SPSS 11.0軟件分析。

2 結(jié)果

2.1 CSME對創(chuàng)面愈合的影響

在各個時間點，NS與WPL組均無明顯差異。48 h時，各組大鼠創(chuàng)面明顯水腫，較原始創(chuàng)面略有擴大，無顯著性差異；7 d時，各組大鼠創(chuàng)面水腫消失，明顯收縮，創(chuàng)面面積縮小，其中SSD、CSME-L、CSMEM、CSME-H的HR無明顯差異，均顯著大于NS（P＜0.05）；14 d和 21 d時，各組創(chuàng)面進一步縮小，SSD、CSME-L、CSME-M、CSME-H肉芽組織生長良好，血管形成豐富，結(jié)痂厚薄均勻，無明顯滲出液，而NS和WPL肉芽組織少，結(jié)痂厚薄不均勻，黃色滲出液較多，SSD、CSME-L、CSME-M、CSME-H的 HR顯著大于NS（P＜0.05），其中 SSD與 CSME-M相當而小于CSME-H（P＜0.05，表 1，圖 1，見彩圖頁Ⅲ）。

Tab.1 Effects of CSME on the HR of wound tissue in rats（%，±s，n＝6）

Tab.1 Effects of CSME on the HR of wound tissue in rats（%，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；HR：Healing rate；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Groups 0 h 48 h 7 d 14 d 21 d NS 0.00 -0.87±0.13 15.42±0.84 31.07±2.37 64.34±1.52 WPL 0.00 -1.02±0.10 14.95±1.04 29.84±0.63 66.76±1.44 SSD 0.00 -1.03±0.11 23.11±1.54* 61.21±1.02* 83.14±1.12*CSME-L 0.00 -1.14±0.22 22.07±1.28* 56.46±0.81* 70.24±2.49*CSME-M 0.00 -1.06±0.15 24.62±2.18* 62.61±1.38△ 82.75±1.67△CSME-H 0.00 -0.91±0.07 23.89±2.41* 71.16±1.32#▲ 91.46±2.03#▲

Fig.1 Effects of CSME on healing of wound tissue in rats

2.2 CSME對創(chuàng)面組織MVD的影響

2.2.1 CSME對創(chuàng)面組織MVD形態(tài)的影響 在各個時間點，NS組與WPL組均無明顯差異。傷后48 h，各組創(chuàng)面明顯水腫，淺層MVD受損狀況、數(shù)目與形態(tài)無明顯差異；傷后7 d和14 d，SSD組和CSME各組的MVD排列致密、形態(tài)規(guī)則、大小均勻、充盈良好，新生血管內(nèi)皮細胞排列整齊，數(shù)量眾多，成熟度良好，明顯優(yōu)于NS；傷后21 d，CSME各組的MVD大小、形態(tài)、排列以及充盈度明顯優(yōu)于SSD，但管徑、數(shù)量和分布方面呈劑量依賴性少于SSD。

2.2.2 CSME對創(chuàng)面組織MVD數(shù)量的影響 在各個時間點，NS組與WPL組均無明顯差異。燒傷后，各組大鼠創(chuàng)面的MVD隨時間的推移逐漸增加，直至21 d達最高峰；在7 d時，CSME各組的MVD顯著多于 SSD（P＜0.05），并呈現(xiàn)劑量依賴趨勢；在第 14天時，SSD與 CSME-M和 CSME-H相當；在 21 d時，CSME各組的MVD較14 d顯著性減少，SSD的MVD繼續(xù)增加，明顯超過 CSME各組（P＜0.05，表 2）。

Tab.2 Effects of CSME on the MVD of wound tissue in rats（piece／mm2，±s，n＝6）

Tab.2 Effects of CSME on the MVD of wound tissue in rats（piece／mm2，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；MVD：Microvessel density；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 8.16±1.04 12.06±2.19 21.24±1.08 32.86±3.57 WPL 7.89±0.87 11.73±3.08 20.01±3.52 30.44±3.06 SSD 8.02±0.38 17.45±4.67* 42.27±4.15* 51.67±4.16*CSME-L 7.95±0.94 15.28±2.01* 27.19±2.18*# 36.01±3.48*#CSME-M 7.78±0.46 22.37±2.53*#△ 41.08±2.43*△ 32.14±4.05*#CSME-H 8.26±0.91 28.11±3.46*#△▲ 43.27±3.39* 34.37±2.64*#

