VEGF、flk-1、bax、 bcl-2在不同類型DR大鼠模型視網(wǎng)膜組織中表達(dá)變化的觀察

董白霞，包永琴，王振東，王家瑤

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院眼科，河北 石家莊 050000)

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·論 著·

VEGF、flk-1、bax、 bcl-2在不同類型DR大鼠模型視網(wǎng)膜組織中表達(dá)變化的觀察

董白霞，包永琴，王振東，王家瑤

(河北醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院眼科，河北 石家莊 050000)

目的觀察聯(lián)合注藥法建立的增殖型糖尿病性視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy，PDR)大鼠模型視網(wǎng)膜組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、flk-1、bax、bcl-2的表達(dá)變化，確定聯(lián)合注藥法所造大鼠PDR模型的價(jià)值。方法Sprague-Dawley大鼠分別采用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)腹腔注射(單純注藥組)和STZ腹腔注射聯(lián)合VEGF玻璃體注射(聯(lián)合注藥組)制造糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)模型，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各模型組視網(wǎng)膜組織中VEGF、flk-1、bax、bcl-2的表達(dá)，應(yīng)用MIAS1998型圖像分析系統(tǒng)測(cè)定VEGF、flk-1、bax、bcl-2在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層的平均光密度值。結(jié)果單純注藥組、聯(lián)合注藥組VEGF、flk-1、bax、bcl-2在視網(wǎng)膜除視桿視錐層之外各層均有表達(dá), 前三者在節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng)； bcl-2視桿視錐層內(nèi)節(jié)最強(qiáng)； VEGF表達(dá)次強(qiáng)為Müller細(xì)胞；bcl-2表達(dá)次強(qiáng)為節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層。但所有指標(biāo)聯(lián)合注藥組表達(dá)強(qiáng)度大于單純注藥組。bcl-2單純注藥組8周時(shí)間點(diǎn)比2周時(shí)間點(diǎn)在節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)增強(qiáng);單純注藥組8周時(shí)間點(diǎn)在內(nèi)網(wǎng)層的表達(dá)最強(qiáng)。聯(lián)合注藥組2周時(shí)間點(diǎn)節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng)。結(jié)論聯(lián)合注藥法建立的DR大鼠模型較單純注藥組更能夠代表人類PDR的病理改變，具有一定的科研價(jià)值。

糖尿病視網(wǎng)膜病變；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子類；大鼠

前期研究對(duì)鏈脲佐菌素(Streptozotocin, STZ)腹腔注射誘發(fā)的SD(Sprague-Dawley)大鼠糖尿病性視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)模型(單純注藥組)和STZ腹腔注射聯(lián)合血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)玻璃體注射建立的增殖型糖尿病性視網(wǎng)膜病變(proliferative diabetic retinopathy，PDR)模型(聯(lián)合注藥組)熒光素眼底血管造影(fluorescence fundus angiography,FFA)、碳素顆粒在視網(wǎng)膜微血管系統(tǒng)的滲漏情況、CD105免疫組織化學(xué)標(biāo)記增殖的血管內(nèi)皮細(xì)胞、電鏡下視網(wǎng)膜組織超微結(jié)構(gòu)損害程度等方面進(jìn)行了系列觀察和比較，發(fā)現(xiàn)單純注藥組僅能模擬人類背景期DR的病理?yè)p害；而聯(lián)合注藥組則能夠代表人類PDR，探索了一種全新的PDR動(dòng)物模型[1]。為進(jìn)一步確定此模型在蛋白質(zhì)和分子水平的變化是否能反映DR的病理過(guò)程，擬研究VEGF、flk-1在上述2種模型大鼠視網(wǎng)膜組織中的表達(dá)。糖尿病時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞以凋亡的形式死亡，故采用免疫組織化學(xué)法研究凋亡相關(guān)基因bax和bcl-2在不同DR大鼠模型視網(wǎng)膜中的表達(dá)，以確定聯(lián)合注藥組模型有無(wú)科研價(jià)值?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與主要試劑 8周齡健康SD大鼠，雌雄各半，體質(zhì)量180～250 g。購(gòu)自河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。VEGF蛋白購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；VEGF、flk-1、bax、bcl-2一抗購(gòu)自博士德公司；PV-6001/6002免疫組織化學(xué)試劑盒購(gòu)自北京中杉公司。

