p-JAK2蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義

譚豆豆， 馬 蓉， 劉 濤， 劉 清， 鄭樹濤， 周 劍， 陳玉梅， 申銅雪， 張 瀟， 盧曉梅

(新疆醫(yī)科大學(xué)1附屬腫瘤醫(yī)院； 2臨床醫(yī)學(xué)研究院， 烏魯木齊 830011)

食管癌是消化道最常見的惡性腫瘤之一，我國(guó)食管癌在全部惡性腫瘤中發(fā)病率排第3位，死亡率排第4位[1]。食管癌最常見的組織分型是鱗狀細(xì)胞癌[2]，其惡性程度高且預(yù)后差，5 a生存率不足20%[3]。由于大部分病例都在中晚期被發(fā)現(xiàn)而又沒有理想的治療策略[4]，因此探討ESCC的發(fā)病機(jī)制，探索新的治療靶點(diǎn)就顯得尤為重要。

酪氨酸激酶2(Janus kinase 2， JAK2)是Janus家族的非受體蛋白家族的成員，通過多種細(xì)胞因子受體調(diào)節(jié)JAK2/STAT3信號(hào)通路[5]，而磷酸化的JAK2(phosphorylated JAK2，p-JAK2)是其活化形式并在大多數(shù)的腫瘤進(jìn)展中都起著重要的作用[5-7]。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)食管鱗狀細(xì)胞癌組織芯片中p-JAK2的表達(dá)，并結(jié)合臨床病理特征，探討食管鱗狀細(xì)胞癌組織中p-JAK2的表達(dá)與患者預(yù)后及臨床病理參數(shù)的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1臨床組織樣本食管癌組織芯片 (購自上海芯超生物科技有限公司)，其中食管鱗狀細(xì)胞癌組織標(biāo)本93例，癌旁正常組織85例，其中有8例食管癌組織無癌旁陰性對(duì)照組織。93例食管癌組織中，男性77例，女性16例，年齡49～85歲，平均年齡65.75歲。食管癌組織浸潤(rùn)肌層22例，浸潤(rùn)外膜層64例。根據(jù)美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)2009年第7版TNM分期標(biāo)準(zhǔn)，1期11例，2期37例，3期40例，5例TNM分期缺失。發(fā)現(xiàn)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移49例，未發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移44例。

1.2主要試劑p-JAK2兔抗人單克隆抗體(美國(guó)Abcam公司)，SP試劑盒、DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物制品有限公司。

1.3免疫組化染色方法及結(jié)果判定食管癌組織芯片常規(guī)脫蠟，3%H2O2抑制內(nèi)源性過氧化物酶，采用0.01 mol/L檸檬酸鈉緩沖液微波加熱修復(fù)抗原。免疫組化二步法操作步驟參照試劑盒說明書進(jìn)行。p-JAK2工作液濃度為1：200。根據(jù)半定量積分法[8]及雙盲法判讀p-JAK2表達(dá)，每個(gè)組織隨機(jī)選取10個(gè)高倍視野觀察，按照染色強(qiáng)度分為：(-)、(+)、(++)、(+++)，分別計(jì)為0、1、2、3分；按照陽性細(xì)胞占腫瘤細(xì)胞總數(shù)的百分比分為：<5%計(jì)0分，5%～25%計(jì)1分，26%～50%計(jì)2分，51%～75%計(jì)3分，≥75%計(jì)4分。將兩項(xiàng)結(jié)果相加，0～1分判為陰性，≥2分判為陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理所得結(jié)果數(shù)據(jù)采用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，食管鱗癌組織和癌旁陰性組織p-JAK2表達(dá)及p-JAK2表達(dá)與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析比較采用χ2檢驗(yàn)，單因素生存率分析則采用Kaplan-Meier檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1p-JAK2表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的相關(guān)性根據(jù)免疫組織化學(xué)SP法結(jié)果，p-JAK2陽性表達(dá)主要定位于細(xì)胞核，呈黃色或棕黃色(圖1)。食管鱗癌組織p-JAK2的陽性表達(dá)率(76.3%)明顯高于癌旁正常組織(54.1%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。另外，p-JAK2表達(dá)與患者病理分級(jí)(P=0.044)呈顯著相關(guān)，并且p-JAK2陽性率隨著病理分級(jí)的升高出現(xiàn)下降趨勢(shì)。在食管組織中p-JAK2的表達(dá)與患者的性別(P=0.644)、年齡(P=0.835)、腫瘤大小(P=0.404)、病理形態(tài)(P=0.357)、浸潤(rùn)深度(P=0.430)、臨床分期(P=0.428)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P=0.389)的相關(guān)性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05) (表1)。

表1 p-JAK2表達(dá)與ESCC患者臨床病理參數(shù)的相關(guān)性分析/例

2.2生存分析93例食管癌患者手術(shù)時(shí)間：2009年1月～2010年12月，隨訪時(shí)間：2015年7月，隨訪4.6～6.5年，半數(shù)生存期32個(gè)月。從2009年～2015年，93例ESCC患者存活26例，死亡60例，失訪7例，5 a生存率約為36%。生存分析顯示，食管癌組織中p-JAK2陽性率與患者生存期無明顯相關(guān)性(P=0.178)(圖2)。

