• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    小麥赤霉病菌對(duì)常用殺菌劑的抗性研究

    2018-05-14 08:59:49周仁先
    安徽農(nóng)業(yè)科學(xué) 2018年21期
    關(guān)鍵詞:多菌靈抗性小麥

    周仁先

    摘要 [目的] 研究小麥赤霉病菌對(duì)常用殺菌劑的抗性。[方法]測(cè)定從帶病麥穗標(biāo)本中分離得到的小麥赤霉病菌株對(duì)多菌靈、戊唑醇?xì)⒕鷦┑目顾幮裕⒗米贤夤庹T導(dǎo)得到抗性突變菌株,同時(shí)測(cè)定了抗藥突變菌株菌絲的生長(zhǎng)量,分析了抗性突變菌株產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)特性,最后提取并測(cè)定了脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)毒素含量。 [結(jié)果]安徽、江蘇地區(qū)的田間已檢測(cè)到小麥赤霉病菌抗性菌株,紫外光誘導(dǎo)也獲得了該病菌抗性菌株;抗性菌株在菌絲生長(zhǎng)和產(chǎn)孢量方面與敏感菌株無(wú)顯著差異,但孢子萌發(fā)率遠(yuǎn)低于敏感菌株;樣品中的DON毒素含量隨著病情級(jí)別和病粒率的增加而增加,根據(jù)病粒率來(lái)測(cè)算DON毒素含量具有一定的實(shí)用性。[結(jié)論]該研究為小麥赤霉病的抗性治理提供對(duì)策。

    關(guān)鍵詞 小麥;赤霉病菌;多菌靈;戊唑醇;抗性

    中圖分類號(hào) S435.121.4+5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611(2018)21-0152-03

    Abstract [Objective] To study resistance of Fusarium graminearum to common fungicides in wheat.[Method]The resistance of Fusarium graminearum in wheat isolated from diseased wheat ear specimens to carbendazim and tebuconazole fungicides was determined. At the same time, the mycelium growth of drugresistant mutant strain was determined, and the sporulation and spore germination characteristics of resistant mutant strain were analyzed. Finally, the content of deoxynivalenol (DON) toxin was determined.[Result] The resistant strain of Fusarium graminearum in wheat had been detected in the field of Anhui and Jiangsu, and the resistant strain was also induced by ultraviolet light, and there was no significant difference between the resistant strain and the sensitive strain in hyphae growth and sporulation. But spore germination rate was much lower than that of sensitive strains.The level of DON toxin in samples increased with the increase of disease grade and disease rate. It was practical to calculate the content of DON toxin according to the rate of diseased grains.[Conclusion]The study provides a solution for resistance management of Fusarium graminearum in wheat.

    Key words Wheat;Fusarium graminearum;Carbendazim;Tebuconazole;Resistance

    小麥?zhǔn)鞘澜缛蠊任镏?,在我?guó)分布廣泛,是我國(guó)主要的糧食作物,其種植面積僅次于水稻。小麥在種植過(guò)程中病害發(fā)生頻繁,造成嚴(yán)重的損失。目前小麥生產(chǎn)中常見(jiàn)的病害有小麥條銹病、小麥葉銹病、小麥稈銹病、小麥白粉病、小麥赤霉病、小麥紋枯病等。其中,小麥赤霉病是麥類作物上最重要的流行病害之一。小麥赤霉病在我國(guó)黃淮小麥主產(chǎn)區(qū)發(fā)生嚴(yán)重,部分地區(qū)收獲的小麥中赤霉病菌含量超標(biāo)嚴(yán)重。禾谷鐮刀菌(Fusarium graminearum),即小麥赤霉病菌,是我國(guó)乃至全世界小麥赤霉病的最主要致病菌。此類真菌破壞力很強(qiáng),能在幾周時(shí)間內(nèi)摧毀大面積的高產(chǎn)作物,嚴(yán)重影響了谷類作物的生長(zhǎng)。在我國(guó)多菌靈、戊唑醇是防治該病害的主要藥劑,但由于此類殺菌劑的長(zhǎng)期使用,導(dǎo)致我國(guó)很很多地區(qū)出現(xiàn)了小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈、戊唑醇等常見(jiàn)殺菌劑的抗性問(wèn)題[1-2]。隨著病菌抗藥性的日趨加強(qiáng),我國(guó)很多地區(qū)赤霉病的發(fā)生也更加嚴(yán)重,同時(shí)也出現(xiàn)了污染問(wèn)題。為了杜絕藥劑的不合理使用、殺菌劑防治失效和小麥病害的大范圍發(fā)生,筆者檢測(cè)了小麥赤霉病菌對(duì)常用殺菌劑多菌靈、戊唑醇的抗藥性,并進(jìn)一步了解抗性發(fā)生的原因和類型,以期為小麥赤霉病的抗性治理提供對(duì)策。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    1.1.1