1.2 方法 STZ(60 mg/kg)腹腔注射制造DR大鼠模型24只。 1個(gè)月后 VEGF 0.05 μg/2 μL雙眼玻璃體注射12只(聯(lián)合注藥組)，等量生理鹽水雙眼玻璃體注射12只(單純注藥組)。按析因設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)研究方法，分為造模方法(單純注藥法、聯(lián)合注藥法)和病程(玻璃體注射VEGF后2周、4周、8周)2個(gè)因素。將各個(gè)因素的各個(gè)水平間排列組合，交叉分組，共6種組合，每種組合選4只動(dòng)物。每組每個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別處死4只動(dòng)物，取材雙眼球標(biāo)本，做視網(wǎng)膜組織切片，行VEGF、flk-1、bax、bcl-2免疫組織化學(xué)染色檢查。

1.3 計(jì)算機(jī)圖像分析 每只鼠每只眼球隨機(jī)選取視網(wǎng)膜切片2張，每張隨機(jī)選5個(gè)視野，應(yīng)用MIAS1998型圖像分析系統(tǒng)(河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院實(shí)驗(yàn)中心)測(cè)定VEGF、flk-1、bax、bcl-2在節(jié)細(xì)胞層、內(nèi)網(wǎng)層的平均光密度值，所測(cè)數(shù)據(jù)應(yīng)用析因設(shè)計(jì)的單因素方差分析對(duì)造模方法和病程對(duì)上述4種指標(biāo)表達(dá)的影響進(jìn)行研究，明確造模方法和病程對(duì)其表達(dá)影響的作用大小。

2 結(jié) 果

2.1VEGF在各組的表達(dá)情況

2.1.1 光學(xué)顯微鏡觀察 單純注藥組、聯(lián)合注藥組VEGF在視網(wǎng)膜除視桿視錐層之外各層均有表達(dá), 節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng); 其次為Müller細(xì)胞(圖1，2)。但聯(lián)合注藥組強(qiáng)度大于單純注藥組。

2.1.2VEGF在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)強(qiáng)弱程度與造模方法、不同病程的關(guān)系分析 不同造模方法和病程對(duì)VEGF在節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且兩者之間有交互作用。造模方法對(duì)VEGF表達(dá)影響的作用遠(yuǎn)大于病程的影響，聯(lián)合注藥法與單純注藥法相比，在2周病程對(duì)VEGF在內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；在4周、8周病程對(duì)VEGF在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2周與4周相比,VEGF在內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其余差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1，2。

表1VEGF在各組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.29±0.060.25±0.030.33±0.04聯(lián)合注藥組 0.33±0.050.39±0.040.38±0.02A因素(方法)F=40.890 P=0.000B因素(病程)F=4.400 P=0.019交互作用 F=7.460 P=0.002

表2 VEGF在各組內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.19±0.020.14±0.020.17±0.02聯(lián)合注藥組 0.29±0.020.28±0.020.22±0.03A因素(方法)F=262.020 P=0.000B因素(病程)F=18.610 P=0.000交互作用 F=17.410 P=0.000

2.2 flk-1在各層的表達(dá) 情況

2.2.1 普通光學(xué)顯微鏡觀察 flk-1在2個(gè)模型組視網(wǎng)膜除視桿視錐層外節(jié)以外各層均表達(dá), 節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng)(圖3，4)。但聯(lián)合注藥組強(qiáng)度大于單純注藥組。

2.2.2 flk-1在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)強(qiáng)弱程度與造模方法、不同病程的關(guān)系分析 造模方法對(duì)flk-1在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05), 病程對(duì)flk-1在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),但兩者之間有交互作用。造模方法對(duì)flk-1在節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的影響遠(yuǎn)大于病程的影響，在2周、8周病程不同造模方法對(duì)flk-1在節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),在4周病程對(duì)flk-1在節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的影響差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表3，4。

表3 flk-1在各組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.28±0.040.35±0.030.24±0.04聯(lián)合注藥組 0.43±0.060.35±0.040.44±0.05A因素(方法)F=87.890 P=0.000B因素(病程)F=0.670 P=0.518交互作用 F=22.130 P=0.000

表4 flk-1在各組內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.15±0.010.25±0.010.17±0.03聯(lián)合注藥組 0.35±0.060.27±0.040.36±0.01A因素(方法)F=210.290 P=0.000B因素(病程)F=0.793 P=0.459交互作用 F=43.130 P=0.000

2.3 bax在各組的表達(dá)情況

2.3.1 普通光學(xué)顯微鏡觀察 bax在2個(gè)模型組視網(wǎng)膜除視桿視錐層外節(jié)以外各層均表達(dá), 節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng)(圖5，6)。但聯(lián)合注藥組強(qiáng)度大于單純注藥組。

