肺腺癌表皮生長因子受體基因突變與血清腫瘤標志物的關系

鄢麗敏 張志勇 閆繼東 劉麗云 夏慶安 崔永興

唐山市工人醫(yī)院1病理科，2胸外科（河北唐山 063000）

肺癌是我國發(fā)病率和死亡率均占首位的惡性腫瘤，肺腺癌是其中最常見的組織學類型，約占肺癌的半數［1-2］。隨著對肺腺癌分子生物學機理的深入研究，以表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）為靶點的分子靶向藥物在治療中的作用日漸突顯，可相應延長患者無進展生存時間［3］。但由于臨床上開展基因檢測的醫(yī)院有限以及昂貴的檢測和用藥費用，國內僅少部分肺腺癌患者接受EGFR基因檢測和靶向治療。此外，血清腫瘤標志物是預測患者術后復發(fā)、轉移以及化療療效的重要指標［4］。有研究［4-5］顯示，肺腺癌患者血清癌胚抗原（carcinoembryonic antigen，CEA）水平與EGFR突變有關，還有人提出血清CEA水平升高提示患者EGFR抑制劑耐藥。但是相關研究的樣本量較小，并且多針對手術標本，而大多肺癌患者就診時已是晚期，喪失手術機會。本文選取我院病理科2015年8月至2017年7月期間行EGFR基因突變及血清腫瘤標志物檢測的162例不同標本類型的肺腺癌患者，進一步分析EGFR基因突變與血清標志物CEA、甲胎蛋白（alpha fetal protein，AFP）、神經元特異性烯醇化酶（neuron spe?cific enolase，NSE）、糖類抗原（carbohydrate antigen 19?9，CA19?9）水平之間的關系。從而為肺腺癌患者行EGFR基因檢測及對應靶向治療提供相對優(yōu)勢人群。

1 資料與方法

1.1 一般資料收集2015年8月至2017年7月于河北省唐山市工人醫(yī)院病理科行EGFR基因突變檢測的肺腺癌患者。患者送檢病理標本包含手術切除標本、支氣管鏡活檢、肺穿刺活檢、遠處轉移部位取檢（例如轉移淋巴結穿刺、腦轉移癌灶切除標本等）以及胸水。

1.2 EGFR基因檢測EGFR基因突變檢測在我院病理科分子實驗室進行。采用突變擴增阻滯系統（amplification refractory mutation system，ARMS）方法對EGFR基因的18至21號外顯子的41個位點進行檢測。檢測選用美國羅氏（Cobas EGFR Mutation Test V2）檢測試劑盒，操作嚴格按照產品說明書進行，應用陰性、陽性及空白對照進行質控。所有標本檢測前均進行石蠟包埋切片，并HE染色，進一步評估細胞含量，確保每例標本細胞含量≥100。

1.3 血清腫瘤標志物檢測所有腫瘤標志物檢測均采集患者EGFR基因突變檢測前清晨空腹靜脈血標本。采用電化學發(fā)光免疫法檢測血清CEA、AFP、NSE、CA19?9情況，臨床正常值分別為CEA：0 ～ 4.7 ng/mL，CA19?9：0 ～ 34 U/mL，AFP：0 ～ 7ng/mL，NSE：0 ～ 29.13 ng/mL。

1.4 統計學分析采用統計學軟件SPSS 20.0對數據進行統計學分析。EGFR突變與各項臨床資料的關系，EGFR突變與血清腫瘤標志物及CEA濃度梯度之間的關系采用χ2檢驗，設定P≤0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 EGFR基因突變檢測結果共161例肺腺癌患者進行了EGFR基因突變檢測，陰性88例，陽性73例，陽性率45.34%。其中21外顯子L858R點突變42例（占陽性例數的57.53%），19外顯子缺失22例（占陽性例數的30.14%），20外顯子插入突變3例，18G719X突變1例，同時含上述兩種突變者5例（圖1）。不同標本類型之間，EGFR基因突變率差異無統計學意義（P=0.056）（表1）。

2.2 EGFR基因突變與血清腫瘤標志物的關系如表2所示，血清CEA水平高于正常值的患者，EGFR基因突變率較高（χ2=7.207，P=0.007），而其他血清腫瘤標志物，包括CA19?9、AFP、NSE在EGFR基因突變陽性與陰性間差異無統計學意義（P＞0.05）。

圖1 EGFR基因突變檢測結果Fig.1 EGFR mutation status of the 161 studed patients

表1 不同標本類型的EGFR基因突變情況Tab.1 EGFR mutation status in different specimens type（n=161）

表2 EGFR基因突變與血清腫瘤標志物的關系Tab.2 The relationship of the EGFR mutation status and serum tumor markers