    供試藥劑。98%多菌靈,由安徽廣信農(nóng)化股份有限公司生產(chǎn);戊唑醇,由江蘇瑞德邦化工科技有限公司生產(chǎn)。

    1.1.2

    供試菌株。從河南、安徽、江蘇等地采集的揚(yáng)麥13、揚(yáng)麥15、揚(yáng)麥16、寧麥13帶病麥穗標(biāo)本,分離小麥赤霉病病原菌,獲得單孢菌株。

    1.2 方法

    1.2.1

    小麥赤霉病菌抗藥性測(cè)定。將分離純化獲得的赤霉病菌菌株于25 ℃培養(yǎng)3 d后,用100 μL槍頭打成約5 mm的圓孔,再用滅菌后的牙簽分別接種至含有殺菌劑多菌靈、戊唑醇的PSA平板上,并做對(duì)照處理(不含殺菌劑),每個(gè)平板接種8株菌株。多菌靈和戊唑醇的濃度均為1、3、5、10、15 μg/mL,放置于培養(yǎng)箱培養(yǎng)3 d。用十字法測(cè)量菌落直徑,每處理重復(fù)3次,取平均值,計(jì)算其對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制百分率和相對(duì)防效,再根據(jù)相對(duì)防效的概率值和藥劑對(duì)數(shù)值的線性回歸分析,求出毒力回歸方程和抑制菌絲生長(zhǎng)的有效中濃度(EC50),并在含有不同濃度的PSA平板上測(cè)定其對(duì)相關(guān)菌株的最低抑制濃度(MIC)。

    1.2.2

    紫外光誘導(dǎo)抗性菌株。用5 mm孔徑的高溫滅菌槍頭打孔,用滅菌牙簽將隨機(jī)選取的10株敏感菌株接種至CMC培養(yǎng)基中,在25 ℃條件下振蕩培養(yǎng)4 d使之產(chǎn)孢;用經(jīng)滅菌的濾紙過(guò)濾收集孢子于離心管中,8 000 r/min離心5 min,棄上清,孢子沉淀在底部,用無(wú)菌水懸浮混勻,使孢子濃度約為105個(gè)/mL;吸取以上濃度的孢子液均勻涂布于多菌靈和戊唑醇的PSA平板上,將該平板距離紫外光源20 cm直接紫外光照射90 s,然后迅速轉(zhuǎn)入黑暗條件培養(yǎng),8 d左右后長(zhǎng)出抗性突變菌株。

    1.2.3

    抗藥突變菌株菌絲生長(zhǎng)量測(cè)定。將經(jīng)紫外光誘導(dǎo)獲得的抗性突變菌株接種于PSA平板上,在25 ℃條件下培養(yǎng)3 d,測(cè)量菌落直徑,并計(jì)算出線性生長(zhǎng)速率。在100 mL PD培養(yǎng)液中接種4個(gè)菌碟,于25 ℃下120 r/min振蕩培養(yǎng)4 d,每處理3次重復(fù),菌絲過(guò)濾、抽干后稱量干重。

    1.2.4

    抗性突變菌株產(chǎn)孢及孢子萌發(fā)特性。選取在PSA平板上培養(yǎng)3 d的敏感菌株和抗突變菌株菌絲各20 mg,分別接種在100 mL 4%的綠豆湯培養(yǎng)基上,于25 ℃下200 r/min振蕩培養(yǎng)5 d使之產(chǎn)孢,采用血球計(jì)數(shù)板計(jì)算出產(chǎn)孢量。取適量孢子用無(wú)菌水稀釋10倍,采用清水萌發(fā)法于25 ℃下分別于8、16、22、26 h計(jì)算孢子的萌發(fā)率和芽管長(zhǎng)度。每處理3次重復(fù)。

    1.2.5

    脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(DON)毒素提取和測(cè)定。取2.0 g樣品粉末,置于50 mL離心管中,加入10 mL 乙腈∶水(V∶V)為84∶16的提取液,渦旋1 min,置于轉(zhuǎn)速200 r/min的搖床過(guò)夜,取2 mL上清液經(jīng)TRILOGYTC-T200型凈化柱凈化。取適量上述凈化后的樣品至自動(dòng)進(jìn)樣瓶,在流動(dòng)相為水∶甲醇∶乙腈(V∶V∶V)=90∶5∶5、紫外檢測(cè)器波長(zhǎng)220 nm、流速1 mL/min、進(jìn)樣量15.0 μL、柱溫箱25 ℃、色譜柱 Agilent Eclipse XDB-C18分析柱(250.0 mm×4.6 mm,5.0 μm)的條件下,測(cè)定DON毒素含量。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 小麥赤霉病菌的抗藥性