2.3.2 bax在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)強(qiáng)弱程度與造模方法、不同病程的關(guān)系分析 造模方法和病程對(duì)bax在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的影響差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且兩者之間有交互作用。造模方法對(duì)bax表達(dá)影響的作用遠(yuǎn)大于病程的影響，不同造模方法相比，在2周、4周、8周病程對(duì)bax的表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2周與4周、4周與8周相比, bax的表達(dá)差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。VEGF玻璃體腔注射后4周內(nèi)對(duì)bax表達(dá)影響的作用大于造模方法的影響，不同造模方法相比，在2周、4周、8周病程對(duì)bax的表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。2周與4周相比, bax的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表5，6。

2.4 bcl-2在各層的表達(dá)

2.4.1 普通光學(xué)顯微鏡觀察 bcl-2在兩模型組視網(wǎng)膜除視桿視錐層外節(jié)以外各層均表達(dá), 視桿視錐層內(nèi)節(jié)最強(qiáng), 節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層次之(圖7)。單純注藥組8周時(shí)間點(diǎn)比2周時(shí)間點(diǎn)在節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)增強(qiáng);單純注藥組8周時(shí)間點(diǎn)在內(nèi)網(wǎng)層的表達(dá)最強(qiáng)。聯(lián)合注藥組2周時(shí)間點(diǎn)節(jié)細(xì)胞層和神經(jīng)纖維層表達(dá)最強(qiáng)(圖8)。

2.4.2 bcl-2在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)強(qiáng)弱程度與造模方法、不同病程的關(guān)系分析 各組間 bcl-2在節(jié)細(xì)胞層及內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。bcl-2在糖尿病病程2周與8周、2周與4周、4周與8周差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表7，8。

表5 bax在各組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.27±0.010.34±0.030.44±0.02聯(lián)合注藥組 0.42±0.010.42±0.030.47±0.03A因素(方法)F=124.390 P=0.000B因素(病程)F=82.370 P=0.000交互作用 F=24.310 P=0.000

表6 bax在各組內(nèi)網(wǎng)層層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.20±0.030.31±0.020.28±0.02聯(lián)合注藥組 0.27±0.010.28±0.010.34±0.01A因素(方法)F=31.320 P=0.000B因素(病程)F=65.000 P=0.000交互作用 F=25.480 P=0.000

表7 bcl-2在各組神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.22±0.020.26±0.020.35±0.02聯(lián)合注藥組 0.50±0.070.22±0.010.29±0.05A因素(方法)F=30.393 P=0.000B因素(病程)F=41.105 P=0.000交互作用 F=98.348 P=0.000

表8 bcl-2在各組內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的光密度值

造模方法造模后不同時(shí)間點(diǎn)2周4周8周單純注藥組 0.14±0.010.21±0.010.40±0.03聯(lián)合注藥組 0.47±0.080.24±0.010.28±0.05A因素(方法)F=41.933 P=0.000B因素(病程)F=35.029 P=0.000交互作用 F=125.605 P=0.000

3 討 論

3.1 VEGF和flk-1表達(dá)的變化 VEGF是DR中造成微血管病變的重要因子，在DR的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中起至關(guān)重要的作用。前期研究表明，糖尿病時(shí)VEGF在視網(wǎng)膜的表達(dá)隨病程進(jìn)展逐漸增加，其特異性酪氨酸激酶受體——flk-1的表達(dá)也隨病程進(jìn)展逐漸增強(qiáng)[2-3]。