2.3 CSME對創(chuàng)面組織TM的影響

在各個時間點，NS與WPL均無明顯差異。各組TM于48 h達最高峰，之后逐漸下降恢復為損傷前水平。在48 h和7 d，CSME各組呈現(xiàn)劑量依賴性低于其他各組（P＜0.05），在各個時相SSD的TM均與NS相當。表明SSD對燒傷后創(chuàng)面組織的急性滲出無顯著影響，而CSME可顯著減輕創(chuàng)面組織的急性滲出（圖 2）。

Fig.2 Effects of CSME on the TM of wound tissuein rats TM：Tissue moisture

2.4 CSME對創(chuàng)面組織病理形態(tài)學的影響

在各個時間點，NS與WPL均無明顯差異。傷后48 h，各組病理學特征相似，無顯著差異。第7天，NS創(chuàng)面明顯凹凸不平，可見大量炎細胞浸潤，并出現(xiàn)大片壞死組織，新生上皮增殖不明顯，未見初始細胞層；SSD創(chuàng)面平整度和炎細胞浸潤明顯優(yōu)于NS和WPL，見散在片狀壞死組織，新生上皮偶有增殖，稚嫩細胞層尚未形成，排列尚可；CSME-L創(chuàng)面平整度和炎細胞浸潤情況與SSD相似，新生上皮增殖存在，稚嫩細胞層已基本形成，排列尚可；CSME-M創(chuàng)面平整度和炎細胞浸潤情況優(yōu)于SSD，新生上皮增殖明顯，典型稚嫩細胞層形成，排列良好；CSME-H創(chuàng)面平整度良好，炎細胞浸潤明顯，新生上皮增殖典型，典型稚嫩細胞層形成，排列整齊。

第14天，NS創(chuàng)面凹凸不平，炎細胞浸潤嚴重，壞死組織散在片狀分布，新生上皮明顯增殖，形成薄的細胞層，厚薄不均，排列紊亂；SSD創(chuàng)面仍然凹凸不平，較第7天明顯改善，炎細胞浸潤明顯，偶見散在片狀壞死組織，見新生上皮增殖，出現(xiàn)少量復層上皮細胞，已形成成熟細胞層，排列尚可；CSME-L與SSD相當；CSME-M創(chuàng)面平整，炎細胞浸潤少許，見點狀壞死組織，新生上皮增殖明顯，典型大量復層上皮細胞，已形成成熟的較厚細胞層，排列整齊。深部組織結(jié)構(gòu)（皮脂腺、汗腺等）表淺；CSME-H創(chuàng)面平整，炎細胞浸潤少許，偶見散在點狀壞死組織，新生上皮增殖典型，出現(xiàn)典型多層復層上皮細胞層，形成成熟的較厚細胞層，排列整齊，厚薄均勻，深部組織結(jié)構(gòu)（皮脂腺、汗腺等）表淺。

第21天，NS創(chuàng)面凹凸不平，新生上皮組織嫩薄不均勻，成熟度差，未見表皮釘腳深入真皮層，少數(shù)大鼠創(chuàng)面基本愈合；SSD創(chuàng)面凹凸不平，新生上皮組織嫩薄不均勻，成熟度尚可，少見表皮釘腳深入真皮層，多數(shù)大鼠創(chuàng)面基本愈合；CSME-L創(chuàng)面平整，新生上皮組織厚而均勻，成熟度尚可，較多表皮釘腳深入真皮層，所有大鼠創(chuàng)面基本愈合；CSME-M創(chuàng)面平整，新生上皮組織較厚而均勻，成熟度良好，表皮釘腳廣泛深入真皮層，所有大鼠創(chuàng)面基本愈合；CSMEH創(chuàng)面平整，新生上皮組織厚而均勻，成熟度好，表皮釘腳廣泛深入真皮層，所有大鼠創(chuàng)面基本愈合（圖3，見彩圖頁Ⅲ）。