    由圖1可知,從樣品上分離得到的赤霉病菌分別接種至5 μg/mL多菌靈和5 μg/mL戊唑醇的藥板上,多菌靈的藥板上敏感菌株完全被抑制,而抗性突變菌株可以生長(zhǎng);戊唑醇的藥板上,敏感菌株具有一定的耐藥性,而在菌碟邊緣有微小菌絲長(zhǎng)出。可能是由于其對(duì)這2種藥劑的抗性機(jī)制不同造成的。

    用此方法檢測(cè)了90株赤霉病菌。由表1可知,江蘇地區(qū)分離到的抗性菌株為50株,其中18株對(duì)多菌靈有明顯抗性,抗性比為36%;安徽地區(qū)分離到的抗性菌株為40株,其中4株對(duì)多菌靈有明顯抗性,抗性比為10%。對(duì)戊唑醇未檢測(cè)到產(chǎn)生抗性的菌株,可能是由于戊唑醇的作用機(jī)理與多菌靈不同所致。

    2.2 紫外光誘導(dǎo)獲得的抗藥突變體

    經(jīng)過(guò)紫外光誘導(dǎo)后,頻率為1×10-4 的菌株能在多菌靈藥板上生長(zhǎng),但轉(zhuǎn)代3~4代后敏感性恢復(fù),只有經(jīng)紫外光誘導(dǎo)后的抗藥突變體菌株經(jīng)轉(zhuǎn)代后仍能在多菌靈PSA平板上生長(zhǎng)。其對(duì)多菌靈的毒力回歸方程為Y=13.428 6+14.342 3X,相關(guān)系數(shù)r為0.966 7,EC50為14.21 μg/mL,EC50值是敏感菌株的26倍。

    2.3 抗藥突變菌株的生長(zhǎng)情況

    由圖2可知,敏感菌株和抗藥突變菌株在生長(zhǎng)速率方面無(wú)顯著差異。轉(zhuǎn)9代后,抗藥突變菌株的生長(zhǎng)速率超過(guò)敏感菌株??顾幫蛔兙旰兔舾芯甑木z干重增長(zhǎng)率分別為0.178、0.165 mg/d,這與線性生長(zhǎng)速率趨勢(shì)一致。

    2.4 敏感菌株和抗藥突變菌株產(chǎn)孢和孢子萌發(fā)能力

    由圖3可知,轉(zhuǎn)1代后敏感菌株和抗藥突變菌株的產(chǎn)孢量分別為2.0×106和3.0×106個(gè)/mL,轉(zhuǎn)13代后敏感菌株和抗藥突變菌株的產(chǎn)孢量分別為3.5×106和2.8×106個(gè)/mL。這表明轉(zhuǎn)代使抗藥突變菌株的產(chǎn)孢能力下降,敏感菌株的產(chǎn)孢能力略有升高。當(dāng)敏感菌株的孢子萌發(fā)率為100%時(shí),抗藥突變菌株僅為57.0%。敏感菌株和抗藥突變菌株在16 h時(shí)孢子萌發(fā)的芽管長(zhǎng)度分別為0.017、0.028 mm;在22 h時(shí),分別為0.034和0.078 mm。

    2.5 產(chǎn)DON毒素能力

    設(shè)定濃度分別為0、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 mg/L 7種DON毒素標(biāo)準(zhǔn)樣,采用HPLC進(jìn)樣檢測(cè),得到相應(yīng)的峰面積,再利用各濃度及其對(duì)應(yīng)的峰面積得出線性回歸方程。由圖4可知,標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=19.259X,R2=0.996 9。由此可知,抗藥突變菌株的樣品中DOC毒素含量較敏感菌株下降了2.5倍。

    3 結(jié)論與討論

    3.1 結(jié)論

    該試驗(yàn)檢測(cè)了菌株對(duì)小麥赤霉病菌常用殺菌劑多菌靈和戊唑醇的敏感性特性。通過(guò)紫外光誘導(dǎo)獲得抗藥突變菌株,抗藥突變菌株與敏感菌株在菌絲干重、生長(zhǎng)速率和產(chǎn)孢能力等方面均無(wú)顯著差異,但轉(zhuǎn)代后的抗藥突變菌株在產(chǎn)孢能力、生長(zhǎng)速率方面與敏感菌株具有一定差異,這表明抗藥突變菌株可能難以穩(wěn)定生長(zhǎng)。通過(guò)比較抗藥突變菌株和敏感菌株的孢子萌發(fā)能力和芽管長(zhǎng)度,發(fā)現(xiàn)抗藥突變菌株的孢子萌發(fā)能力遠(yuǎn)低于敏感菌株。小麥赤霉病菌抗藥突變菌株由于繁殖能力低,導(dǎo)致其在田間的競(jìng)爭(zhēng)力也有所削弱。研究表明,小麥赤霉病菌抗藥突變菌株的致病力較敏感菌株有所下降,且紫外光誘導(dǎo)獲得抗藥突變菌株在轉(zhuǎn)代后很容易恢復(fù)敏感性,這可能是導(dǎo)致抗藥突變菌株在田間發(fā)生頻率低的主要原因[3-4]。