2.3 EGFR基因突變與CEA水平梯度的關系如表3所示，依照血清CEA水平，將患者分成CEA ≤ 5 ng/mL、5 ng/mL＜CEA≤20 ng/mL、20 ng/mL＜CEA≤50 ng/mL、CEA＞50 ng/mL四組，EGFR突變率分別為37.96%、43.48%、66.67%、80.00%，且四組之間差別有統計學意義（χ2=12.428，P=0.006）。隨著血清腫瘤標志物CEA水平的升高，EGFR基因突變率呈現上升趨勢。

表3 EGFR基因突變與CEA水平梯度的關系Tab.3 The relationship of the EGFR mutation status and serum CEA levels

3 討論

EGFR基因突變是NSCLC靶向治療的重要靶點之一，美國國立綜合癌癥網絡（National Compre?hensive Cancer Network，NCCN）指南提出：對于晚期、復發(fā)或轉移性肺腺癌患者均行EGFR基因突變檢測［6］。EGFR基因突變是一種腫瘤特異性體細胞遺傳改變，其突變僅見于腫瘤組織，而在正常組織中則不表達［7］。

根據以往文獻［8-9］報道，在亞洲地區(qū)，約半數肺腺癌患者存在EGFR基因突變，而最常見的突變類型是19外顯子缺失和21外顯子L858R點突變［10］。在本項研究中，EGFR突變陽性率為45.34%（73/161），其中21外顯子L858R點突變42例，19外顯子缺失22例，分別占突變總數的57.53%（42/73）和30.14%（22/73）。與既往文獻報道相符。

手術切除樣本是進行EGFR基因檢測的最佳樣本資源，而很多肺腺癌患者在局部取材明確診斷時已失去手術機會，因而無法獲取手術樣本，因此有必要選擇更多的樣本類型，來開拓EGFR基因檢測途徑。與以往研究不同，筆者利用的樣本類型包括手術標本、支氣管鏡、肺穿刺活檢標本、轉移性腫瘤以及胸水石蠟包埋標本，而不同樣本類型之間，EGFR陽性率無顯著性差別。由此可見，在手術標本無法獲得的時候，活檢組織、轉移性腫瘤組織以及細胞石蠟包埋標本都可以作為EGFR基因檢測的樣本來源［11-13］。

CEA是一種酸性糖蛋白，在肺腺癌中表達較多，可以使腫瘤細胞在微循環(huán)中集聚，同時具有免疫抑制作用，致使腫瘤轉移機會增加［14］。近年來，有文獻報道了血清CEA與肺癌組織EGFR基因突變的關系。CAI研究了296例手術肺腺癌患者血清CEA水平與EGFR基因突變之間的關系，發(fā)現血清CEA值較高的患者EGFR突變率也較高，當CEA≥20 ng/mL 時，EGFR 的突變率為 65.47%［14］。徐琳等［15］對78例NSCLC患者的EGFR基因突變與CEA表達相關性分析，發(fā)現CEA高于正常值時，患者具有更高的EGFR基因突變率，而與CA125、CA19?9陽性表達無相關性。張連民等［16］的研究認為CEA水平是預測EGFR基因突變的獨立因素，并且隨著CEA水平的增高，EGFR基因突變率也逐步上升。本文比較了肺腺癌患者EGFR基因突變與肺癌常用血清腫瘤標志物CEA、CA19?9、AFP、NSE之間的關系，發(fā)現CEA高于正常值的患者EGFR突變率較高，且隨著CEA水平增高，EGFR基因突變率也出現上升的趨勢（血清CEA≤5 ng/mL、5＜CEA≤20 ng/mL、20＜CEA≤50 ng/mL及CEA＞50 ng/mL時的EGFR陽性率分別為37.96%、43.48%、66.67%和80.00%）。而其他三項標記物與EGFR突變之間的差異無統計學意義。

日本曾有一項研究對105例應用吉非替尼（EGFR抑制劑）治療的NSCLC患者進行回顧性分析，發(fā)現血清CEA高于正常值的患者對吉非替尼的治療更敏感，生存期更長［17］。筆者推測這與CEA高于正常水平的患者有較高的EGFR突變率有關。

綜上所述，當患者血清CEA水平高于正常值時，EGFR突變的可能性大，并且CEA水平越高，EGFR突變的可能性越大。血清CEA水平增高的患者是EGFR基因檢測的優(yōu)勢人群。在手術標本無法獲得的情況下，活檢組織、轉移性腫瘤組織以及細胞石蠟包埋標本都可以作為EGFR基因檢測的樣本來源。當然，本文病例僅來源于我院，研究數量有限，在以后的工作中，筆者會及時增補數據，同時增加對血液樣本的EGFR基因突變檢測，做更為全面的研究及分析，為臨床研究提供更好的參考數據。

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