為了進(jìn)一步明確前期所建立的PDR動(dòng)物模型(聯(lián)合注藥組)在細(xì)胞因子及蛋白質(zhì)水平表達(dá)的變化，本研究觀察了該模型大鼠的視網(wǎng)膜組織VEGF和flk-1表達(dá)的變化，并應(yīng)用相互對(duì)照、析因設(shè)計(jì)的實(shí)驗(yàn)方法，與目前廣泛采用的STZ誘發(fā)的糖尿病大鼠模型(單純注藥組)的表達(dá)結(jié)果進(jìn)行了比較。結(jié)果顯示：聯(lián)合注藥法較單純注藥法對(duì)于VEGF和flk-1在視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層的表達(dá)強(qiáng)度有影響；在注射VEGF后4、8周聯(lián)合注藥組與單純注藥組大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層VEGF的表達(dá)光密度值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在VEGF注射后4、8周，聯(lián)合注藥組較單純注藥組VEGF表達(dá)增強(qiáng)；在注射VEGF后2、8周2組大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層flk-1表達(dá)的光密度值的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，在注射VEGF后2、8周，聯(lián)合注藥組較單純注藥組flk-1表達(dá)增強(qiáng)；聯(lián)合注藥組大鼠視網(wǎng)膜VEGF表達(dá)增強(qiáng)出現(xiàn)在VEGF注射后第4、8周，而flk-1增強(qiáng)則出現(xiàn)在VEGF注射后第2、8周。分析原因可能是：聯(lián)合注藥組玻璃體注射外源性VEGF后抑制了視網(wǎng)膜自身內(nèi)源性VEGF的分泌，而外源性VEGF因不液化的玻璃體的因素，經(jīng)視網(wǎng)膜完全吸收需要一定的時(shí)間。造模方法和病程對(duì)內(nèi)網(wǎng)層VEGF表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),且兩者之間有交互作用。造模方法對(duì)VEGF表達(dá)影響的作用遠(yuǎn)大于病程的影響，在注射VEGF后2、4、8周時(shí)，聯(lián)合注藥組與單純注藥組大鼠相比，VEGF表達(dá)的光密度值增加差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義； 隨病程進(jìn)展，在注射VEGF后4周VEGF表達(dá)的光密度值降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。出現(xiàn)上述結(jié)果的原因是：內(nèi)網(wǎng)層位于節(jié)細(xì)胞層的內(nèi)層，2周時(shí)外源性VEGF尚未經(jīng)視網(wǎng)膜充分吸收，對(duì)內(nèi)網(wǎng)層內(nèi)源性VEGF的表達(dá)還沒(méi)有造成一定的影響，而在4周時(shí)節(jié)細(xì)胞層VEGF表達(dá)增強(qiáng)，內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)受抑制，因此出現(xiàn)了4周時(shí)內(nèi)網(wǎng)層VEGF表達(dá)減弱的現(xiàn)象。在注射VEGF后2、8周時(shí)，聯(lián)合注藥組大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)網(wǎng)層flk-1表達(dá)的光密度值均高于相同病程的單純注藥組大鼠。表明聯(lián)合注藥組與單純注藥組相比，視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層VEGF的表達(dá)增加，注射VEGF后4周時(shí)內(nèi)網(wǎng)層VEGF的表達(dá)較2周時(shí)減少，這與外源性藥物在相鄰組織吸收后對(duì)內(nèi)源性分泌的抑制有關(guān)。伴隨著VEGF在注射后4周表達(dá)的減少，其特異性flk-1受體的表達(dá)也無(wú)增加的趨勢(shì)，直到8周時(shí)才增高，二者變化趨勢(shì)是一致的。

3.2 促凋亡基因bax和抑凋亡基因bcl-2表達(dá)的變化 bcl-2基因抑制細(xì)胞凋亡的發(fā)生[4],對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞有保護(hù)作用和抑制凋亡的作用[5-6]。bax是bcl-2的同種性蛋白，在細(xì)胞凋亡中所起的作用卻相反，二者之間的比例決定了細(xì)胞的命運(yùn)是生存還是凋亡[7-8]。bax在糖尿病大鼠[9-10]和人[11]視網(wǎng)膜的表達(dá)增加。而bcl-2的改變，存在一些爭(zhēng)議：Drel等[12]發(fā)現(xiàn)，STZ誘導(dǎo)的大鼠視網(wǎng)膜血管周細(xì)胞表達(dá)bcl-2降低；糖尿病患者的視網(wǎng)膜Muller細(xì)胞表達(dá)bcl-2降低[13-14]； Shin等[15]發(fā)現(xiàn)糖尿病患者神經(jīng)視網(wǎng)膜表達(dá)bcl-2增加；Cai等[16]則發(fā)現(xiàn)視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)bcl-2先增加后降低。

