HPLC法測定毛蕊花糖苷原料藥中主成分的含量

毛樂靜， 霍仕霞， 譚 雪， 孔 征， 閆 明

(1新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院， 烏魯木齊 830011； 2新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所， 烏魯木齊 830049)

毛蕊花糖苷又名類葉升麻苷、麥角甾苷，在植物中分布廣泛，如肉蓯蓉[1]、向日葵列當(dāng)[2]、小葉丁香[3]等。毛蕊花糖苷為水溶性的苯乙醇苷類化合物，現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明毛蕊花糖苷具有抗衰老[4]、調(diào)節(jié)內(nèi)分泌[5-6]、增強(qiáng)免疫力[7-8]、抗老年癡呆[9-10]等作用。本課題組前期研究已從新疆管花肉蓯蓉中提取分離純化得到了高純度的毛蕊花糖苷原料藥,本研究采用HPLC法測定原料藥中毛蕊花糖苷含量，為毛蕊花糖苷原料藥質(zhì)量控制和開發(fā)利用提供依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1儀器CBM-20 AB型高效液相色譜儀(日本島津)，SQP-224-1CN型電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)，SK 8210 HP型超聲清洗器(上海冠特超聲儀器有限公司)，SZ-93型自動雙重純水蒸餾器(上海亞榮生化儀器廠)。

1.2試藥毛蕊花糖苷對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號111530-201208)，甲醇(美國Sigma-Aldrich公司，批號20150511)，甲酸(天津市富宇精細(xì)化工有限公司，批號20140818),毛蕊花糖苷原料藥(新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)藥研究所實(shí)驗室自制，批號20130228、20130311、20130323、20130405、20130417、20130426、20130511、20130520、20130526、20130611)。

2 方法與結(jié)果

2.1對照品溶液的制備稱取毛蕊花糖苷對照品20 mg，置于25 mL容量瓶中，用流動相(甲醇-0.2%甲酸溶液= 35∶65)定容至刻度，搖勻，制成濃度為0.800 0 mg/mL的對照品溶液。吸取1 mL至10 mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2供試品溶液的制備取毛蕊花糖苷原料藥20 mg，置于100 mL量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，制成濃度為0.200 0 mg/mL的供試品溶液。吸取5 mL至10 mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.3色譜條件采用BDS Hypersil C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱，檢測波長：330 nm，流動相∶甲醇-0.2%甲酸水溶液(35∶65)，流速1.0 mL/min，柱溫30 ℃；在該色譜條件下，毛蕊花糖苷分離度大于1.5，理論板數(shù)大于3 000，與其他組分分離度良好。

2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備分別吸取“2.1”項下對照品溶液適量，制成毛蕊花糖苷濃度分別為0.004 6、0.009 3、0.018 5、0.037 0、0.055 5、0.074 0、0.111 0 mg/mL的溶液，按“2.3”項下方法測定，得毛蕊花糖苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：Y=20 767X-1 329.5，r=0.999 6，在0.004 6～0.111 0 mg/mL濃度范圍內(nèi)，毛蕊花糖苷的濃度與峰面積具有良好的線性關(guān)系。

2.5精密度試驗取供試品(批號20130228)6份，按“2.2”項下方法制備，按“2.3”項下方法測定，得峰面積值分別為2 140 665、2 070 992、2 086 001、2 111 223、2 079 321、2 079 321、2 078 990，平均峰面積為2 094 532，RSD=1.3%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.6穩(wěn)定性試驗取“2.2”項下供試品溶液，在室溫下分別放置0、1、2、4、6、8、12、24、36、48、72、96 h后，按“2.3”項下方法測定，得峰面積值分別為2 140 665、2 134 551、2 132 951、2 124 458、2 115 568、2 068 990，平均峰面積為2 119 514，RSD=1.2%(n=12)，表明供試品溶液在96 h內(nèi)的穩(wěn)定性良好。

2.7檢測限及定量限試驗吸取“2.1”項下對照品溶液，逐級稀釋，當(dāng)信噪比S/N為3時，其檢測濃度為0.120 0 μg/mL；當(dāng)信噪比S/N為10時，其定量限為0.375 0 μg/mL。

2.8回收率試驗稱取已知含量的樣品(批號20130228)適量，共9份，分別置于100 mL容量瓶中，分別加入“2.1”項下對照品溶液適量，用流動相定容至刻度，搖勻，吸取5 mL至10 mL容量瓶中，加流動相溶解定容至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按“2.3”項下方法測定，平均加樣回收率為99.3%,RSD=1.0%,見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=9)

2.9樣品含量測定稱取10批毛蕊花糖苷原料藥，按“2.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.3”項下方法測定，毛蕊花糖苷原料藥中毛蕊花糖苷的平均含量990 mg/g，見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

對毛蕊花糖苷原料藥進(jìn)行含量測定的過程中，首先選擇的流動相參考了2015版《中國藥典》[11]中肉蓯蓉含量測定方法，但其分析時間長，需要梯度洗脫，樣品峰過寬。本研究在其基礎(chǔ)上加以改進(jìn)，最終選擇有機(jī)相與水相比例為35∶65行等度洗脫。該色譜條件下樣品峰形好，理論塔板數(shù)高，分析時間短。通過HPLC法測定毛蕊花糖苷原料藥的含量，旨在為毛蕊花糖苷原料藥質(zhì)控方法的建立奠定基礎(chǔ)，并為后續(xù)工藝研究提供合格的原料藥。

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