3 討論

食管癌是消化道高侵襲惡性腫瘤之一，最常見的組織分型是鱗狀細(xì)胞癌[2]。雖然食管癌的診斷和治療有了很大進(jìn)展，但患者總體預(yù)后不佳，5 a生存率低[3]。食管癌易發(fā)生轉(zhuǎn)移，是死亡率高的重要原因[9]。研究發(fā)現(xiàn)，JAK2不僅作為原激酶介導(dǎo)STAT3的磷酸化，而且在大多數(shù)腫瘤活化中都起著至關(guān)重要的作用[6]。最新研究已表明JAK2/STAT3信號(hào)通路與人類腫瘤干細(xì)胞的維持有密切關(guān)系，并已報(bào)道JAK2/STAT3信號(hào)通路參與誘導(dǎo)肝臟腫瘤干細(xì)胞的多潛能因子Nanog和化學(xué)抗性表型[10]，在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中JAK/STAT3通路的激活可以維持腫瘤干細(xì)胞的表型和致瘤性[5]。相反，在乳腺癌中阻斷JAK2激活將引起CD44+/CD24-腫瘤干細(xì)胞的減少和體內(nèi)致瘤性的喪失[7]。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，在多種惡性腫瘤中中斷JAK2/STAT3信號(hào)通路的激活將會(huì)抑制腫瘤的致瘤性及進(jìn)展。

本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)食管鱗癌及癌旁正常組織中p-JAK2蛋白表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，食管鱗癌組織中p-JAK2陽性表達(dá)率明顯高于癌旁陰性組織(P<0.05)，提示在食管鱗狀細(xì)胞癌中p-JAK2表達(dá)上調(diào)可能參與食管癌的發(fā)生及進(jìn)展。同時(shí)發(fā)現(xiàn)，p-JAK2表達(dá)與食管癌分化程度(P=0.044)呈顯著相關(guān)，并且p-JAK2陽性率隨著分化程度的降低出現(xiàn)下降趨勢(shì)，即p-JAK2陽性率隨著腫瘤惡性程度的升高而降低，進(jìn)一步提示在食管癌發(fā)生早期，JAK2磷酸化水平較高，以此來激活JAK2/STAT3信號(hào)通路參與食管癌的進(jìn)展。此結(jié)果與已有文獻(xiàn)報(bào)道一致[11-13]。本研究還發(fā)現(xiàn)p-JAK2表達(dá)以定位于細(xì)胞核為主，也有少量在胞漿表達(dá)，提示可能存在p-JAK2活化形式入核參與核內(nèi)基因或蛋白表達(dá)調(diào)控。食管鱗狀細(xì)胞癌組織中p-JAK2異常表達(dá)提示JAK2/STAT3信號(hào)通路可能發(fā)生改變，其可能與食管鱗癌的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。

綜上所述，p-JAK2在食管癌組織中高表達(dá)，并與腫瘤分化程度相關(guān)，p-JAK2在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色。但本研究只限于免疫組化水平的檢測(cè)，p-JAK2與食管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制和細(xì)胞水平研究還有待于進(jìn)一步證實(shí)。

參考文獻(xiàn):

[1] CHEN W, ZHENG R, BAADE P D, et al. Cancer statistics in China, 2015[J].CA Cancer J Clin,2016, 66(2):115-132.

[2] GUPTA B, KUMAR N. Worldwide incidence,mortality and time trends for cancer of the oesophagus[J]. Eur J Cancer Prev,2017, 26(2):107-118.

[3] ZHANG L, MA J, HAN Y ,et al. Targeted therapy in esophageal cancer[J]. Expert Rev Gastroenterol Hepatol, 2016, 10(5):595-604.

[4] AJANI J A, D′AMICO T A, ALMHANNA K, et al. Esophageal and esophagogastric junction cancers, version 1.2015 [J]. J Natl Compr Canc Netw,2015, 13(2):194-227.

[5] GURYANOVA O A, WU Q, CHENG L, et al. Nonreceptor tyrosine kinase BMX maintains renewal self- and tumorigenic potential of glioblastoma stem cells by activating STAT3[J]. Cancer Cell,2011,19(4):498-511.

[6] YU H, PARDOLL D, JOVE R. STATs in cancer inflammation and immunity: a leading role for STAT3[J]. Nat Rev Cancer,2009, 9(11):798-809.

[7] MAROTTA LL, ALMENDRO V, MARUSYK A, et al. The JAK2/STAT3 signaling pathway is required for growth of CD44(+)CD24(-) stem cell-like breast cancer cells in human tumors[J]. J Clin Invest,2011,121(7):2723-2735.

[8] 趙志華，田研， 陳奎生．多發(fā)性骨髓瘤中c-myc和MDM2蛋白的表達(dá)及其臨床意義[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2017,33(2):165-168.

[9] NJEI B, MCCARTY T R, BIRK J W. Trends in esophageal cancer survival in United States adults from 1973 to 2009: a SEER database analysis[J]. J Gastroenterol Hepatol,2016 , 31(6):1141-1146.

[10] LEE T K, CASTILHO A, CHEUNG V C, et al. CD24(+) liver tumor-initiating cells drive self-renewal and tumor initiation through STAT3-mediated NANOG regulation[J]. Cell Stem Cell,2011, 9(1):50-63.

[11] IKEZOE T, KOJIMA S, FURIHATA M, et al. Expression of p-JAK2 predicts clinical outcome and is a potential molecular target of acute myelogenous leukemia[J]. Int J Cancer,2011, 129(10):2512-2521.

[12] WU H, HUANG M, CAO P, et al. MiR-135a targets JAK2 and inhibits gastric cancer cell proliferation[J]. Cancer Biol Ther,2012, 13(5):281-288.

[13] CHEN X, YING Z, LIN X, et al. Acylglycerol kinase augments JAK2/STAT3 signaling in esophageal squamous cells[J]. J Clin Invest,2013, 123(6):2576-2589.