    3.2 討論

    小麥赤霉病是一種氣候性病害,其流行因素很多,但主要與開(kāi)春后初侵染的菌源量、揚(yáng)花期的溫濕度等有關(guān)。在我國(guó),對(duì)小麥赤霉病的防治主要采用抗病品種和化學(xué)藥劑。目前我國(guó)對(duì)小麥赤霉病表現(xiàn)高抗的品種資源匱乏,加上小麥的抗病性和高產(chǎn)性無(wú)相互統(tǒng)一,使得赤霉病抗性小麥品種的選育進(jìn)程緩慢[5-8]。

    小麥赤霉病的發(fā)生與菌源量和氣候條件有關(guān),因此在防治過(guò)程中可以將這兩點(diǎn)作為改善對(duì)象。赤霉病菌主要是在禾谷類作物的殘?bào)w上越冬,小麥播種前要深耕滅茬盡量降低菌源量。此外,將小麥與非禾本科作物輪作,可以有效減輕赤霉病的發(fā)生。氣候方面,可以適當(dāng)提前播種,以便揚(yáng)花期提前,錯(cuò)開(kāi)有利于赤霉病發(fā)病的氣候條件[9-11]。

    小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈類苯并咪唑類殺菌劑產(chǎn)生抗藥性的最主要原因是此類藥劑與病原菌的親和性逐漸下降。多菌靈類苯并咪唑類殺菌劑會(huì)與靶標(biāo)真菌生物體內(nèi)的β-微管蛋白進(jìn)行特異性結(jié)合,干擾微管的裝配,由于微管在植物有絲分裂過(guò)程中具有重要作用,這就導(dǎo)致細(xì)胞正常的有絲分裂受到干擾,生長(zhǎng)受到抑制[12-13]。小麥赤霉病菌雖然對(duì)常用殺菌劑多菌靈普遍存在抗藥性,但試驗(yàn)過(guò)程中未發(fā)現(xiàn)戊唑醇的抗性菌株,這表明戊唑醇在田間具有較好的防治效果,可作為多菌靈的替代藥劑。

    小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈的抗性水平呈加快趨勢(shì),江蘇和安徽地區(qū)抗性水平以每年約10%的速度增長(zhǎng),尤其是在赤霉病大流行的年份。對(duì)于未檢測(cè)出抗性菌株的戊唑醇,對(duì)其進(jìn)行室內(nèi)抗性誘導(dǎo),很難得到高抗菌株,唯一的抗性菌株僅處于低抗水平,這主要是由于戊唑醇作用方式的特殊性導(dǎo)致。基于此,筆者建議在小麥赤霉病流行地區(qū),可以改變?cè)瓉?lái)的耕種模式,打破小麥赤霉病菌的循環(huán)路徑;播種前對(duì)籽粒進(jìn)行藥劑處理,適當(dāng)早播,盡量使小麥揚(yáng)花期避開(kāi)赤霉病的傳播;堅(jiān)持“見(jiàn)花打藥”,提早預(yù)防;當(dāng)多菌靈的抗性菌株比例達(dá)10%以上時(shí),該藥劑的推薦劑量已不能有效防治小麥赤霉病,需要用其他藥劑代替。

    參考文獻(xiàn)

    [1] 宋益民,叢國(guó)林,陳懷谷.多菌靈及其復(fù)配制劑防治小麥赤霉病的應(yīng)用效果[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào),2018,45(2):352-358.

    [2] 宋陽(yáng)陽(yáng),林楊,羅漢鋼,等.湖北省小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈、戊唑醇和咪鮮胺的敏感性[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào),2016(6):724-728.

    [3] 段亞冰,效雪梅,楊瑩,等.一種基于LAMP技術(shù)快速檢測(cè)小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈抗藥性方法的建立及應(yīng)用[J].南京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2016,39(1):97-105.

    [4] 陳驤.小麥赤霉病菌的抗藥性研究及抗性治理[D].杭州:浙江大學(xué),2015.

    [5] 陳宏州,肖婷,許媛,等.小麥赤霉病菌對(duì)多菌靈和不同殺菌劑敏感性的相關(guān)分析[J].農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào),2016,6(9):31-36.

    [6] 邵莒南.防治小麥赤霉病高效藥劑篩選及其作用方式研究[D].泰安:山東農(nóng)業(yè)大學(xué),2015.

    [7] 侯昌亮,胡寒哲,艾爽,等.11種殺菌劑對(duì)小麥赤霉病菌的抑制作用[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2014(17):4066-4068.

    [8] 許娟.安徽小麥赤霉病菌生物學(xué)特性及遺傳多樣性研究[D].合肥:安徽農(nóng)業(yè)大學(xué),2012.

    [9] 周永進(jìn).小麥赤霉病致病菌基因化、化學(xué)型分化及其致病力分析[D].南寧:廣西大學(xué),2012.