Fig. 3 Staining results of wound tissue（HE×100）

2.5 CSME對大鼠創(chuàng)面組織 VEGF、SOD、MDA、HYP和NO的影響

2.5.1 CSME對大鼠創(chuàng)面組織VEGF含量的影響

在各個時間點，NS組與WPL組均無明顯差異。傷后48 h，CSME各組創(chuàng)面組織的VEGF呈劑量依賴性顯著高于 NS、WPL和 SSD（P＜0.05）；隨著時間的推移，各組逐漸升高，7 d達到最高，以后逐漸下降；傷后7 d、14 d，CSME各組呈現(xiàn)劑量依賴性高于NS、WPL和 SSD（P＜0.05）；傷后 21 d，各組均降至最低，其中 CSME呈劑量依賴性低于 NS、WPL和 SSD（P＜0.05，表 3）。

2.5.2 CSME對大鼠創(chuàng)面組織 SOD、HYP和 MDA的影響 在各個時間點，NS與WPL均無明顯差異。隨時間的推移，各組各時間段創(chuàng)面組織SOD活性逐漸增強和HYP含量逐漸增多。傷后48 h、7 d、14 d、21 d，NS、WPL、SSD的 SOD活性和 HYP含量無顯著性差異；CSME各組SOD活性和HYP含量呈劑量依賴性強于 NS、WPL、SSD（P＜0.05）；傷后7 d、14 d、21 d時間段SSD的SOD活性顯著弱于其他各組。各時間段各組創(chuàng)面組織MDA活性呈劑量依賴性減弱；傷后各時間段，NS與WPL的MDA活性無顯著性差異；SSD的MDA活性顯著強于其他各組（P＜0.05）；CSME各組MDA活性呈劑量依賴性弱于NS、WPL、SSD（P＜0.05，表 4、表 5、表 6）。

Tab.3 Effects of CSME on the VEGF of wound tissue in rats（10-12g／g，±s，n＝6）

Tab.3 Effects of CSME on the VEGF of wound tissue in rats（10-12g／g，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；VEGF：Vascular endothelial growth factor；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 18.69±1.07 30.52±1.19 32.08±2.04 23.68±0.63 WPL 17.93±1.14*#▲ 31.79±1.27 31.17±1.71 21.02±1.35*#△SSD 20.04±1.26 29.28±1.48*#▲ 32.62±1.15 22.19±1.64*#△CSME-L 24.71±1.51*#▲ 34.83±1.08*# 27.57±1.47 17.84±1.41*#▲CSME-M 30.86±2.06*#△ 38.15±2.11*#△ 28.93±1.05 12.11±1.28*#△CSME-H 31.45±2.37*#△ 41.63±2.24*#△▲ 29.61±1.43 13.04±0.79*#△

Tab.4 Effects of CSME on the SOD activity of wound tissue in rats（NU／mg·prot，±s，n＝6）

Tab.4 Effects of CSME on the SOD activity of wound tissue in rats（NU／mg·prot，±s，n＝6）

SOD：Superoxide dismutase*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 4.28±0.12 6.89±0.08 10.07±0.04 14.83±0.48 WPL 3.97±0.08 6.03±0.29 10.76±0.17 15.01±0.76 SSD 4.03±0.27 4.67±0.07* 7.14±0.05* 10.39±0.62*CSME-L 5.68±0.04*# 9.28±2.01*# 12.25±0.33*# 14.62±0.46*#CSME-M 7.73±0.17#△ 11.37±0.04*#△ 15.31±0.46*#△ 17.04±0.71*#△CSME-H 8.89±0.31*#△▲ 13.35±0.52*△▲ 17.68±0.43*△▲ 18.87±0.61*△▲

Tab.5 Effects of CSME on the HYPof wound tissue in rats（μg／mg，±s，n＝6）

Tab.5 Effects of CSME on the HYPof wound tissue in rats（μg／mg，±s，n＝6）

HYP：Hydroxyproline*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 28.14±1.12 43.51±2.17 59.04±2.09 71.68±1.75 WPL 27.86±1.34 44.07±2.26 57.87±1.62 72.04±2.86 SSD 28.09±1.18 43.68±1.96 58.04±2.49 71.38±2.37 CSME-L 27.73±2.03 52.46±2.38*# 65.73±2.51*# 76.53±1.58*#CSME-M 29.82±1.07 59.12±1.93*#△ 73.24±1.64*#△ 82.65±1.87*#△CSME-H 33.96±2.14*#△ 67.58±2.41*#△▲ 81.61±2.84*#△▲ 89.05±2.43*#△▲

Tab.6 Effects of CSME on the MDA content of wound tissue in rats（nmol／mg prot，±s，n＝6）