不同造模方法和病程對(duì)神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層bax表達(dá)的影響差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,且兩者之間有交互作用。造模方法對(duì)節(jié)細(xì)胞層bax表達(dá)影響的作用遠(yuǎn)大于病程的影響：在注射VEGF后2、4、8周時(shí)，聯(lián)合注藥組與單純注藥組大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層bax表達(dá)的光密度值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。聯(lián)合注藥組表達(dá)強(qiáng)于單純注藥組。隨病程進(jìn)展，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜節(jié)細(xì)胞層bax表達(dá)的光密度值不斷增高，一直持續(xù)至注射VEGF后8周。而在內(nèi)網(wǎng)層則不然，注射VEGF后4周內(nèi)時(shí)間對(duì)bax表達(dá)影響的作用大于造模方法的影響。注射VEGF后2、4、8周時(shí)，2組內(nèi)網(wǎng)層bax表達(dá)的光密度值的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。注射VEGF后2、8周時(shí)，聯(lián)合注藥組較單純注藥組bax表達(dá)增高；注射VEGF后4周時(shí)聯(lián)合注藥組較單純注藥組bax表達(dá)降低。這表明VEGF影響了bax的表達(dá)。注射VEGF后4周內(nèi)，bax的表達(dá)隨病程進(jìn)展增強(qiáng)，這種增強(qiáng)主要與病程有關(guān)，而非聯(lián)合注藥的作用。

各組間 bcl-2在節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層表達(dá)的光密度值差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。bcl-2在糖尿病病程2周與8周、2周與4周、4周與8周的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。上述結(jié)果表明，注射VEGF后8周內(nèi)，隨病程進(jìn)展，2個(gè)模型組大鼠節(jié)細(xì)胞層和內(nèi)網(wǎng)層bcl-2的表達(dá)漸增強(qiáng)； 聯(lián)合注藥組在4周時(shí)其表達(dá)較2周時(shí)有所減弱，說(shuō)明外源性VEGF的注入在短期內(nèi)可使視網(wǎng)膜組織內(nèi)保護(hù)性因子bcl-2的表達(dá)增加；隨DR病程進(jìn)展，糖尿病大鼠視網(wǎng)膜內(nèi)層bcl-2的表達(dá)增加，外源性VEGF則在短期內(nèi)使得bcl-2的表達(dá)增加。

綜上所述，DR時(shí)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用的bcl-2基因蛋白在視網(wǎng)膜內(nèi)層的表達(dá)增加，這可能是機(jī)體對(duì)視網(wǎng)膜細(xì)胞損傷的一種代償性保護(hù)機(jī)制。(本文圖見封三)

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(本文編輯：趙麗潔)

Observation of the expression of VEGF, flk-1, bax and bcl-2 in the retina of different types of DR rat model

DONG Bai-xia， BAO Yong-qin， WANG Zhen-dong， WANG Jia-yao

(Department of Ophthalmology， the Second Hospital of Hebei Medical University， Shijiazhuang 050000， China)

Objective To observe the variation of vascular endothelial growth factor(VEGF)， flk-1， bax， bcl-2 expression in PDR rat retina eatablished by symphysial injection and to definite its superiority. Methods Sprague-Dawley rats were made as diabetic retinopathy models by solitary injection with streptozotocin intraperitoneally or symphysial injection with streptozocin intraperitoneally and VEGF intravitreously respectively. Using factorial design empirical method，we observed the variation of VEGF， flk-1， bax， bcl-2 expression in retinas of diabetic rats established by different methods by immunohistochemistry and measured the average optical density value of VEGF， flk-1， bax， bcl-2 in retinal ganglion cell layer and inner plexiform layer by MIAS1998 type image analysis system. Results VEGF，flk-1， bax， bcl-2 were expressed in each layer of retina in both groups except the layer of rods and cones. The front three targets were expressed strongest in the ganglion and nerve fiber layer, while bcl-2 was expressed the strongest in inner segment of the rods and cones layer. The next strongest layer of VEGF expression was the Müller cells while the next strongest layer of bcl-2 expression was the ganglion and nerve fiber layer. All targets expression in symphysial injection groups were stronger than those in solitary injection groups. Bcl-2 expression in ganglion and nerve fiber layer at 8 weeks after VEGF injection was stronger than that at 2 weeks. The strongest bcl-2 expression was in inner plexiform layer at 8 weeks in solitary injection groups, while in symphysial injection groups it was in ganglion and nerve fiber layer at 2 weeks after VEGF injection. Conclusion PDR rat model established by symphysial injection can represent the pathological changes of human PDR and has its scientific research worth.

diabetic retinopathy； vascular endothelial growth factors； rats

2016-07-07；

2016-09-06

董白霞(1975-)，女，河北河間人，河北醫(yī)科大學(xué)第

R587.26

A

1007-3205(2016)11-1289-06

10.3969/j.issn.1007-3205.2016.11.013

二醫(yī)院副主任醫(yī)師，醫(yī)學(xué)博士，從事眼外傷、眼底病診治研究。