    [10] 姚金保,陸維忠.小麥新品種生選6號(hào)的豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)性和赤霉病抗性分析[J].麥類作物學(xué)報(bào),2012,32(4):793-798.

    [11] MELLENBORN C,STEINER U,LUDWIG M,et al.Effect of fungicides on the complex of Fusarium species and saprophytic fungi colonizing wheat kernels[J].Eur J Plant Patho,2008,120:157-166.

    [12] HOU Y P,LUO Q Q,CHEN C J,et al.Application of tetra primer ARMS-PCR approach for detection of Fusarium graminearum genotypes with resistance to carbendazim[J].Australas Plant Pathol,2013,42:73-78.

    [13] LUO C X,SCHNABEL G.The cytochrome P450 lanosterol 14αdemethylase gene is a demethylation inhibitor fungicide resistance determinant in Monilinia fructicola field isolates from Georgia[J].Appl Environ Microbiol,2008,74(2):359-366.

    猜你喜歡
    多菌靈抗性小麥
    主產(chǎn)區(qū)小麥?zhǔn)召?gòu)進(jìn)度過(guò)七成
    孔令讓的“小麥育種夢(mèng)”
    金橋(2021年10期)2021-11-05 07:23:28
    液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定蔬菜中多菌靈的不確定度評(píng)定
    葉面施肥實(shí)現(xiàn)小麥畝增產(chǎn)83.8千克
    一個(gè)控制超強(qiáng)電離輻射抗性開(kāi)關(guān)基因的研究進(jìn)展
    哭娃小麥
    甲基對(duì)硫磷抗性菌的篩選及特性研究
    啤酒中的“多菌靈”會(huì)致癌,它真的有那么毒嗎?
    甜玉米常見(jiàn)病害的抗性鑒定及防治
    用于黃瓜白粉病抗性鑒定的InDel標(biāo)記
    www.www免费av| 欧美日韩国产亚洲二区| 尾随美女入室| 国产午夜福利久久久久久| 亚洲精品在线观看二区| 亚洲av美国av| 最近最新免费中文字幕在线| xxxwww97欧美| 国产欧美日韩精品一区二区| 亚洲国产高清在线一区二区三| 国产免费一级a男人的天堂| 亚洲欧美日韩无卡精品| 美女黄网站色视频| 男女视频在线观看网站免费| 女人被狂操c到高潮| 99热这里只有是精品50| 波野结衣二区三区在线| 精品久久久久久久久亚洲 | 午夜精品在线福利| 老司机福利观看| 最近最新中文字幕大全电影3| 国产亚洲精品av在线| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 成人毛片a级毛片在线播放| 国产不卡一卡二| 亚洲内射少妇av| 日本欧美国产在线视频| 黄色丝袜av网址大全| netflix在线观看网站| 国产老妇女一区| 亚洲精品一区av在线观看| 一级毛片久久久久久久久女| 国产欧美日韩一区二区精品| 国产一区二区在线av高清观看| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 1024手机看黄色片| 亚洲天堂国产精品一区在线| 看十八女毛片水多多多| 日本色播在线视频| 日本免费a在线| 久久九九热精品免费| 极品教师在线视频| 国产伦一二天堂av在线观看| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产一区二区激情短视频| 欧美黑人巨大hd| 一级黄片播放器| 老女人水多毛片| 黄色欧美视频在线观看| 黄色日韩在线| 婷婷色综合大香蕉| 露出奶头的视频| 欧美黑人巨大hd| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久国产精品人妻蜜桃| 国产免费男女视频| 国产真实伦视频高清在线观看 | 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久久久久久久久成人| 老熟妇仑乱视频hdxx| 搡女人真爽免费视频火全软件 | 亚洲综合色惰| 一区二区三区激情视频| 国产精品亚洲美女久久久| 淫妇啪啪啪对白视频| 午夜激情福利司机影院| 亚洲欧美清纯卡通| 成人午夜高清在线视频| 国国产精品蜜臀av免费| 深夜精品福利| 国产高清激情床上av| 色噜噜av男人的天堂激情| 欧美日韩精品成人综合77777| 国产精品一区二区性色av| 全区人妻精品视频| 国产av在哪里看| 亚洲av免费在线观看| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产视频内射| 欧美日本视频| 亚洲精品在线观看二区| 久久久久久国产a免费观看| 亚洲欧美清纯卡通| 国产色爽女视频免费观看| 国产毛片a区久久久久| 国产av在哪里看| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 在线播放国产精品三级| 欧美最新免费一区二区三区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 我要搜黄色片| 久久精品国产亚洲网站| 国产av麻豆久久久久久久| 全区人妻精品视频| 久久久久久久久大av| 91在线精品国自产拍蜜月| 久9热在线精品视频| 级片在线观看| 一级黄色大片毛片| 久久国产乱子免费精品| 狠狠狠狠99中文字幕| 