Tab.6 Effects of CSME on the MDA content of wound tissue in rats（nmol／mg prot，±s，n＝6）

MDA：Malondialdehyde*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group 48 h 7 d 14 d 21 d NS 7.51±0.34 5.82±0.13 4.84±0.09 2.67±0.24 WPL 7.84±0.27 6.01±0.37 5.04±0.28 2.59±0.14 SSD 8.93±0.45 7.04±0.12* 6.27±0.16* 4.84±0.09*CSME-L 6.79±0.39*# 6.01±0.03*# 4.65±0.27*# 3.73±0.17*#CSME-M 5.11±0.42#△ 4.46±0.06*#△ 3.65±0.46*#△ 2.62±0.24*#△CSME-H 4.29±0.31*#△▲ 3.35±0.22*△▲ 2.72±0.15*△▲ 1.43±0.01*△▲

2.5.3 CSME對大鼠創(chuàng)面組織NO和ET的影響

在各個時間點，NS與WPL均無明顯差異。傷后48 h，各組創(chuàng)面組織NO含量達高峰，之后下降。傷后48 h、7 d、14 d、21 d，CSME-L顯著低于 NS、WPL、SSD而高于 CSME-M和 CSME-H（P＜0.05），而 CSME-M與CSME-H相當，而顯著低于其他組（P＜0.05，表7）。燒傷后，各組創(chuàng)面組織ET含量隨時間持續(xù)升高，7 d達高峰，隨后下降；14 d，CSME-M與CSME-H的ET相當，顯著低于其他組（P＜0.05）；SSD顯著低于 NS、WPL，顯著高于 CSME-L（P＜0.05）。21 d CSME-M和CSME-H顯著高于其他各組和正常組織（P＜0.05），SSD顯著低于其他各組（P＜0.05，表8）。

Tab.7 Effects of CSME on the NO content of wound tissue in rats（10-9 mol／g，±s，n＝6）

Tab.7 Effects of CSME on the NO content of wound tissue in rats（10-9 mol／g，±s，n＝6）

CSME：Coriaria Sinica Maxim’s extract；NO：Nitric oxide；NS：Normal saline group；WPL：White petroleum group；SSD：Silver sulfadiazine group*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group Normal tissue 48 h 7 d 14 d 21 d NS 3.03±0.07 16.93±0.51 14.74±0.08 11.47±0.15 7.28±0.05 WPL 2.97±0.04 17.68±0.46 15.03±0.21 12.19±0.13 6.02±0.04 SSD 3.15±0.12 16.75±0.62 14.39±0.13 10.92±0.08 7.84±0.03 CSME-L 2.89±0.09 13.64±0.28* 9.64±0.15*# 8.33±0.06*# 5.18±0.07*#CSME-M 2.71±0.05 12.86±0.49* 7.59±0.06*#△ 2.88±0.02*#△ 2.42±0.01*#△CSME-H 3.08±0.13 13.09±0.61* 6.13±0.03*#△▲ 3.27±0.07*#△ 2.11±0.02*#△

Tab.8 Effects of CSME on the ET content of wound tissue in rats（10-12 mol／g，±s，n＝6）

Tab.8 Effects of CSME on the ET content of wound tissue in rats（10-12 mol／g，±s，n＝6）

ET：Endothelin*P＜0.05 vs NS；#P＜0.05 vs SSD；△P＜0.05 vs CSME-L；▲P＜0.05 vs CSME-M

Group Normal tissue 48 h 7 d 14 d 21 d NS 8.174±0.622 9.468±0.372 15.315±0.127 11.238±0.513 8.542±0.146 WPL 8.381±0.413 9.371±0.294 15.103±0.206 11.175±0.218 8.298±0.325 SSD 8.097±0.564 8.624±0.316 13.316±0.318* 9.183±0.346* 5.327±0.261*CSME-L 8.411±0.616 10.537±0.425*# 11.204±0.409*# 8.048±0.257*# 9.026±0.572*#CSME-M 8.263±0.273 11.004±0.217*# 11.137±0.612*# 5.583±0.609*#△ 9.821±0.411*#CSME-H 8.029±0.348 11.831±0.104*# 10.981±0.248*# 5.796±0.517*#△ 10.005±0.152*#△