免费在线观看成人毛片| 国产午夜精品论理片| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲av一区综合| 欧美xxxx性猛交bbbb| 国产探花在线观看一区二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美一区二区亚洲| 成人二区视频| 国产精品98久久久久久宅男小说| 国产精品一及| 久久久色成人| 老司机深夜福利视频在线观看| 欧美又色又爽又黄视频| 国产精品女同一区二区软件 | 日韩人妻高清精品专区| 床上黄色一级片| 俺也久久电影网| 亚洲第一电影网av| 99视频精品全部免费 在线| 国内揄拍国产精品人妻在线| 午夜老司机福利剧场| 日本在线视频免费播放| 日韩欧美国产在线观看| 日本黄色视频三级网站网址| 午夜a级毛片| 嫩草影院精品99| 欧美xxxx性猛交bbbb| 免费一级毛片在线播放高清视频| 永久网站在线| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 精品午夜福利在线看| 亚洲国产欧美人成| 狠狠狠狠99中文字幕| 久99久视频精品免费| 国产精品野战在线观看| 中文字幕av成人在线电影| 99在线人妻在线中文字幕| 禁无遮挡网站| 99热这里只有是精品50| 91久久精品电影网| 免费高清视频大片| 亚洲欧美激情综合另类| 韩国av一区二区三区四区| 97碰自拍视频| 亚洲无线在线观看| 能在线免费观看的黄片| 人人妻人人看人人澡| 97碰自拍视频| 丰满人妻一区二区三区视频av| 免费大片18禁| 高清在线国产一区| 国产极品精品免费视频能看的| 亚洲av免费在线观看| 免费观看的影片在线观看| 国产色爽女视频免费观看| 久久精品人妻少妇| 一级毛片久久久久久久久女| 欧美高清性xxxxhd video| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 草草在线视频免费看| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 性插视频无遮挡在线免费观看| 老女人水多毛片| 中文亚洲av片在线观看爽| 国产成人福利小说| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩欧美在线乱码| 婷婷色综合大香蕉| 国产真实乱freesex| 真人做人爱边吃奶动态| 2021天堂中文幕一二区在线观| 久久久精品欧美日韩精品| 成年免费大片在线观看| 亚洲色图av天堂| 99久久精品热视频| 亚洲av免费高清在线观看| 日韩大尺度精品在线看网址| av在线观看视频网站免费| 日本免费a在线| 成人亚洲精品av一区二区| 韩国av一区二区三区四区| 一级黄色大片毛片| 一级黄色大片毛片| 欧美又色又爽又黄视频| 深夜a级毛片| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 精品午夜福利在线看| 极品教师在线免费播放| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 国产精品久久久久久av不卡| 欧美成人a在线观看| 国产欧美日韩一区二区精品| 很黄的视频免费| 精品日产1卡2卡| 级片在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 2021天堂中文幕一二区在线观| 日本爱情动作片www.在线观看 | 内地一区二区视频在线| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看| 亚洲美女视频黄频| 国产精品久久视频播放| 亚洲三级黄色毛片| 国产三级在线视频| 一个人免费在线观看电影| 最新在线观看一区二区三区| 一个人看的www免费观看视频| 亚洲美女视频黄频| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲性久久影院| 午夜福利欧美成人| 禁无遮挡网站| 在线国产一区二区在线| 成人三级黄色视频| 最后的刺客免费高清国语| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲成人久久性| 露出奶头的视频| 久久久久性生活片| 国产黄片美女视频| 久久精品综合一区二区三区| 欧美高清性xxxxhd video| 免费观看在线日韩| 国产av不卡久久| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 国产主播在线观看一区二区| 国产精品久久久久久av不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 精品午夜福利在线看| 国产成人av教育| 欧美人与善性xxx| 少妇人妻一区二区三区视频| 久久久久九九精品影院| 级片在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 又黄又爽又免费观看的视频| 国产欧美日韩精品亚洲av| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人国产综合亚洲| 亚洲精品成人久久久久久| 好男人在线观看高清免费视频| 看黄色毛片网站| 国产免费av片在线观看野外av| 久9热在线精品视频| 成人永久免费在线观看视频| 免费av毛片视频| 国产亚洲欧美98| 成年女人看的毛片在线观看| 日韩强制内射视频| 久久精品国产亚洲网站| 日本黄色视频三级网站网址| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲中文日韩欧美视频| 热99在线观看视频| 极品教师在线视频| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 国产色婷婷99| av在线观看视频网站免费| 天天躁日日操中文字幕| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 婷婷精品国产亚洲av在线| 天美传媒精品一区二区| 国产欧美日韩精品一区二区| 日韩中字成人| 我要搜黄色片| 男女之事视频高清在线观看| 久久久久精品国产欧美久久久| 午夜福利高清视频| 色哟哟·www| 啦啦啦啦在线视频资源| 欧美三级亚洲精品| 免费看美女性在线毛片视频| 成人美女网站在线观看视频| 亚洲精品在线观看二区| 午夜福利视频1000在线观看| 特级一级黄色大片| 亚洲熟妇熟女久久| 中文字幕精品亚洲无线码一区| 亚洲成av人片在线播放无| 少妇被粗大猛烈的视频| 三级毛片av免费| 看十八女毛片水多多多| 长腿黑丝高跟| 国产久久久一区二区三区| 国产精品久久久久久久电影| 日韩强制内射视频| 级片在线观看| 亚洲美女黄片视频| 国内精品宾馆在线| 精品不卡国产一区二区三区| 露出奶头的视频| 日本在线视频免费播放| 亚洲乱码一区二区免费版| 夜夜爽天天搞| 免费av观看视频| 亚洲av.av天堂| 韩国av在线不卡| 在线观看66精品国产| 亚洲国产欧美人成| 黄色丝袜av网址大全| 两个人的视频大全免费| or卡值多少钱| 国产av一区在线观看免费| 欧美+亚洲+日韩+国产| 亚洲黑人精品在线| 成人欧美大片| 少妇丰满av| 乱系列少妇在线播放| 伊人久久精品亚洲午夜| 国产精品爽爽va在线观看网站| 亚洲第一电影网av| 国产 一区精品| 精品欧美国产一区二区三| 赤兔流量卡办理| 老熟妇仑乱视频hdxx| 亚洲精品色激情综合| 亚洲欧美日韩卡通动漫| 老司机福利观看| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产精品福利在线免费观看| 我要搜黄色片| 久久草成人影院| 黄色配什么色好看| 亚洲精品成人久久久久久| 啪啪无遮挡十八禁网站| 国产在视频线在精品| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 午夜福利在线在线| av在线天堂中文字幕| 欧美丝袜亚洲另类 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 婷婷亚洲欧美| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产 一区 欧美 日韩| 波多野结衣高清无吗| 久久午夜福利片| 欧美高清成人免费视频www| 成人国产麻豆网| 久久亚洲真实| 看十八女毛片水多多多| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 国产又黄又爽又无遮挡在线| 久久国产乱子免费精品| bbb黄色大片| 国产视频一区二区在线看| 欧美日韩乱码在线| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91久久精品国产一区二区成人| 特级一级黄色大片| 成人午夜高清在线视频| 亚洲av二区三区四区| 99国产精品一区二区蜜桃av| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 日本爱情动作片www.在线观看 | 亚洲欧美日韩无卡精品| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 国产成人a区在线观看| 久久久久久久久久黄片| 91精品国产九色| av国产免费在线观看| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产午夜福利久久久久久| 欧美黑人巨大hd| 国产探花极品一区二区| 国产精品三级大全| 嫩草影院精品99| 久久99热这里只有精品18| 亚洲av第一区精品v没综合| 精品久久国产蜜桃| 热99re8久久精品国产| 国产亚洲精品av在线| 亚洲成人精品中文字幕电影| 亚洲五月天丁香| 老女人水多毛片| 12—13女人毛片做爰片一| 久久精品影院6| 国产精品美女特级片免费视频播放器| 看黄色毛片网站| 精品国产三级普通话版| 亚洲最大成人手机在线| 午夜免费男女啪啪视频观看 | 十八禁国产超污无遮挡网站| 91麻豆精品激情在线观看国产| 精品久久久久久久末码| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 亚洲最大成人手机在线| 大型黄色视频在线免费观看| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 日韩欧美 国产精品| 校园人妻丝袜中文字幕| 亚洲成av人片在线播放无| 国产黄a三级三级三级人| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 午夜免费成人在线视频| 国产中年淑女户外野战色| 久久精品国产亚洲av涩爱 | 日韩欧美在线二视频| 日韩中文字幕欧美一区二区| 欧美成人一区二区免费高清观看| 国产精品1区2区在线观看.| 成人午夜高清在线视频| 免费看光身美女| 乱人视频在线观看| netflix在线观看网站| 国国产精品蜜臀av免费| 亚洲av成人精品一区久久| 91麻豆精品激情在线观看国产| 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 男人舔女人下体高潮全视频| 一级av片app| 亚洲真实伦在线观看| 一进一出抽搐动态| 国语自产精品视频在线第100页| 少妇裸体淫交视频免费看高清| 国产精品不卡视频一区二区| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 99热这里只有是精品50| 国产高清视频在线观看网站| 十八禁国产超污无遮挡网站| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲不卡免费看| 男女下面进入的视频免费午夜| 国产单亲对白刺激| 午夜福利18| xxxwww97欧美| 人人妻人人澡欧美一区二区| 麻豆国产av国片精品| 成人特级黄色片久久久久久久| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 白带黄色成豆腐渣| 夜夜爽天天搞| 国产精品人妻久久久久久| 国产黄a三级三级三级人| 国内精品久久久久精免费| 国产精品一及| 国产高清三级在线| 