3 討論

深Ⅱ度燒傷若處理不當，加重上皮島的損傷，影響創(chuàng)面愈合，增加瘢痕形成［4，7］。馬桑 （Coriarianepalensis Wall.），又稱千年紅，主要成分為馬桑毒素（coriamyrtin）、羥基馬桑毒素（tutin）、馬桑亭（coriatin）、含鞣質(zhì)（tannin）、多糖（polysaccharide）及樹脂等［3］。中國民間一直沿用馬桑水提取物作治療經(jīng)久不愈的皮膚潰瘍和燒傷創(chuàng)面愈合［3，8］。我們曾研究發(fā)現(xiàn)［3，9］，CSME對大鼠背部皮膚深Ⅱ度燒傷具有顯著的治療作用。本研究發(fā)現(xiàn)，CSME早期促進創(chuàng)面修復，后期阻止瘢痕的過度增生的機制是：因NO為重要的細胞生長雙重調(diào)控因子，ET是存在于血管內(nèi)皮的重要細胞因子，對于維持血管張力具有重要作用。NO有抑制ET合成效應(yīng)。本研究發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面修復早期，CSME增加NO合成，減少ET含量，從而增加新生血管的數(shù)量，增強創(chuàng)面組織營養(yǎng)供應(yīng)，促進創(chuàng)面愈合。但CSME呈劑量依賴性抑制NO的過多合成，減輕創(chuàng)面組織因NO作用的炎性滲出與水腫，縮短急性滲出期，加快創(chuàng)面修復。創(chuàng)面修復后期，CSME抑制NO的合成，增加ET的合成，減少新生血管密度，規(guī)則血管形態(tài)，縮小血管管徑，減少血管充盈，從而減輕瘢痕組織的填充。

大量研究證實，燒傷后創(chuàng)面氧化應(yīng)激反應(yīng)的啟動促進創(chuàng)面瘀滯帶擴大，影響創(chuàng)面愈合［6，10］。燒傷創(chuàng)面的修復也就是創(chuàng)面各種修復細胞增殖、分泌蛋白及成纖維細胞的修復過程［5，11］。創(chuàng)面組織中膠原成分HYP是膠原含量的標志，體現(xiàn)創(chuàng)面愈合的程度與質(zhì)量。燒傷后，創(chuàng)面組織產(chǎn)生氧自由基，通過鏈式反應(yīng)放大活性氧作用，產(chǎn)生具有很強的細胞毒作用的MDA、氫過氧基等脂質(zhì)過氧化物，導致細胞代謝紊亂甚至細胞凋亡［7］。SOD能清除氧自由基而阻止脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，防止細胞受損。本研究認為CSME促進早期燒傷創(chuàng)面愈合與增強SOD和抑制MDA的活性而阻止細胞凋亡有關(guān)，同時，早期增加HYP的合成，加快膠原蛋白的合成。

VEGF是加速新生血管形成的重要細胞因子，在燒傷創(chuàng)面修復過程中，有效調(diào)節(jié)著血管內(nèi)皮的快速增殖，促使創(chuàng)面微血管快速形成以保證創(chuàng)面組織營養(yǎng)物質(zhì)與氧供應(yīng)，有助于加速創(chuàng)面愈合。我們曾發(fā)現(xiàn)，CSME在促進燒傷創(chuàng)面愈合的同時，通過調(diào)控Ⅰ型與Ⅲ型膠原mRNA表達比值而阻止病理性瘢痕的過度增生［3］。本研究發(fā)現(xiàn)，創(chuàng)面修復的早期，CSME通過促進VEGF的合成而促進創(chuàng)面組織新生血管的形成而加快創(chuàng)面的修復。在創(chuàng)面修復的后期，調(diào)控VEGF的合成，延緩新生血管的過度增生，同時調(diào)控Ⅰ型與Ⅲ型膠原mRNA表達比值而阻止病理性瘢痕的過度增生［3］。

總之，馬桑水提取物對深Ⅱ度燒傷顯示出良好的治療作用。其主要作用機制是通過調(diào)控NO、ET、HYP、MDA、SOD而影響燒傷后全身或局部組織氧化應(yīng)激過程，減輕組織器官損傷。且早期促進與新生血管增生有關(guān)的VEGF表達，后期抑制VEGF的表達，在促進創(chuàng)面早期愈合的同時，阻止創(chuàng)面瘢痕過度增生，這對于燒傷治療具有重要臨床價值。

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