亚洲18禁久久av| 老师上课跳d突然被开到最大视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲图色成人| 国产私拍福利视频在线观看| 最新在线观看一区二区三区| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品久久电影中文字幕| 国产精品一及| 精品久久久久久久久久免费视频| 99热只有精品国产| 欧美一级a爱片免费观看看| 女人被狂操c到高潮| 在现免费观看毛片| 免费av观看视频| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 国产淫片久久久久久久久| 免费看光身美女| 亚洲熟妇熟女久久| 欧美成人免费av一区二区三区| 日本黄大片高清| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 制服丝袜大香蕉在线| 国产成人一区二区在线| 噜噜噜噜噜久久久久久91| 人人妻人人看人人澡| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 18禁在线播放成人免费| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美成人性av电影在线观看| 亚洲经典国产精华液单| 高清毛片免费观看视频网站| 国产精品亚洲一级av第二区| 美女cb高潮喷水在线观看| 国产一级毛片七仙女欲春2| 一夜夜www| 成人国产综合亚洲| 欧美成人a在线观看| 亚洲成人免费电影在线观看| 日本欧美国产在线视频| 两个人的视频大全免费| 啪啪无遮挡十八禁网站| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 日本黄色视频三级网站网址| 久9热在线精品视频| 两个人的视频大全免费| 国产亚洲精品久久久com| 动漫黄色视频在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 丰满的人妻完整版| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 国内精品美女久久久久久| 亚洲av第一区精品v没综合| 国产精品电影一区二区三区| 精品人妻视频免费看| 精品人妻熟女av久视频| 亚洲色图av天堂| 丰满人妻一区二区三区视频av| 国产成人aa在线观看| 女同久久另类99精品国产91| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 老司机福利观看| 午夜福利在线在线| 亚洲最大成人手机在线| 少妇熟女aⅴ在线视频| 欧美精品国产亚洲| 亚洲不卡免费看| 婷婷六月久久综合丁香| 久久亚洲真实| 日日摸夜夜添夜夜添av毛片 | 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品,欧美在线| 久久久精品大字幕| 哪里可以看免费的av片| 联通29元200g的流量卡| 床上黄色一级片| 亚洲中文日韩欧美视频| av在线天堂中文字幕| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 国产高清有码在线观看视频| 国产精品乱码一区二三区的特点| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产黄片美女视频| 99riav亚洲国产免费| 999久久久精品免费观看国产| 欧美色欧美亚洲另类二区| 高清日韩中文字幕在线| 日本免费一区二区三区高清不卡| 老司机福利观看| 亚洲内射少妇av| 日韩,欧美,国产一区二区三区 | av国产免费在线观看| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲av熟女| 国产高清视频在线播放一区| 内地一区二区视频在线| 91久久精品国产一区二区三区| 三级男女做爰猛烈吃奶摸视频| 很黄的视频免费| 色吧在线观看| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲欧美日韩高清专用| 少妇丰满av| 波多野结衣巨乳人妻| 中国美女看黄片| 久久欧美精品欧美久久欧美| 国产综合懂色| 偷拍熟女少妇极品色| 永久网站在线| 女的被弄到高潮叫床怎么办 | 日韩精品中文字幕看吧| 一进一出抽搐动态| 免费av毛片视频| 欧美日韩国产亚洲二区| 免费观看的影片在线观看| 亚洲成人中文字幕在线播放| 免费在线观看日本一区| 嫩草影院入口| 2021天堂中文幕一二区在线观| 亚洲av成人精品一区久久| av视频在线观看入口| 久久久久久九九精品二区国产| 亚洲图色成人| 偷拍熟女少妇极品色| av在线蜜桃| 日韩欧美在线二视频| 最近视频中文字幕2019在线8| 精品不卡国产一区二区三区| 又爽又黄无遮挡网站| 九色成人免费人妻av| 亚洲专区国产一区二区| 啦啦啦啦在线视频资源| 少妇的逼好多水| 看十八女毛片水多多多| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 国产精品一区二区三区四区久久| 国产精品国产高清国产av| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 精品乱码久久久久久99久播| 欧美日韩瑟瑟在线播放| 99热6这里只有精品| 欧美黑人欧美精品刺激| 日韩精品中文字幕看吧| 韩国av在线不卡| 国产高清视频在线观看网站| 国产白丝娇喘喷水9色精品| aaaaa片日本免费| 十八禁网站免费在线| 婷婷精品国产亚洲av| aaaaa片日本免费| 国产亚洲91精品色在线| 波野结衣二区三区在线| 久久久国产成人精品二区| АⅤ资源中文在线天堂| 国产高清不卡午夜福利| 久久久国产成人精品二区| 久久久久久国产a免费观看| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 老司机福利观看| 我要看日韩黄色一级片| 亚洲成人久久性| 日韩欧美国产在线观看| 欧美成人性av电影在线观看| 人人妻,人人澡人人爽秒播|